張 玲，劉治中，梁 媛，盧賀起，霍素坤，岳廣欣△，陳家旭，黃啟福

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700;2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

溫陽(yáng)解郁方對(duì)母嬰分離/社會(huì)擊敗應(yīng)激小鼠的影響*

張 玲1，劉治中1，梁 媛1，盧賀起1，霍素坤2，岳廣欣1△，陳家旭2，黃啟福2

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700;2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

目的:驗(yàn)證溫陽(yáng)解郁方對(duì)抑郁癥的治療作用并探討其作用機(jī)理。方法:以出生后經(jīng)過(guò)10d母嬰分離的成年C57BL/6J小鼠遭受社會(huì)擊敗應(yīng)激塑造抑郁癥模型，用溫陽(yáng)解郁復(fù)方溫陽(yáng)解郁方進(jìn)行為期4周的治療性干預(yù)，通過(guò)曠場(chǎng)、高架十字迷宮及決擇反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)觀察行為模式變化，運(yùn)用放射免疫法檢測(cè)應(yīng)激后和DEX/CRH實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清皮質(zhì)酮的變化，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)中樞糖皮質(zhì)激素受體(GR)及11β-羥基類固醇脫氫酶2(11β-HSD2)的表達(dá)。結(jié)果:溫陽(yáng)解郁方可明顯改善母嬰分離社會(huì)擊敗應(yīng)激模型小鼠抑郁焦慮行為和促進(jìn)趨向決擇反應(yīng)，可在一定程度上改善下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸功能。結(jié)論:溫陽(yáng)解郁方對(duì)抑郁癥有明顯治療作用。

抑郁癥;母嬰分離;社會(huì)擊敗應(yīng)激;溫陽(yáng)解郁;HPA軸

抑郁癥的病因目前尚不十分清楚，遺傳和心理-社會(huì)因素的相互作用為該病重要的發(fā)病因素。臨床上抑郁癥多有遺傳背景或早年不良經(jīng)歷［1］，并有生活中強(qiáng)大的精神壓力、嚴(yán)重的精神創(chuàng)傷和不愉快的情感體驗(yàn)等事件，以及各種重大生活事件突然發(fā)生或長(zhǎng)期持續(xù)存在所誘發(fā)，即精神疾病發(fā)病的素質(zhì)-應(yīng)激假說(shuō)［2］。由早年不良經(jīng)歷引起的認(rèn)知行為模式的異?？稍斐刹缓线m的生活事件應(yīng)對(duì)方式［3］，從而容易產(chǎn)生社會(huì)沖突和心理沖突，積累日久可導(dǎo)致精神相關(guān)疾病包括抑郁病的發(fā)生［4］。母嬰分離/社會(huì)擊敗應(yīng)激動(dòng)物模型就是根據(jù)以上假說(shuō)進(jìn)行，以母嬰分離作為“素質(zhì)”因素，社會(huì)擊敗應(yīng)激作為“應(yīng)激”因素塑造抑郁癥動(dòng)物模型。前期研究顯示，該模型表現(xiàn)出明顯的焦慮/抑郁行為和社會(huì)退縮現(xiàn)象，HPA軸功能異常，符合抑郁癥動(dòng)物模型的特征(未發(fā)表)。溫陽(yáng)解郁法治療抑郁癥有別于傳統(tǒng)的解郁治療理念，但臨床仍未廣泛應(yīng)用，因此本文從抑郁焦慮行為、決擇行為和 HPA軸穩(wěn)定性3個(gè)方面，通過(guò)溫陽(yáng)解郁復(fù)方對(duì)母嬰分離/社會(huì)擊敗應(yīng)激小鼠模型進(jìn)行干預(yù)，驗(yàn)證溫陽(yáng)解郁法對(duì)抑郁癥小鼠模型的治療作用，以探討其作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 母嬰分離

選用大于12周以上的 C57BL/6J雌鼠按雌雄=4∶1雌雄混居交配，將孕鼠產(chǎn)前單籠飼養(yǎng)，分娩后每窩仔鼠5～8只作為分離對(duì)象，以仔鼠出生作為0d(P0)，分別于P1～P10進(jìn)行母嬰分離。分離時(shí)先將母鼠移出，再將幼鼠移至孵育箱中(30℃ ～32℃)3h/d;結(jié)束時(shí)先將幼鼠移回窩內(nèi)，然后移回母鼠。對(duì)照組仔鼠也按上述過(guò)程處理，分離時(shí)間小于10min。母鼠生仔后喂以繁殖營(yíng)養(yǎng)飼料，P21仔鼠斷乳，普通飼料喂養(yǎng)。

1.2 中藥及試劑

溫陽(yáng)解郁方(XSF)組成:柴胡15g，白芍15g，當(dāng)歸 15g，白術(shù) 15g，茯苓 15g，炙甘草 7.5g，薄荷 2g，郁金 15g，連翹 15g，白芥子 10g，三棱 10g，淫羊藿 15g，巴戟天15g，上方藥物均購(gòu)自同仁堂藥品公司，常規(guī)煎煮水提，低溫真空干燥備用;氟西汀膠囊為禮來(lái)公司生產(chǎn)，地塞米松注射劑由四川迪康藥業(yè)公司生產(chǎn)，促腎上腺素釋放激素(CRH)及DAB為 Sigma公司產(chǎn)品，小鼠皮質(zhì)酮(CORT)放射免疫檢測(cè)試劑盒為美國(guó)DSL公司產(chǎn)品，糖皮質(zhì)激素受體(GR)抗體(M-20)為 Santa Cruz公司產(chǎn)品，11β-羥基類固醇脫氫酶2(11β-HSD2)抗體為Chemicon公司產(chǎn)品，Elite ABC試劑盒及生物素化的免抗綿羊抗體均為Vector產(chǎn)品，行為分析軟件Ethovision3.0為荷蘭Noldus公司產(chǎn)品。

1.3 分組及處理

選用12周～20周體重24g～30g的C57BL/6J雄性小鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。先將母嬰分離小鼠分為母嬰分離/社會(huì)擊敗應(yīng)激組(MD)、溫陽(yáng)解郁方治療組(XSF)和氟西汀治療組(FLU)，再將體重及月齡相當(dāng)?shù)膶?duì)照組小鼠作為正常對(duì)照組(Control)。行為學(xué)檢測(cè)每組12只，血清皮質(zhì)酮檢測(cè)每組20只，免疫組織化學(xué)檢測(cè)每組5只。

將MD、XSF和FLU小鼠分別單獨(dú)引入至CD-1小鼠籠內(nèi)，兩鼠進(jìn)行打斗至C57BL/6J小鼠被擊敗，5min后用透明帶孔的有機(jī)玻璃板將兩鼠隔開(kāi)，同時(shí)保持視覺(jué)和嗅覺(jué)的威脅接觸至次日，每次打斗時(shí)更換不同的攻擊鼠;Control小鼠每2只/籠并隔開(kāi)，每天拿出并放入1次。如此進(jìn)行10d，第11天起XSF和FLU小鼠分別灌服溫陽(yáng)解郁方混懸液(5.25g/kg)和氟西汀混懸液(20mg/kg)，Control和 MD灌服蒸餾水，共治療4周。

1.4 行為學(xué)檢測(cè)

行為學(xué)檢測(cè)均在治療4周后即開(kāi)始進(jìn)行。

1.4.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 將小鼠輕輕放入曠場(chǎng)箱(40cm×40cm×35cm)中央，實(shí)驗(yàn)在強(qiáng)光、白噪聲下進(jìn)行，觀察5min。以曠場(chǎng)箱中心的20cm×20cm為中央?yún)^(qū)，計(jì)算小鼠5min運(yùn)動(dòng)總長(zhǎng)度及中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)。

1.4.2 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn) 高架十字迷宮由開(kāi)放臂(30cm×5cm)、閉合臂(30cm×5cm×15cm)和兩臂匯合的中央?yún)^(qū)(5cm×5cm)組成，距地面50cm。將小鼠放至兩臂交匯中央，實(shí)驗(yàn)在暗光、白噪聲下進(jìn)行，觀察5min，用 Ethovision3.0計(jì)算小鼠開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)、開(kāi)放臂停留時(shí)間、閉合臂進(jìn)入次數(shù)和閉合臂停留時(shí)間。

1.4.3 趨向決擇行為實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)采用自制的T型迷宮，由2個(gè)臂支(30cm×10cm×30cm)、1個(gè)干支(30cm×10cm×30cm)和干支末端的箱體(25cm×25cm×30cm)組成，干支由可拆卸的橋板及其下水槽組成;于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前1d至實(shí)驗(yàn)結(jié)束對(duì)小鼠限食(2g/d)。訓(xùn)練時(shí)，將米粒大小巧克力放置于臂支末端，小鼠放于干支末端的箱內(nèi)，打開(kāi)箱體門，使小鼠通過(guò)T型迷宮的干支，進(jìn)而找到巧克力并食用，計(jì)時(shí)結(jié)束。第1、2天將小鼠成對(duì)訓(xùn)練，第3天開(kāi)始單獨(dú)訓(xùn)練，訓(xùn)練共7d。于第8天將T型迷宮干支更換為短的橋板，橋板下加滿水，使干支末端箱體門與橋板的距離為7cm，使小鼠必須跨過(guò)水面才能到達(dá)干支，計(jì)算小鼠反復(fù)試探并跨過(guò)水面障礙至吃掉巧克力所需的時(shí)間，如5min結(jié)束時(shí)仍未吃掉巧克力，則計(jì)為300s。

1.4.4 回避決擇行為實(shí)驗(yàn) 參照Kobayashi K方法［5］進(jìn)行回避反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，小鼠置于帶電擊實(shí)驗(yàn)裝置T型迷宮(干支末端可電擊)中熟悉 10min～15min后，通道門打開(kāi)并給予聲音刺激(5kHz 75dB)30s，接著0.1mA足部電擊10s，休息120s，如此每天反復(fù)訓(xùn)練10次。如果小鼠聽(tīng)到聲音即逃離箱體，即記為主動(dòng)回避，如此連續(xù)訓(xùn)練7d。訓(xùn)練結(jié)束后的第2天，將電擊電流設(shè)為0.5mA，強(qiáng)化訓(xùn)練3次。次日進(jìn)行回避決擇行為檢測(cè)，更換短的橋板，使干支末端箱體門與橋板的距離為7cm，下加滿水。小鼠置于T型迷宮箱體中，通道門打開(kāi)，并給予聲音刺激(5kHz 75dB)180s而不予電擊，計(jì)算小鼠反復(fù)試探并跨過(guò)水面障礙所需的時(shí)間(Latency of Crossing Obstacle)，如 180s結(jié)束時(shí)仍未逃離箱體，則計(jì)為180s。

1.5 血清皮質(zhì)酮(CORT)檢測(cè)

1.5.1 應(yīng)激后皮質(zhì)酮 在擊敗應(yīng)激結(jié)束4周后，將各組小鼠引入攻擊鼠的籠中，用有機(jī)玻璃板隔開(kāi)，勿使?fàn)幎?，使小鼠處于心理?yīng)激狀態(tài)，30min后在動(dòng)物房用100mg/kg的戊巴比妥鈉快速麻醉，斷頭取血，4℃下放置 2h，待血清明顯析出后，離心(4℃，4000g)30min，吸取上清貯存于－20℃?zhèn)錅y(cè)。

1.5.2 DEX/CRH試驗(yàn) 在實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第2天，于中午11∶00各組小鼠腹腔注射地塞米松4μg/100g，6h后再腹腔注射促腎上腺釋放激素(CRH，5μg/100g)，30min后快速麻醉、斷頭取血，處理方法同上。血清CORT用放射免疫法檢測(cè)，按試劑盒說(shuō)明操作。

1.6 免疫組織化學(xué)染色

治療4周后，于上午 9∶00～11∶00用 1%戊巴比妥鈉腹腔注射將小鼠快速麻醉(100mg/kg)，4%多聚甲醛溶液灌注固定12h，繼以30%蔗糖溶液脫水，恒冷低溫切片，片厚 30μm;切片放入盛有0.01M PBS(pH7.4)的24孔板中平衡30min。以漂浮法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，切片用0.5%TritonX-100處理 30min，繼以 3%H2O2處理 15min，10%正常血清封閉1h，以含有0.5%TritonX-100和2%正常血清的 PBS稀釋一抗(GR稀釋度為1∶750，11β-HSD2為1∶4000)，4℃孵育36h;生物素化的二抗(1∶300)室溫孵育 4h，Elit ABC(1∶100，PBS 稀釋)室溫孵育90min，DAB顯色;以上步驟間用 PBS充分漂洗，切片裱明膠包被的載玻片上，干燥后脫水、透明，中性樹(shù)膠封片。選擇冠狀面相似的切片用NIKON E200型顯微鏡拍攝圖像，用Imagepro Plus 5.0進(jìn)行圖像分析，每組 9～10張切片，除杏仁核中央核(CeA)選取100μm ×100μm 區(qū)域，余均選取 200μm×200μm進(jìn)行圖像分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)

表1顯示，在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，MD小鼠中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)及停留時(shí)間均顯著減少(與 Control比較 P<0.01和 P<0.05)，XSF、FLU較 MD均有一定上調(diào)作用，但均無(wú)顯著性差異。

表1 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠焦慮行為的影響(±s)

表1 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠焦慮行為的影響(±s)

注:與 Control比較: P<0.01;與 MD 比較:#P<0.05，##P<0.01

組 別 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)總長(zhǎng)度(cm) 中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù) 閉合臂停留時(shí)間(s)開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)Control 941.6±185.7 6.4±3.9 187.2±43.7 6.3±3.7 MD 862.0±191.2 2.7±2.5 257.6±30.2 1.5±1.0 XSF 905.6±269.4 4.7±2.2 199.7±32.8## 3.5±2.8*FLU 1461.2±642.2 ## 4.0±3.3 202.0±40.3## 3.0±2.5

在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，MD小鼠在開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)上較正常對(duì)照組顯著降低(P<0.01)，在開(kāi)放臂停留時(shí)間上也較對(duì)照組明顯降低，而在閉合臂停留時(shí)間上顯著增多(P<0.01);溫陽(yáng)解郁方和氟西汀對(duì)上述變化均有明顯的調(diào)節(jié)作用，但以閉合臂停留時(shí)間最為顯著(與MD比較，P<0.01)。

表2顯示，趨向與回避決擇反應(yīng)MD小鼠趨向決擇時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，回避決擇時(shí)間無(wú)顯著變化;XSF可顯著縮短MD小鼠趨向決擇時(shí)間(與MD比較，P<0.01);FLU對(duì)趨向決擇反應(yīng)則無(wú)明顯效果，主動(dòng)回避決擇時(shí)間顯著延長(zhǎng)(與 Control、MD比較均P<0.05)。

表2 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠決擇行為的影響(s，±s)

表2 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠決擇行為的影響(s，±s)

注:與 Control比較: P<0.01;與 MD 比較:#P<0.05，##P<0.01

組 別 n 趨向決擇時(shí)間 回避決擇時(shí)間Control 10 75.9±20.2 27.6±26.9 MD 10 130.1 ±48.9 28.5 ±24.2 XSF 11 75.0±25.9## 28.8±24.3 FLU 10 119.1±64.6 55.6±43.0*#

2.2 血清皮質(zhì)酮

表3顯示，應(yīng)激后MD血清皮質(zhì)酮水平上升幅度顯著降低，XSF、FLU對(duì)此均無(wú)明顯調(diào)節(jié)作用;DEX/CRH實(shí)驗(yàn)后MD皮質(zhì)酮水平顯著抬高(P<0.05)，XSF、FLU仍無(wú)顯著調(diào)節(jié)作用。

表3 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠對(duì)血清皮質(zhì)酮的影響(ng/ml，±s)

表3 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠對(duì)血清皮質(zhì)酮的影響(ng/ml，±s)

注:與 Control比較:*P<0.05， P<0.01

組 別 應(yīng)激后 Dex/CRH實(shí)驗(yàn)Control 349.3±64.4 400.3±85.4 MD 198.5 ±49.2 476.3 ±63.2*XSF 198.7 ±56.6 464.4 ±88.4 FLU 183.4 ±70.0 503.3 ±52.2

2.3 中樞GR的表達(dá)

表4顯示，在伏核(NAc)，MD小鼠 GR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著下降(P<0.05)，XSF對(duì)其有顯著調(diào)整作用(與MD比較P<0.05)，而 FLU對(duì)其無(wú)明顯調(diào)節(jié)作用，其余大部分腦區(qū)GR表達(dá)變化不明顯。

2.4 中樞11β-HSD2的表達(dá)

表5、圖1顯示，MD在 CA1區(qū)、CeA和 PFC的11β-HSD2表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05)，在 DG、BLA、NAc也有明顯下調(diào)趨勢(shì);XSF在 CA1區(qū)、PFC和NAc較MD明顯上調(diào);FLU在 CA1、DG、NAc較 MD明顯上調(diào)，其中在DG有顯著性差異(P<0.01)。

表4 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠急性應(yīng)激后中樞GR表達(dá)的影響(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，±s)

表4 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠急性應(yīng)激后中樞GR表達(dá)的影響(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，±s)

注:與 control比較:*P<0.05， P<0.01;與 MD 比較:#P<0.01，##P<0.01;CA1，海馬 CA1 區(qū);CA3，海馬 CA3 區(qū);DG，海馬齒狀回;BLA，基底外側(cè)杏仁核;CeA，杏仁核中央?yún)^(qū);PFC，前額皮質(zhì);NAc，伏核;下表同

組 別CA1 CA3 DG BLA CeA PFC NAc Control 24.1±14.1 16.2±17.0 11.7±11.1 31.1±22.1 24.4±10.8 61.3±39.6 107.3±40.6 MD 30.2± 7.5 19.0±11.2 26.2±26.8 25.7±15.4 24.9± 8.2 64.8±29.9 60.3±35.7*XSF 34.5± 7.3 19.5± 8.8 25.8±19.7 35.4±15.9 26.1±10.9 99.1±40.5 # 110.3±49.5#FLU 34.4±12.1 5.2± 4.5*## 29.9±27.1 21.1±14.1 20.4± 6.6 49.4±39.3 57.8±44.0*

3 討論

對(duì)于抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，中醫(yī)學(xué)常以肝氣郁結(jié)為核心，鮮有以相火立論者。相火被喻為“龍雷之火”，寄寓于下焦肝腎精血之中，對(duì)肝氣有升舉、疏通作用。相火不足，則肝升舉疏通無(wú)力，心境抑郁，情緒低落，最終促使抑郁癥的發(fā)生。對(duì)相火(陽(yáng)氣)不足導(dǎo)致抑郁癥的病機(jī)認(rèn)識(shí)，臨床治療及實(shí)驗(yàn)研究均有報(bào)道［6～7］。申請(qǐng)者所在課題組應(yīng)用舒肝、健脾、補(bǔ)腎對(duì)慢性束縛應(yīng)激所致抑郁模型大鼠進(jìn)行干預(yù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎溫陽(yáng)藥物也有明顯的抗抑郁作用［8］。兒童時(shí)期(特別是2歲以前)受虐待或缺乏關(guān)懷，可導(dǎo)致成年階段精神性疾病的易感性已有大量臨床和實(shí)驗(yàn)證據(jù)，但中醫(yī)對(duì)此形成機(jī)理和治療方法的研究尚屬空白。從中醫(yī)理論分析，幼年陽(yáng)氣未盛，遭受應(yīng)激(母嬰分離)則易出現(xiàn)陽(yáng)氣折傷、相火不足而影響機(jī)體臟腑功能的成熟，為諸多疾病的發(fā)生埋下夙根，也包括情志類疾患。

表5 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠急性應(yīng)激后大腦11β-HSD2表達(dá)的影響(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，±s)

表5 溫陽(yáng)解郁方對(duì)MD小鼠急性應(yīng)激后大腦11β-HSD2表達(dá)的影響(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，±s)

注:與 Control比較:*P<0.05， P<0.01;與 MD 比較:#P<0.01，##P<0.01

組 別CA1 CA3 DG BLA CeA PFC NAc Control 32.0±19.4 8.1±4.8 9.6±10.6 26.0±11.3 18.2±6.8 57.7±10.3 69.1±35.3 MD 7.6±10.5 6.7±5.1 4.8± 8.4 20.2±13.2 11.2±8.0* 24.7±15.8 49.7±51.2 XSF 22.2±19.7 3.8±2.4 5.6± 4.7 20.6±16.9 8.6±6.0 39.2±25.5* 81.0±37.2 FLU 19.6±21.5 4.5±3.8 15.3±14.1## 20.7±12.9 10.3±4.1* 28.1±17.8 67.2±34.6

圖1 各組小鼠海馬11β-HSD2表達(dá)情況

基于以上觀點(diǎn)，在傳統(tǒng)解郁名方逍遙散的基礎(chǔ)上加上溫陽(yáng)藥淫羊藿、巴戟天及活血化痰藥等，組成溫陽(yáng)解郁方。通過(guò)小鼠強(qiáng)迫游泳藥理實(shí)驗(yàn)顯示，該方較逍遙散強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯縮短達(dá)23.2%。本實(shí)驗(yàn)也顯示，溫陽(yáng)解郁方、氟西汀均可提高M(jìn)D小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)入中央?yún)^(qū)次數(shù)，提高EPM進(jìn)入開(kāi)放臂的次數(shù)及停留時(shí)間，說(shuō)明兩藥對(duì)MD小鼠的抑郁焦慮行為有良好的調(diào)節(jié)作用。趨向反應(yīng)是利用動(dòng)物的本能動(dòng)機(jī)而設(shè)計(jì)的，溫陽(yáng)解郁方能縮短MD小鼠的趨向決擇時(shí)間，說(shuō)明其有增強(qiáng)本能動(dòng)機(jī)的作用，且有別于氟西汀。回避反應(yīng)是利用外部動(dòng)機(jī)(電擊造成的恐懼)而設(shè)計(jì)的，其更大程度的涉及了個(gè)體對(duì)外部驅(qū)動(dòng)力的感受和認(rèn)知。氟西汀可延緩MD小鼠回避決擇時(shí)間，而溫陽(yáng)解郁方對(duì)此無(wú)明顯作用，提示氟西汀能增強(qiáng)劣性刺激的適應(yīng)和抵抗，這可能與對(duì)劣性刺激的感知和評(píng)估改變有關(guān)。從總體效果來(lái)看，溫陽(yáng)解郁方有顯著增強(qiáng)內(nèi)部動(dòng)機(jī)和趨向反應(yīng)的作用，而氟西汀可顯著提高對(duì)外部動(dòng)機(jī)的適應(yīng)，增強(qiáng)對(duì)危險(xiǎn)的對(duì)抗能力。

雖然溫陽(yáng)解郁方和氟西汀對(duì)MD小鼠應(yīng)激后及DEX/CRH實(shí)驗(yàn)中CORT水平異常均無(wú)調(diào)節(jié)作用，但兩藥均對(duì)海馬11β-HSD2的表達(dá)異常有顯著的改善作用。11β-羥基類固醇脫氫酶為糖皮質(zhì)激素(GC)的代謝酶，11β-HSD2可單向?qū)?GC脫氫氧化成無(wú)活性的皮質(zhì)素，同時(shí)11β-HSD2減少也是早年不良經(jīng)歷的后果影響到成年的關(guān)鍵因素。溫陽(yáng)解郁方可提高11β-HSD2水平，使部分 GC的失活，減少應(yīng)激時(shí)高GC對(duì)大腦的損害效應(yīng)，也減弱了應(yīng)激反應(yīng)，這可能是應(yīng)激后 CORT升幅不高的原因。PFC和NAc是決擇行為涉及的主要腦區(qū)，溫陽(yáng)解郁方顯著調(diào)節(jié)GR在NAc的表達(dá)以及11β-HSD2在PFC和NAc表達(dá)，11β-HSD2的升高可減弱 GC的作用，GR的增多可增強(qiáng)對(duì)HPA軸的抑制，從而減少GC的釋放，均對(duì)相關(guān)腦區(qū)有保護(hù)作用。由此說(shuō)明溫陽(yáng)解郁方通過(guò)上述機(jī)制減少應(yīng)激時(shí)大量GC對(duì)相關(guān)腦區(qū)的損害，恢復(fù)NAc的功能和本能動(dòng)機(jī)的產(chǎn)生，顯著改善了趨向行為。

本實(shí)驗(yàn)溫陽(yáng)解郁方和氟西汀均在社會(huì)擊敗應(yīng)激造成典型抑郁行為表現(xiàn)后才開(kāi)始用藥，屬于治療性干預(yù)，雖然抑郁行為和相關(guān)腦區(qū)的功能有很大改善，但DEX/CRH實(shí)驗(yàn)中CORT的高漲仍無(wú)改觀，意味著抑郁癥的根源并未去除，宜進(jìn)一步深入研究以提高療效。

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Effects of Warming Yang with Soothing Liver Formula on Behavior and HPA Axis of Social Defeat Stress with Maternal Separation Mice

ZHANG Ling1，LIU Zhi-zhong1，LIANG Yuan1，LU He-qi1，Huo Su-kun2，YUE Guang-xin1，CHEN Jia-xu2，HUANG Qi-fu2
(1.Laboratory of Chinese Medicine Pharmacology，Institute of Basic Theory of TCM，China Acadamy of Chinese Medical Sciences，Beijing100700，China;2.Preclinical School，Beijing Univesity of Chinese Medicine，Beijing100029，China)

Objective:Further verify therapeutic effect of Warming Yang with Soothing Liver Formula(Xie Shen Fang，XSF)on depress，to explore its mechanism.Methods:The adult C57BL/6J mice which experience 10d maternal separation after birth，were subjected 10d social defeat stress to make depression model，then treated with XSF for 4w，observed behavior changesbyopen field，elevated plusmazeand decision-making test，detected serum corticosterone by radioimmunoassay，central glucocorticoid receptor(GR)and 11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2(11β-HSD2)expression by immunohistochemistry.Results:(1)XSF significantly regulated anxiety tend of depression mice and promote appetitive decision-making response;(2)XSF improved hypothalamus-pituitary-adrenal(HPA)axis function at certain extent.Conclusion:Warming Yang with Soothing Liver Formula show clear therapeutic effect on depression mice and would be better to prolong treatment course depression mice and would be better to prolong treatment course.

depression;maternal separation;social defeat;warming yang with soothing liver;hypothalamicpituitary-adrenocortical axis

R285.5

B

1006-3250(2010)07-0563-04

中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目(20070410491);北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(7103173);中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院自主選題資助項(xiàng)目(Z02032)

2010-01-10

張玲(1959-)，女，山東煙臺(tái)人，助理研究員，從事中藥藥理研究。

△通訊作者:岳廣欣，E-mail:yuegx73@hoamail.com。