汪文斌,張小榮,焦庫(kù)華,吳艷濤

(揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)部畜禽傳染病學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,江蘇 揚(yáng)州 225009)

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽類的一種急性、高度接觸性傳染病,給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。免疫接種是控制ND的重要措施,而科學(xué)合理的免疫程序是確保免疫效果的關(guān)鍵。隨著疫苗的廣泛應(yīng)用,近年來(lái)ND的流行已得到明顯控制。但由于我國(guó)養(yǎng)殖模式多樣,生物安全水平不一,以及免疫程序混亂,免疫雞群仍經(jīng)常發(fā)生ND[1-4]。本試驗(yàn)從免疫保護(hù)抗體水平臨界值、疫苗的免疫期等方面研究了影響ND免疫程序的因素,為制定合理的免疫程序提供依據(jù)。

1 材料

1.1 疫苗與抗原 NDV標(biāo)準(zhǔn)抗原和陽(yáng)性血清購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所,用于測(cè)定NDV HI抗體效價(jià)。ND活疫苗(LaSota株):武漢中博生化有限公司,獸藥生字(2006)170262007;ND滅活疫苗:齊魯動(dòng)物保健品有限公司,獸藥生字(2006)150252008。

1.2 儀器和設(shè)備 96孔V形血凝板,定量移液器,微型振蕩器,恒溫箱,離心機(jī),水浴鍋等。

1.3 SPF雞胚及試驗(yàn)雞 SPF種蛋購(gòu)自山東家禽研究所;1日齡伊莎(褐)雛雞250羽,購(gòu)自無(wú)錫種雞場(chǎng)有限公司。

2 方法

2.1 NDV強(qiáng)毒株的ELD50測(cè)定 將NDV F48E9強(qiáng)毒株(本室保存)經(jīng)SPF雞胚復(fù)蘇后,按文獻(xiàn)[5]測(cè)定其ELD50。

2.2 免疫保護(hù)抗體臨界值的確定

2.2.1 母源抗體對(duì)雛雞的保護(hù) 將100羽1日齡雛雞隨機(jī)分成 A、B、C、D、E 5組,每組 20羽。當(dāng)NDV HI抗體上升到峰值后相應(yīng)下降為8、6、4、2和0左右時(shí),經(jīng)頸部皮下注射NDV F48E9強(qiáng)毒株,105ELD50/羽。攻毒后第3天和第5天采集泄殖腔棉拭子,分離病毒,方法見文獻(xiàn)[6]。

2.2.2 疫苗免疫抗體對(duì)雞群的保護(hù) 取60羽1日齡雛雞,在7日齡時(shí)經(jīng)頸部皮下注射ND滅活疫苗0.2mL/羽,27日齡分別經(jīng)頸部皮下接種ND滅活疫苗0.5mL/羽、經(jīng)滴鼻和點(diǎn)眼接種ND活疫苗2頭份/羽。從最后一次免疫開始,每周隨機(jī)采集10份血樣,檢測(cè)血清中 NDV HI抗體,方法見文獻(xiàn)[5]。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果,將上述試驗(yàn)雞隨機(jī)分為F、G、H 3組,每組20羽,分別于 NDV HI抗體上升到峰值后下降為6、4和2左右時(shí),注射NDV F48E9強(qiáng)毒株,107ELD50/羽。攻毒后第3天和第5天采集泄殖腔棉拭子,分離病毒。

2.3 疫苗免疫期的觀察 將40羽1日齡雛雞隨機(jī)分成2組。34日齡時(shí)經(jīng)檢測(cè)NDV HI抗體為0,2組試驗(yàn)雞分別經(jīng)頸部皮下接種ND滅活疫苗0.5mL/羽和滴鼻免疫活疫苗2頭份/羽,此后每周隨機(jī)采集10份血樣,檢測(cè)血清中NDV HI抗體。

2.4 母源抗體的監(jiān)測(cè) 30羽1日齡雛雞,從1日齡起每天采血1次,1周齡后每隔1 d采血1次,每次隨機(jī)采集15份血樣,檢測(cè)血清中NDV HI抗體,直至母源抗體消失。

3 結(jié)果

3.1 NDV強(qiáng)毒株的ELD50 每0.1mL F48E9的尿囊液其病毒含量為108.78ELD50。

3.2 免疫保護(hù)抗體臨界值 ND母源抗體以及疫苗免疫抗體對(duì)NDV強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)效果見表1和表2。從表中可看出,當(dāng)抗體效價(jià)＞6時(shí),攻毒保護(hù)率均為100%,且在攻毒后第3天第和第5天未檢出泄殖腔排毒;當(dāng)抗體效價(jià)在4至6之間時(shí),攻毒保護(hù)率均為100%,但有少量雞被檢出泄殖腔排毒;當(dāng)抗體效價(jià)＜4時(shí),攻毒保護(hù)率為0%～85%,攻毒后排毒檢出率為40%～100%。

3.3 疫苗的免疫期 ND滅活苗和弱毒活疫苗的免疫期觀察結(jié)果見圖1。ND滅活疫苗免疫后1周內(nèi)沒有檢測(cè)到HI抗體,2周后上升為5.8,6周后達(dá)到峰值9.2,之后隨著日齡增加緩慢下降,至23周時(shí)為3.8。在抗體監(jiān)測(cè)期間,從免疫后2周開始,抗體合格率(當(dāng)抗體≥5時(shí)判定為合格,以下同)都在90%以上,直到免疫后19周抗體合格率降到75%以下。

ND活疫苗免疫雞1周后HI抗體平均為4.4,免疫后2周達(dá)到峰值6.6,免疫后5周迅速下降到4.5,之后維持在4～4.5;免疫后17周抗體水平降為3.9。在抗體監(jiān)測(cè)期間,除免疫后第2周和第3周抗體合格率分別為100.0%、80.0%外,其他時(shí)間段的抗體合格率都在75.0%以下,其中從免疫后19周開始抗體合格率降為0。

表1 新城疫母源抗體對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)試驗(yàn)

表2 新城疫免疫抗體對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)試驗(yàn)

3.4 母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律 1日齡雛雞HI抗體平均為9.4,3日齡時(shí)上升至峰值10.4,之后隨著日齡增加抗體緩慢下降,17日齡時(shí)為4.4,19日齡和27日齡時(shí)分別降為3.5和0.9,34日齡時(shí)抗體降為0。

4 討論

許多學(xué)者曾研究了新城疫的免疫保護(hù)抗體臨界值,但結(jié)論不一[6-7]。本試驗(yàn)中,母源抗體以及疫苗免疫抗體≥4時(shí)對(duì)F48E9強(qiáng)毒株的攻擊可提供完全的保護(hù),且能有效地抑制泄殖腔排毒;而抗體水平＜4時(shí)不能提供完全的免疫保護(hù),泄殖腔排毒現(xiàn)象嚴(yán)重。所以對(duì)NDV強(qiáng)毒株的攻擊,抗體水平為4仍然是起免疫保護(hù)作用的臨界值。

隨著疫苗的廣泛應(yīng)用,近年來(lái)ND的暴發(fā)流行已明顯受到控制,但經(jīng)常在免疫雞群中出現(xiàn)以產(chǎn)蛋下降為主要癥狀的非典型新城疫。導(dǎo)致其發(fā)生的因素有很多,NDV強(qiáng)毒在養(yǎng)殖場(chǎng)長(zhǎng)期存在得不到凈化,一旦動(dòng)物機(jī)體抵抗力下降或在應(yīng)激下便容易發(fā)病。從本試驗(yàn)的攻毒后排毒檢測(cè)結(jié)果來(lái)看,當(dāng)ND母源抗體平均值為4.9時(shí)對(duì)F48E9強(qiáng)毒株的攻擊,雖然可提供完全保護(hù),但不能完全抑制泄殖腔排毒。這提示我們,在評(píng)價(jià)疫苗效果時(shí),不能簡(jiǎn)單地只看攻毒保護(hù)率高低,還應(yīng)結(jié)合疫苗對(duì)野毒排出體外的抑制能力等做出綜合判斷。

疫苗免疫期的動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果顯示,兩種疫苗的免疫期(HI抗體≥4以上的時(shí)間,以下同)都達(dá)到了15周。這提示我們,并非免疫次數(shù)越多而效果越好,而應(yīng)根據(jù)抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果,適時(shí)加強(qiáng)免疫,才能避免抗體干擾獲得良好的免疫保護(hù)。

從監(jiān)測(cè)結(jié)果可以看出,母源抗體于1日齡時(shí)便可檢測(cè)到,隨后很快上升,3日齡達(dá)到峰值,之后隨著日齡增加抗體緩慢下降,19日齡時(shí)抗體降為4以下,而維持在4以上的時(shí)間長(zhǎng)達(dá)17 d,這與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的結(jié)果相似。在1～3日齡,由于雛雞不斷從體內(nèi)卵黃囊獲取了大量的免疫球蛋白,使得母源抗體水平升高,但吸收完畢后隨著雛雞的生長(zhǎng),母源抗體水平又不斷下降。從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,建議ND的首免時(shí)間為15～17日齡,但各個(gè)雞場(chǎng)(群)應(yīng)根據(jù)母源抗體監(jiān)測(cè)的實(shí)際結(jié)果來(lái)確定首免日齡。

在生產(chǎn)中,需要結(jié)合實(shí)際情況,發(fā)揮ND滅活疫苗和低毒力活疫苗各自的優(yōu)勢(shì),給雞群提供良好的免疫保護(hù)。對(duì)于雛雞和產(chǎn)蛋高峰期蛋雞,多采用低毒力活疫苗,其原因是短期內(nèi)快速產(chǎn)生的免疫可為雞群提供及時(shí)的保護(hù),而產(chǎn)蛋雞也不至于因滅活疫苗接種引起的應(yīng)激導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降。ND滅活疫苗可刺激機(jī)體產(chǎn)生高抗體水平并維持較長(zhǎng)時(shí)間,多用于加強(qiáng)免疫以及產(chǎn)蛋前的雞群。

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