馬 杰，高 媛，趙玉新，李國(guó)峰

（哈藥集團(tuán)制藥總廠，黑龍江哈爾濱 150046）

細(xì)菌感染性疾病是我國(guó)多年來(lái)的常見(jiàn)病、多發(fā)病，一直嚴(yán)重威脅廣大人民的健康及生命安全。在治療上，目前以抗感染療法為首選，其中青霉素類、頭孢類和合成抗菌藥等占有絕大部分比例。歷來(lái)，此類優(yōu)秀藥物的生產(chǎn)、銷售、臨床應(yīng)用在世界排名上均居榜首。20世紀(jì)80年代以來(lái)，氟喹諾酮類合成抗菌感染藥得到了迅速的發(fā)展，它們的臨床應(yīng)用越來(lái)越廣泛，其中環(huán)丙沙星、氧氟沙星、斯帕沙星、左氟沙星為氟喹諾酮類藥物的優(yōu)秀代表，逐漸成為臨床上治療多種感染性疾病的一線藥物。

卡德沙星（又稱CS-940）由日本Ube公司創(chuàng)制，由日本三共公司開(kāi)發(fā)，對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、大腸埃希菌、克雷伯肺炎桿菌引起的小鼠全身感染，優(yōu)于環(huán)丙沙星、斯帕沙星、左氟沙星。對(duì)小鼠克雷伯肺炎桿菌引起的肺炎有效性最強(qiáng)，優(yōu)于所有受試藥物，開(kāi)發(fā)該藥物將可為抗感染領(lǐng)域增添一個(gè)新的優(yōu)秀品種，以滿足臨床用藥的需要。為有效地控制乳酸卡德沙星的質(zhì)量，筆者建立了HPLC法測(cè)定卡德沙星含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20A型高效液相色譜儀，包括SPD-20A型紫外檢測(cè)器、CTO-20A型柱溫箱和色譜工作站（日本島津公司）。

1.2 試藥

卡德沙星對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：130456-200502W，含量：82.0%）；乳酸卡德沙星（哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號(hào)：20070101、20070201、20070301）；乙腈、甲醇均為色譜純，檸檬酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.01 mol/L檸檬酸溶液-乙腈-甲醇（84∶16∶10）（用三乙胺調(diào)節(jié) pH 值至5.0）；檢測(cè)波長(zhǎng)：327 nm；柱溫：40℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 取卡德沙星對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每毫升中含0.5 mg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取乳酸卡德沙星適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每毫升中含0.5 mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的條件測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1?？ǖ律承堑睦碚摪鍞?shù)為5911，不低于3000，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于2.0，測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

取卡德沙星對(duì)照品50.02 mg，置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml于10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，分別取10 μl注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下的條件測(cè)定，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A=27058.5+18805059C（r=0.9999）。結(jié)果表明，卡德沙星濃度在0.30～0.70 mg/ml范圍內(nèi)線性相關(guān)性較好。見(jiàn)圖1。

圖1 線性關(guān)系曲線

2.5 中間精密度試驗(yàn)

分別于不同日期、由不同分析人員、用不同設(shè)備測(cè)定精密度，在含量測(cè)定范圍內(nèi)，將相當(dāng)于100%濃度水平的供試品溶液，進(jìn)行6次測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算卡德沙星含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，2次測(cè)定結(jié)果的RSD分別為0.15%、0.13%，2次結(jié)果平均RSD為0.15%，說(shuō)明該法中間精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下的條件測(cè)定，用流動(dòng)相配制供試品溶液，在室溫下放置，于 0、2、4、6、8 h 進(jìn)樣檢查，記錄色譜圖，峰面積的RSD為0.52%。結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，其峰面積測(cè)量值的RSD為0.08%，說(shuō)明該法重復(fù)性較好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品，在含量測(cè)定范圍內(nèi)，設(shè)計(jì)80%、100%和120%三種濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果表明，平均回收率為99.7%，RSD為0.49%，說(shuō)明該法回收率較好。

2.9 樣品含量測(cè)定

取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋成每毫升含0.5 mg的溶液，搖勻，精密量取樣品溶液10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取卡德沙星對(duì)照品適量，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中卡德沙星的含量。含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 吸收波長(zhǎng)的選擇

采用二極管陣列檢測(cè)器，對(duì)供試品溶液在200～400 nm范圍內(nèi)掃描。其最大吸收波長(zhǎng)為291 nm，由于其吸收較大，其稱樣量相對(duì)較小或進(jìn)行二次稀釋，容易產(chǎn)生誤差。因此，將檢測(cè)波長(zhǎng)由最大吸收波長(zhǎng)（291 nm）修訂為次大吸收波長(zhǎng)（327 nm），以簡(jiǎn)化操作。

3.2 緩沖液pH值的選擇

由于乳酸卡德沙星的酸度在4.0～5.5范圍內(nèi)，所使用的色譜條件要盡量與之相符，經(jīng)過(guò)對(duì)pH為4.0、4.5、5.0、5.5的4個(gè)條件進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，以pH=5.0條件最為合適。

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