張艷艷 李福昌

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，泰安271018)

隨著生命科學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)眾多的微量元素參與了生命活動的過程和營養(yǎng)物質(zhì)的代謝，顯示了其突出的重要性。硒是動物機(jī)體內(nèi)重要的必需微量元素，它的不足或缺乏可嚴(yán)重影響畜禽的生命活動和生產(chǎn)性能。硒是谷胱甘肽過氧化物酶的組成成分[1]，具有提高生產(chǎn)性能、改善肉品品質(zhì)和提高機(jī)體抗氧化能力的作用。硒在其他畜禽生產(chǎn)上的研究和應(yīng)用已經(jīng)相當(dāng)廣泛，但由于生長肉兔的營養(yǎng)需要量的研究起步較晚，科研工作落后于其他動物，并且生長肉兔硒的添加量問題一直沒有明確的規(guī)定。為此，本試驗(yàn)以生長肉兔為研究對象，在其他各種營養(yǎng)素滿足需要的情況下，探討日糧添加不同水平硒對其生長性能、抗氧化指標(biāo)和肉質(zhì)的影響，從而推斷肉兔生長最佳的硒添加水平，并為我國制定肉兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物及飼養(yǎng)管理

選取體重(1 810±149)g的2月齡生長新西蘭肉兔100只，公母各占1/2，按照體重及性別分為5組，每組20個重復(fù)。試驗(yàn)兔單籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間日喂食2次，采用常規(guī)飼養(yǎng)管理和免疫程序，自然采光、通風(fēng)。自由采食，自由飲水，3～5 d消毒兔舍1次。

1.2 試驗(yàn)日糧及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

基礎(chǔ)日糧參照NRC(1977)[2]家兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制而成(表1)。試驗(yàn)分為5組，在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加亞硒酸鈉，折合硒的添加量分別為0、0.15、0.30、0.45和 0.60 mg/kg，其中 0 mg/kg為對照組。用制粒機(jī)將日糧壓制成直徑4～6 mm的顆粒飼料，儲存在通風(fēng)干燥避光處備用。5組試兔分別飼喂以上5種日糧，預(yù)試期7 d，正試期23 d。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diet(air-dry basis，%)

1.3 樣品采集與制備

在試驗(yàn)開始后的第30天早晨空腹稱重，然后立即心臟采血 10 mL，室溫避光靜置 30 min后，3 000 r/min離心10 min，分離所得血清分裝于Eppendorf管中，置于-20℃下冷凍保存待測。每組隨機(jī)抽取8只試兔，將其頸椎錯位致死，屠宰，于背最長肌處采集肌肉和肝臟各2 g放入液氮罐冷凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存至分析(酶活);另取肝臟10 g、背腰最長肌10 g于-20℃避光保存至分析(硒濃度)。現(xiàn)場測肌肉pH和失水力。

1.4 測定指標(biāo)和方法

1.4.1 生長性能

測定2月齡和3月齡試兔的體重，并統(tǒng)計(jì)2～3月齡的喂料量，計(jì)算平均日采食量(average daily intake，ADI)、平均日增重(average daily gain，ADG)和料肉比(feed/gain，F(xiàn)/G)。

1.4.2 抗氧化指標(biāo)

血清、肝臟和肌肉中谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)活性、總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、過氧化氫酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量測定所用試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，在UV-2450型紫外-可見分光光度計(jì)上測定。

1.4.3 肌肉品質(zhì)及硒濃度

失水率:宰后2 h內(nèi)取第7腰椎處背腰最長肌(300±10)g(W1)，上下層墊有16層濾紙吸水，用鋼環(huán)允許膨脹壓縮儀加壓2.25 kg，持續(xù)恒定加壓5 min后，迅速撤去壓力，立即稱壓后重(W2)，即得失水率(%)=(W1-W2)/W1×100。

剪切力:采集的新鮮肉樣放于0～4℃冰箱經(jīng)48 h貯存熟化后取出，將溫度計(jì)插入肌肉中心部位，于恒溫水浴鍋內(nèi)80℃加熱，肌肉中心的溫度達(dá)到60℃時停止加熱，取出肉樣，將肉樣順著肌肉纖維的方向修剪成直徑為1.12 cm的圓柱形肌肉塊，用C-LM型肌肉嫩度計(jì)測定剪切力(kg)。

pH:于宰后 45 min和24 h用 Mettler MP 120型酸堿度計(jì)測背腰最長肌第5肋骨處的pH，將探頭插入肌肉3 mm讀數(shù)。

滴水損失:從背腰最長肌取2 cm×0.5 cm×0.5 cm肉樣，將肉樣裝入充氣塑料袋中，4℃冰箱吊掛貯存24 h，用貯存前(W1)和貯存后(W2)的重量計(jì)算，滴水損失(%)=(W1-W2)/W1×100。

飼料和肌肉硒濃度:根據(jù)GB/T5009.93—2003在MPF-4熒光分光光度計(jì)上測定硒的濃度。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SAS 8.02統(tǒng)計(jì)軟件中的GLM進(jìn)行數(shù)據(jù)的方差分析，用Duncan氏法進(jìn)行數(shù)據(jù)的多重比較。

2 結(jié) 果

2.1 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔生長性能的影響

由表2可以看出，在初始體重?zé)o顯著差異的情況下，日糧不同硒水平對 ADI影響不顯著(P=0.120 2);日糧不同硒水平對ADG影響顯著(P=0.019 4)，其中0.15和0.30 mg/kg添加組顯著高于對照組(P ＜0.05)，0.15、0.30、0.45 和 0.60 mg/kg添加組之間以及對照組和0.45、0.60 mg/kg添加組之間無顯著差異(P＞0.05);日糧不同硒水平對F/G影響顯著(P=0.040 1)，0.15和0.30 mg/kg添加組顯著低于對照組(P＜0.05)，0.15、0.30、0.45和0.60 mg/kg添加組之間以及對照組和 0.45、0.60 mg/kg添加組之間無顯著差異(P＞0.05)。

表2 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔生長性能的影響Table 2 Effects of different dietary selenium levels on growth performance of meat rabbits from 2 to 3 months of age

2.2 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔抗氧化指標(biāo)的影響

日糧不同硒水平對肝臟GSH-Px和SOD活性影響顯著(P=0.011 4，P=0.032 3)，其中0.60 mg/kg添加組顯著高于其他組(P＜0.05);日糧不同硒水平對肝臟CAT活性影響顯著(P=0.043 4)，其中0.30 mg/kg添加組顯著高于對照組(P＜0.05);日糧不同硒水平顯著影響肝臟MDA含量(P=0.029 1)，0.30和0.45 mg/kg添加組顯著低于對照組，各添加組之間差異不顯著(P＞0.05)。肝臟T-AOC受日糧不同硒水平影響不顯著(P=0.669 9)。

表3 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Table 3 Effects of different dietary selenium levels on liver antioxidant indices of meat rabbits from 2 to 3 months of age(U/mg prot)

由表 4可以看出，日糧不同硒水平對血清GSH-Px活性影響極顯著(P=0.000 9)，其中0.30和0.45 mg/kg添加組極顯著高于對照組和0.15、0.60 mg/kg添加組(P＜0.01)，0.30和0.45 mg/kg添加組之間以及對照組和0.15、0.60 mg/kg添加組之間無顯著差異(P＞0.05);血清SOD活性受日糧不同硒水平影響顯著(P=0.014 9)，0.45 mg/kg添加組顯著高于其他組(P＜0.05);日糧不同硒水平顯著影響血清T-AOC(P=0.037 6)，各添加組顯著高于對照組(P＜0.05)。日糧不同硒水平對血清CAT活性和MDA含量影響均不顯著(P=0.547 7，P=0.988 7)。

表4 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔血清抗氧化指標(biāo)的影響Table 4 Effects of different dietaryselenium levels on serum antioxidant indices of meat rabbits from 2 to 3 months of age (U/mL)

日糧不同硒水平對肌肉GSH-Px活性影響極顯著(P＜0.000 1)，其中0.45和0.60 mg/kg添加組極顯著高于對照組和0.15、0.30 mg/kg添加組(P＜0.01)，0.45和0.60 mg/kg添加組之間以及對照組和0.15、0.30 mg/kg添加組之間差異不顯著(P＞0.05);日糧不同硒水平顯著影響肌肉MDA含量(P=0.019 0)，其中對照組顯著高于0.45和0.60 mg/kg添加組(P＜0.05)，各添加組之間以及對照組和0.15、0.30 mg/kg添加組之間差異不顯著(P＞0.05);肌肉SOD活性和T-AOC受日糧不同硒水平影響均不顯著(P=0.900 3，P=0.379 1)。

表5 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔肌肉抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of different dietary selenium levels on muscle antioxidant indices of meat rabbits from 2 to 3 months of age (U/mg prot)

2.3 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔肉品質(zhì)和肌肉硒含量的影響

由表6可以看出，日糧不同硒水平對肌肉失水率影響顯著(P=0.032 5)，其中0.15 mg/kg添加組顯著低于對照組和 0.60 mg/kg添加組(P＜0.05);日糧不同硒水平對肌肉滴水損失影響顯著(P=0.004 2)，其中 0.15、0.30和 0.45 mg/kg添加組極顯著低于對照組和0.60 mg/kg添加組(P＜0.01);剪切力受日糧不同硒水平影響顯著(P=0.028 5)，各添加組均顯著低于對照組(P＜0.05)，各添加組之間差異不顯著(P＞0.05);日糧不同硒水平對45 min和24 h肌肉pH均沒有顯著的影響(P=0.473 4，P=0.305 1)。日糧不同硒水平對肌肉硒含量影響顯著(P=0.005 4)，0.30、0.45和0.60 mg/kg添加組極顯著高于對照組(P＜0.01)，0.30 mg/kg添加組極顯著高于0.15 mg/kg添加組(P＜0.01)。

表6 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔肉品質(zhì)和肌肉硒含量的影響Table 6 Effects of different dietary selenium levels on meat quality and muscle selenium content of meat rabbits from 2 to 3 months of age

3 討 論

3.1 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔生長性能的影響

硒是動物生長必需的微量元素，它具有重要的生物學(xué)功能;硒與Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脫碘酶活性有密切的關(guān)系，能通過影響其生物活性而介導(dǎo)甲狀腺激素的形成和降解，調(diào)節(jié)甲狀腺激素的代謝平衡從而提高基礎(chǔ)代謝率[3]，增加組織細(xì)胞耗氧率，維持正常的生理功能。甲狀腺激素的化學(xué)本質(zhì)是含碘的氨基酸，對動物代謝起較大的促進(jìn)作用，增加基礎(chǔ)代謝，促進(jìn)糖、蛋白質(zhì)、脂、鹽代謝。當(dāng)機(jī)體硒缺乏時，甲狀腺激素合成嚴(yán)重受阻，從而抑制動物生長[4]。另外，硒通過參與谷胱甘肽過氧化物酶的合成，防止動物細(xì)胞膜的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)遭受破壞，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，也可對生長造成影響。本研究表明，家畜日糧中添加不同劑量的硒均可不同程度的提高體增重，改善飼料利用率。

本試驗(yàn)研究表明，日糧不同水平硒對ADI沒有顯著影響，說明添加硒并沒有對ADI造成影響;在初始體重?zé)o顯著差異的情況下，日糧添加0.15 mg/kg的硒可增加2～3月齡生長肉兔的ADG和改善飼料轉(zhuǎn)化效率，隨著日糧硒水平的增高，生長性能趨于降低，說明硒具有一定的劑量效應(yīng)。該結(jié)果與尹兆正等[5]在生長肉豬以及尹兆正等[6]和胥保華[7]在生長肉雞上的結(jié)果相似，張春香等[8]在山羊以及高愛琴等[9]在0～3周齡肉仔雞上也得出了相似的結(jié)果。但Vignola等[10]和Skrivanova等[11]在山羊和小牛上的研究顯示日糧添加不同水平硒對日采食量、日增重?zé)o顯著影響，這可能與畜種不同或基礎(chǔ)日糧中的硒含量有關(guān)。

3.2 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔抗氧化指標(biāo)的影響

GSH-Px、SOD、CAT是動物機(jī)體主要的抗氧化酶，它們的含量和活性影響機(jī)體內(nèi)的活性氧自由基水平以及脂質(zhì)過氧化終末代謝產(chǎn)物MDA。T-AOC是衡量機(jī)體總抗氧化能力的指標(biāo)，它的高低代表機(jī)體的總抗氧化能力。硒是GSH-Px的組成成分，缺硒直接導(dǎo)致GSH-Px合成量下降以及GSH-Px活性降低。本試驗(yàn)結(jié)果與Mahan等[12]日糧中添加硒能增加母豬谷胱甘肽過氧化物酶的活性的結(jié)果一致。雖然硒不是T-AOC和CAT的組成成分，但動物缺硒狀態(tài)下組織合成各種抗氧化酶的機(jī)能下降，使組織內(nèi)產(chǎn)生的O2-和H2O2不能及時清除，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化增強(qiáng)，機(jī)體活性氧自由基水平和MDA含量顯著升高[13]。

本研究表明，日糧添加硒尤其是高劑量的硒對各組織GSH-Px、SOD和CAT活力有不同程度的改善，同時使組織的MDA含量降低，提高了組織抗氧化能力。

3.3 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔肉品質(zhì)和肌肉硒含量的影響

硒對肉品質(zhì)的作用主要是通過影響抗氧化功能實(shí)現(xiàn)的。硒對肌肉的抗氧化保護(hù)可以減少脂質(zhì)過氧化，保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能正常。Torrent[14]報(bào)道，在豬飼料中加入0.3 mg/kg硒可減少PSE肉的發(fā)生，且豬肉味較好。失水率、滴水損失和剪切力均可在一定程度上反映肉的品質(zhì)。Edens等[15]比較了不同硒源和不同添加水平對雞肉滴水損失的影響，結(jié)果表明添加0.3 mg/kg硒組較添加0.1 mg/kg硒組滴水損失明顯降低。張巧娥等[16]對不同硒水平對豬肌纖維直徑、數(shù)量和肌節(jié)長度等指標(biāo)的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，硒水平對以上指標(biāo)均有不同程度的影響，在飼糧中添加0.30、0.45和0.60 mg/kg硒時肌肉保水性、嫩度較好，且以添加0.30 mg/kg時為最好。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧中添加不同水平的硒對肌肉失水率、滴水損失和剪切力有顯著影響，日糧添加0.15 mg/kg的硒可降低3月齡生長肉兔肌肉的失水率和滴水損失。

組織中的硒含量也可以反映機(jī)體的硒營養(yǎng)狀態(tài)，一般情況下，各組織的硒濃度會隨著日糧硒含量的增加而提高。本試驗(yàn)表明，硒在肌肉中的濃度隨日糧硒添加水平的增加先增加而后穩(wěn)定，以0.30 mg/kg添加組含量最高，當(dāng)硒添加水平高于0.30 mg/kg時肌肉中硒濃度基本穩(wěn)定。這可能與動物對硒的需求量有關(guān)，低劑量時動物為滿足自身需要而提高吸收率，從而顯示出較高的硒存留率，而當(dāng)硒達(dá)到一定水平后，動物則通過調(diào)整對硒的吸收，保證機(jī)體的健康生長。

4 結(jié) 論

①日糧添加適宜水平的硒能夠改善2～3月齡生長肉兔的增重速度、飼料轉(zhuǎn)化效率和肉品品質(zhì)。

②日糧添加硒(≥0.15 mg/kg)有利于改善2～3月齡生長肉兔的抗氧化能力。

③綜合生長和肉質(zhì)指標(biāo)，2～3月齡生長肉兔日糧適宜的硒添加量為0.15 mg/kg。

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