李常保 柴 敏 李 季 鄭建秋

番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）為菜豆金色花葉病毒屬（Begomoviruses）的一種雙生病毒，由媒介昆蟲煙粉虱傳播（Zhang Huiet al.，2009）。該病毒可以侵染茄科、豆科等多種植物，主要為害番茄、辣椒、茄子、甘藍(lán)和黃瓜等蔬菜以及煙草等經(jīng)濟(jì)作物，特別是在番茄上為害更重。受害植物表現(xiàn)為生長緩慢，植株明顯矮化；頂部葉片皺縮、葉周邊向上卷曲，葉片變厚變小，葉片區(qū)域性黃化；病株頂端似菜花狀；坐果少，果實(shí)硬、小，不能正常轉(zhuǎn)色，喪失商品性；為害嚴(yán)重時不能開花坐果，造成絕產(chǎn)（褚云霞和朱為民，2009；馮蘭香 等，2009）。

番茄黃化曲葉病毒是近幾年新傳入我國的有害生物，1964年最早在以色列發(fā)生，之后迅速擴(kuò)散到中東、地中海沿岸、東亞、南亞、非洲、歐洲、美國、中美洲、澳大利亞等眾多國家和地區(qū)（Momol et al.，1999）。2002年傳入我國南方省份，2005年秋在廣西番茄主產(chǎn)區(qū)百色市田陽鎮(zhèn)大面積暴發(fā)，同年傳入江浙一帶，2007年傳入河南和山東，2008年該病在全國多個省市發(fā)展蔓延（蔡健和 等，2006；何自福 等，2007；趙統(tǒng)敏 等，2007；吳永漢 等2007；于力 等，2009）。2009年該病在河北局部地區(qū)和山東大爆發(fā)（龔一帆2009），發(fā)生面積逾1.3萬hm2，給番茄生產(chǎn)造成巨大損失。

1 病害發(fā)生情況

近幾年，番茄黃化曲葉病毒病在我國由南向北迅速蔓延，筆者一直密切關(guān)注著北京TYLCV病情及其傳毒媒介煙粉虱的變化。2008年秋冬之際，在北京蔬菜研究中心番茄育種試驗(yàn)地溫室選種時，筆者觀察到體型較小的煙粉虱，同時在大興、順義區(qū)的試驗(yàn)基地也看到了同樣的現(xiàn)象。2009年8月中旬，北京大興、順義、通州區(qū)多個農(nóng)民來電話反映，自家秋棚番茄生產(chǎn)田病毒病特別嚴(yán)重、粉虱難防等，這些信息引起了筆者的警覺。8月17日在本中心的試驗(yàn)地里，發(fā)現(xiàn)了幾株疑似病株，經(jīng)本院植病專家李興紅老師取樣檢測，9月初確認(rèn)被檢樣含有TYLCV病毒。隨著疑似病樣被確診，本中心的試驗(yàn)棚中TYLCV典型癥狀株越來越多。鑒于TYLCV是初次在北京發(fā)現(xiàn)且潛在為害甚大，而京郊各區(qū)縣的農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣人員和廣大農(nóng)民大多缺乏對這一新病害的了解和防控知識，北京市果類蔬菜創(chuàng)新團(tuán)隊組織了TYLCV防控應(yīng)急培訓(xùn)。通過此次應(yīng)急培訓(xùn)，使TYLCV為害的嚴(yán)重性得到了重視，對其防控策略達(dá)成了共識，為下一步的具體防控起到了指導(dǎo)和預(yù)警作用。

2 病原分子檢測

2.1 樣本采集 通過創(chuàng)新團(tuán)隊在京郊的網(wǎng)絡(luò)體系，安排部署了對京郊TYLCV發(fā)生情況調(diào)查和取樣檢測任務(wù)。取樣范圍包括順義、大興、通州、密云、房山和延慶6個區(qū)縣的番茄主產(chǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，還有朝陽、平谷、昌平、懷柔及北京蔬菜研究中心，共采集番茄樣本337份。經(jīng)過專家對各區(qū)縣采集的樣本進(jìn)行甄別，發(fā)現(xiàn)有些病樣癥狀不典型，表現(xiàn)為普通花葉或蕨葉病毒病癥狀。

2.2 分子檢測方法 首先根據(jù)TYLCV病毒全序列特異區(qū)自主設(shè)計PCR引物，研發(fā)出對于檢測TYLCV具有專一性、高效性和特異性的引物對序列。也就是說通過PCR擴(kuò)增反應(yīng)，只有感染TYLCV的植物才能擴(kuò)增出條帶，而沒有感染該病的健康植株以及感染其他病毒的植物都擴(kuò)增不出該條帶，根據(jù)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的條帶有無從而判斷出植物體內(nèi)是否含有TYLCV。經(jīng)過典型癥狀植物PCR驗(yàn)證以及擴(kuò)增條帶測序檢驗(yàn)，該對引物檢測TYLCV具有專一性、高效性和特異性（圖1）。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合植物DNA快速提取技術(shù)和平板瓊脂糖快速電泳技術(shù)，建立并完善了TYLCV快速高效的分子檢測平臺，用于番茄育苗和番茄育種材料帶毒性檢測。

2.3 分子檢測結(jié)果 采用筆者建立的TYLCV快速高效的分子檢測技術(shù)檢測樣本337份，其中163份帶有TYLCV病毒，占總樣本數(shù)的48%；171份未檢測出TYLCV。對于所有樣本進(jìn)行發(fā)病癥狀確認(rèn)，檢測出帶有病毒的樣本均具有TYLCV典型癥狀，進(jìn)一步證明該分子檢測真實(shí)有效（圖2）。京郊番茄黃化曲葉病毒病樣本病原的分子檢測結(jié)果見表1。

圖1 番茄黃化曲葉病毒特異引物的PCR分子驗(yàn)證

圖2 番茄黃化曲葉病毒田間取樣的分子檢測電泳圖

表1 京郊番茄黃化曲葉病毒病樣本病原分子檢測結(jié)果

檢測出帶毒的163份樣本遍及通州、大興、順義、平谷、密云、延慶、昌平、房山、懷柔、豐臺、朝陽、海淀等區(qū)縣的60多個鄉(xiāng)鎮(zhèn)。所調(diào)查的發(fā)病棚室占調(diào)查棚室的45.7%，一般病株率5%～10%，重病棚室病株率20%左右，個別棚室發(fā)病率達(dá)90%以上。在發(fā)生該病的區(qū)縣中以大興區(qū)發(fā)生較為普遍，發(fā)病棚室約占種植棚室的80%左右。在京郊番茄生產(chǎn)中種植的品種多達(dá)60個，常見品種有：阿魯娜、白奇帝王、百奇、倍盈、菜都3號、大紅粉、大秦粉、東勝、繁榮系列、福樂、改良印第安、格瑞斯、瑰麗100、合作918、合作928、紅天珠、吉朋達(dá)、佳麗系列、佳譽(yù)、金粉1號、金冠18號、金冠28號、金冠5號、金棚1號、金鵬賽歐、京丹小黃玉、京丹8號、京丹綠寶石、千禧、魁貫、美粉1號、蒙特卡羅、農(nóng)大128、農(nóng)大1號、歐頓、棚友、熱帶、三星新秀、勝寶、太寶、天福501、仙客1號、仙客5號、仙客6號、硬粉8號、硬特粒、元粒、躍佳、浙粉202、指航、卓越等。此次普查和檢測的結(jié)果表明，目前京郊種植的番茄品種尚沒有對TYLCV表現(xiàn)抗病的品種。但是品種間對TYLCV的敏感性差異較大，多數(shù)特色櫻桃類型的番茄品種如京丹綠寶石、京丹8號、09-CG-71和千禧等對TYLCV耐病性較強(qiáng)，而大多數(shù)主栽的粉色大果番茄品種對該病毒敏感，發(fā)病嚴(yán)重。由此可見番茄黃化曲葉病毒已經(jīng)在京郊番茄主產(chǎn)區(qū)以及主栽品種上普遍發(fā)生，必須引起高度重視。

蔡健和，秦碧霞，朱桂寧，黃福新，陳永惠，李焜華.2006.番茄黃曲葉病毒病在廣西爆發(fā)的原因和防治策略.中國蔬菜，（7）：47-48.

褚云霞，朱為民.2009.番茄抗黃化曲葉病毒育種研究進(jìn)展.基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，28（3）：563-568.

馮蘭香，謝丙炎，楊宇紅.2009.淺談番茄黃曲葉病毒病.中國蔬菜，（5）：17-21.

龔一帆.2009.威脅番茄生產(chǎn)的新病害——番茄黃化曲葉病毒病.中國蔬菜，（21）：1-4.

何自福，虞皓，毛明杰，羅方芳，林奕韓，王穗濤.2007.中國臺灣番茄曲葉病毒侵染引起廣東番茄黃化曲葉病.農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，15（1）:119-123.

吳永漢，張純胄，許方程，李芳芳，陳為康，盧啟強(qiáng)，夏萬青.2007.溫州地區(qū)番茄曲葉病毒病發(fā)生與防治.中國蔬菜，（5）：57-58.

于力，朱龍英，萬延慧，楊少軍，張輝，朱為民.2009.上海地區(qū)番茄黃化曲葉病毒病的鑒定及嫁接接種法研究.基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，28（1）：115-118.

趙統(tǒng)敏，余文貴，周益軍，季英華.2007.江蘇省番茄黃化曲葉病毒病（TYLCV）的發(fā)生與診斷初報.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，23（6）：654-655.

Momol M T，Simone GW，DankersW，Sprenkel R K，Olson SM，Momol E A，Polston JE，Hiebert E.1999.First report of tomato yellow leaf curl virus in tomato in South Georgia.Plant Disease，83：487.

Zhang Hui，Gong Huanran，Zhou Xueping.2009.Molecular characterization and pathogenicity of tomato yellow leaf curl virus in China.Virus Genes，39：249-255.