陳汝紅，孫 婷，張艷艷

(1.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011; 2.河北省唐山市藥品檢驗(yàn)所，河北 唐山 063000)

硫酸卷曲霉素為多肽類抗生素，對(duì)結(jié)核分枝桿菌有抑制作用，是用于肺結(jié)核病的二線治療藥物。它含有4個(gè)極相近的組分(ⅠA，ⅠB，ⅡA，ⅡB)，其中卷曲霉素I為主要活性物質(zhì)，體外活性比卷曲霉素Ⅱ高數(shù)倍。ChP2005，USP30，BP2002均涉及卷曲霉素Ⅰ的含量控制，但未見硫酸卷曲霉素有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道。筆者參考Chp2005[1]，USP30，BP2002建立了其有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法，可用于硫酸卷曲霉素及其粉針劑的質(zhì)量控制。

1 儀器及試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，Waters 2487型紫外檢測(cè)器。卷曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0339－9802);硫酸卷曲霉素原料1批(南寧中科藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為0604101);注射用硫酸卷曲霉素4批(1批由華北制藥股份有限公司提供，規(guī)格為0.5 g，批號(hào)為051201;3批由南寧中科藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，規(guī)格為 0.5 g，批號(hào)分別為 0404001，0506001，0601001)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Gemini C18柱 (150 mm ×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:0.016 mol/L己烷磺酸鈉溶液－甲醇－乙腈－冰醋酸(60∶30∶8∶2);檢測(cè)波長(zhǎng):268 nm;進(jìn)樣量:20 μL。取卷曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，用水制成0.5 mg/mL的溶液，進(jìn)樣測(cè)定，高效液相色譜圖見圖1。卷曲霉素Ⅱ峰對(duì)卷曲霉素Ⅰ峰的相對(duì)保留時(shí)間約為0.45，卷曲霉素Ⅰ峰和卷曲霉素Ⅱ峰分別與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5。

2.2 供試品溶液制備

取供試品適量，用水溶解并制成1.0 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。

2.3 專屬性考察

對(duì)硫酸卷曲霉素原料進(jìn)行破壞試驗(yàn)。取原料50 mg，置50 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液5.0 mL，放置10 min，加1 mol/L鹽酸溶液5.0 mL中和，加水稀釋至刻度，搖勻(堿破壞)。取原料50 mg，置50 mL量瓶中，加 3 mol/L鹽酸溶液 5.0 mL，放置10 min，加3 mol/L氫氧化鈉溶液5.0 mL中和，加水稀釋至刻度，搖勻(酸破壞)。分別取上述兩種破壞溶液進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見圖2和圖3。可見，卷曲霉素Ⅰ峰、卷曲霉素Ⅱ峰分別與降解產(chǎn)物峰有較好的分離。

2.4 檢測(cè)限確定

取標(biāo)定的硫酸卷曲霉素對(duì)照品(南寧中科藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，批號(hào)為0604101，含卷曲霉素Ⅰ按卷曲霉素ⅠB計(jì)算為68.6%)適量，用水溶解并制成系列質(zhì)量濃度的溶液，進(jìn)樣測(cè)定。以信噪比 S/N為3時(shí)，注入儀器的量確定卷曲霉素Ⅰ的檢測(cè)限為2 ng。

2.5 樣品測(cè)定

分別取上述標(biāo)準(zhǔn)品1批、原料1批、制劑4批適量，用水制成1.0 mg/mL的溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至卷曲霉素Ⅰ峰保留時(shí)間的2倍。色譜圖見圖4。按峰面積歸一法計(jì)算卷曲霉素Ⅰ、卷曲霉素Ⅱ以及雜質(zhì)的含量，結(jié)果見表1。

2.6 耐用性試驗(yàn)

采用另外兩個(gè)不同品牌的色譜柱，測(cè)定以上6批樣品的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果基本一致。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)圖譜

圖2 堿破壞試驗(yàn)圖譜

圖3 酸破壞試驗(yàn)圖譜

圖4 樣品測(cè)定圖譜

表1 硫酸卷曲霉素有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果(%)

3 討論

卷曲霉素為堿性水溶性抗生素，含有多個(gè)極相近的組分，有關(guān)物質(zhì)不易分離。在ChP2005中，采用離子對(duì)色譜法，用C18柱對(duì)卷曲霉素Ⅰ、卷曲霉素Ⅱ進(jìn)行分離測(cè)定，卷曲霉素Ⅰ峰與卷曲霉素Ⅱ峰之間分離度較小，不利于有關(guān)物質(zhì)的檢出。本試驗(yàn)參考ChP2005卷曲霉素Ⅰ的測(cè)定方法，對(duì)甲醇及乙腈的比例、離子對(duì)試劑的濃度、流動(dòng)相的pH進(jìn)行了優(yōu)化。在所選色譜條件下，在卷曲霉素Ⅰ相對(duì)保留時(shí)間0.9的位置分離得到1個(gè)2%左右的未知雜質(zhì)，分離度滿意，卷曲霉素Ⅱ與其相鄰雜質(zhì)峰的分離度亦符合藥典要求。

取卷曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，用水溶解并稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度的溶液，在200～350 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。結(jié)果卷曲霉素在268 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此將測(cè)定波長(zhǎng)定為268 nm。

為了有效檢出有關(guān)物質(zhì)，將測(cè)定質(zhì)量濃度定為1.0 mg/mL，進(jìn)樣20 μL可檢出0.01%的雜質(zhì)(按卷曲霉素ⅠB計(jì)算)，能滿足雜質(zhì)控制要求。

USP29及BP2002采用氰基柱，將卷曲霉素Ⅰ分離成ⅠA和ⅠB兩個(gè)峰，其他峰未經(jīng)確證。英美藥典方法采用的氰基柱及流動(dòng)相緩沖鹽不易得，而且不須控制ⅠA和ⅠB的組成比例，筆者僅改進(jìn)了ChP2005卷曲霉素Ⅰ的測(cè)定方法，改進(jìn)后的方法檢出的有關(guān)物質(zhì)數(shù)目較多，雜質(zhì)總和與用英美藥典方法測(cè)定的相近。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:743.