劉文秀 毛齊學(xué) 王 波 劉 薇 張洪宇

黑龍江省齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科（161000）

MSI和 LOH與慢性粒細(xì)胞白血病各期的關(guān)系

劉文秀 毛齊學(xué) 王 波 劉 薇 張洪宇

黑龍江省齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科（161000）

微衛(wèi)星遺傳不穩(wěn)定性是CML發(fā)生和轉(zhuǎn)化過程中的常見事件,不同位點(diǎn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性在CML病情演變中所起作用不同,AFMa127xg9位點(diǎn)附近可能存在與CML發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的新抑癌基因。

雜合性缺失；微衛(wèi)星重復(fù)；白血病

1 資料與方法

選擇在我院住院的CML病人37例，包括慢性期（CP）27例，加速期和急變期（AP+BC）10例；男18例，女19例；年齡14～65歲。方法：收集CML病人的骨髓標(biāo)本，正常對照組外周血，同時刮取口腔黏膜標(biāo)本做自身對照，參考本室常規(guī)方法分別提取骨髓、外周血與口腔黏膜標(biāo)本DNA備用。選取與CML病人不同時期染色體改變密切相關(guān)的8、9、17號染色體上5個微衛(wèi)星位點(diǎn):D8S555、D8S559、D9S67、TP53A1/A2、AFMa127xg9，從基因庫中查出其引物序列，由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成所需引物。將引物分成兩組，用多重PCR方法同時擴(kuò)增病人的骨髓（或正常對照組的外周血）和口腔黏膜DNA。

將擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染，用凝膠成像分析儀分析是否存在MSI和（或）LOH。

2 結(jié)果

各期CML病人MSI和（或）LOH發(fā)生率比較 27例CP病人中14例發(fā)生MSI和（或）LOH，10例AP+BC病人中8例發(fā)生了MSI和（或）LOH，二者比較，差異無顯著性（P=0.152）。不同微衛(wèi)星位點(diǎn)MSI和（或）LOH的發(fā)生率及其比較 在D8S555位點(diǎn)，CML CP病人的MSI發(fā)生率為7.4%，AP+BC為40.0%，但未見LOH。進(jìn)展期（AP+BC）病人的MSI發(fā)生率明顯高于CP病人，差異有顯著性（P=0.009）。同時出現(xiàn)兩個和兩個以上位點(diǎn)改變者10例，其中CP病人6例，AP+BC病人4例，二者差異無顯著性（P=0.407）。8號染色體的D8S555、D8S559位點(diǎn)MSI的發(fā)生率明顯高于9、17號染色體的3個位點(diǎn)，差異均有顯著意義。17號染色體的AFMa127xg9 位點(diǎn) LOH 的發(fā)生率為 29.7%，明顯高于其他4個位點(diǎn)，差異有顯著性。

3 討論

慢性白血病是一種克隆性、多能造血干細(xì)胞疾病，發(fā)病率為1/100000，發(fā)病高峰在50～60歲之間。其臨床特征為：髓系增生，白細(xì)胞增多伴嗜堿粒細(xì)胞增多，脾大。病情發(fā)展最終由慢性期進(jìn)展到加速期，最后到致命的急變期。特征性的染色體異常t（9.22）（q34:q11）導(dǎo)致bcr-abl融合基因的形成，其產(chǎn)物bcr/abl酪氨酸激酶的活性比野生型abl酪氨酸激酶的活性更強(qiáng)，這在CML的發(fā)病中起重要作用。一般認(rèn)為，CML急變時70%的病人可以出現(xiàn)額外的染色體異常，這種變化的出現(xiàn)比血液學(xué)和臨床表現(xiàn)的惡化要早幾個月，可作為估計預(yù)后的有價值的指標(biāo)。分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展對CML的發(fā)病機(jī)制及病程演變的研究起了進(jìn)一步推動的作用。PCR技術(shù)檢測微衛(wèi)星的不穩(wěn)定性在研究CML發(fā)生發(fā)展機(jī)制中被廣泛應(yīng)用。WADA等檢測了19例CML進(jìn)展期和20例慢性期病人的5個不同微衛(wèi)星位點(diǎn)的MSI，結(jié)果顯示，進(jìn)展期有10例病人檢測到至少2個微衛(wèi)星位點(diǎn)的MSI，而20例慢性期病人中沒有1例檢測出同樣位點(diǎn)的MSI，認(rèn)為由于復(fù)制和修復(fù)機(jī)制缺陷導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定性這一頻繁事件的發(fā)生同CML進(jìn)展關(guān)系密切。

OHYASHIKI等用熒光技術(shù)對73例不同類型白血病的7個微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行連續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，在CML慢性期沒有微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，而急變期時微衛(wèi)星不穩(wěn)定性出現(xiàn)的頻率明顯升高，達(dá)25%，且出現(xiàn)多個位點(diǎn)不穩(wěn)定性者占50%以上，因此認(rèn)為，多個基因位點(diǎn)的不穩(wěn)定性與CML的急變有關(guān)聯(lián)。李戈等[1]檢測17例CML加速期和急變期病人的2個微衛(wèi)星標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)有8例出現(xiàn)MSI或LOH，表明慢性白血病在加速期和急變期檢出微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的頻率明顯高于慢性期。本文結(jié)果顯示，進(jìn)展期病人D8S555位點(diǎn)處的MSI發(fā)生率明顯高于慢性期病人，與文獻(xiàn)報道相符；同時也觀察到所選的其他4個位點(diǎn)上，加速期和急變期病人發(fā)生一個或多個位點(diǎn)的MSI和（或）LOH的頻率與慢性期病人無顯著性差異；8號染色體的2個位點(diǎn)D8S555、D8S559的MSI發(fā)生率明顯高于9、17號染色體的3個位點(diǎn)，而17號染色體的AFMa127xg9位點(diǎn)LOH發(fā)生率明顯高于其他4個位點(diǎn)，在9q34上的D9S67位點(diǎn)和17號染色體的TP53A1/A2位點(diǎn)上MSI和（或）LOH發(fā)生率都較低，且只發(fā)生在慢性期，這說明CML的演變是一個遺傳學(xué)改變高度異質(zhì)性的過程，微衛(wèi)星遺傳不穩(wěn)定性廣泛存在于疾病全過程，不同微衛(wèi)星的改變在這一過程中發(fā)揮的作用也不同。MORI等[1]對17例處于由慢性期向急變期進(jìn)展的CML病人的10個微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行研究，也沒有發(fā)現(xiàn)MSI，認(rèn)為這些微衛(wèi)星區(qū)域改變沒有參與CML的進(jìn)展。另外，MEZA等研究發(fā)現(xiàn)，CML出現(xiàn)額外染色體異常如+8、i（17q）的頻率具有地區(qū)民族差異。所以，我們分析不同文獻(xiàn)結(jié)果不同的原因除與所選擇的微衛(wèi)星位點(diǎn)不同有關(guān)外，可能還與人種、地域等因素造成的微衛(wèi)星多態(tài)性有關(guān)。如何科學(xué)選擇微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測慢性白血病不同時期的MSI和LOH的臨床意義還有待于更多、更進(jìn)一步的研究。

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.10.178

1672-2779（2010）-10-0202-01

2010-03-24）