赫俊峰，劉應(yīng)竹，李海軍，仲維宇

（1.黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所，哈爾濱，150040；2.大興安嶺興安鹿業(yè)有限公司，加格達(dá)奇，165023）

生長抑素主要是由下丘腦釋放的肽類激素，其生理作用是抑制垂體前葉的生長激素的釋放。脂質(zhì)體是近年來研究較多一種定向藥物載體，是靶向給藥物系統(tǒng)的一種新劑型。脂質(zhì)體具有類似生物膜的結(jié)構(gòu)，易于透過細(xì)胞壁而進(jìn)入血液循環(huán)。而且脂質(zhì)體具有靶向性及緩釋效果，沒有免疫原性［1～2］。用于藥物可以減少用量，延長藥效。半胱胺脂質(zhì)體能降低動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周組織生長抑素（SS）的免疫活性，提高生長激素（GH）分泌的基線水平，并且CS的作用呈時間可逆轉(zhuǎn)和劑量依賴性［3］。本研究根據(jù)CS抑制SS，促進(jìn)GH分泌的生物學(xué)作用，用脂質(zhì)體技術(shù)來制備半胱胺脂質(zhì)體，在幼梅花鹿上試驗(yàn)，分析不同劑量半胱胺脂質(zhì)體對幼梅花鹿增重、成活率、飼料表觀消化率及血液SS，GH含量的影響，以降低幼梅花鹿血液及胃腸道SS含量，促進(jìn)其生長，同時提高飼料轉(zhuǎn)化率，減少飼養(yǎng)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組設(shè)計(jì)

該研究于2008年至2009年在黑龍江省大興安嶺新林區(qū)興安鹿業(yè)有限公司進(jìn)行，該公司現(xiàn)擁有優(yōu)良梅花鹿和馬鹿5000余頭，每年梅花鹿產(chǎn)仔700～1000頭，完全能滿足本次實(shí)驗(yàn)動物的需要。本次試驗(yàn)選擇出生后體質(zhì)健康的梅花鹿120頭作為試驗(yàn)動物，將120 頭 60 日齡梅花鹿隨機(jī)分為 4 組（CS0、CS100、CS150、CS200），每組30頭。按照CS脂質(zhì)體不同劑量依次為0、100、150、200mg/kg體重飼喂4個組。間隔一天飼喂CS脂質(zhì)體1次，實(shí)驗(yàn)期為120d。

1.2 試驗(yàn)材料

半胱胺，膽固醇：購自sigma公司，粉粒狀大豆磷脂（PC：10%～25%）：黑龍江前進(jìn)油脂廠，半胱胺脂質(zhì)體：自制（按大豆磷脂：膽固醇：半胱胺=15:3:1.8（質(zhì)量比），用逆向蒸發(fā)法制備半胱胺脂質(zhì)體，包封率為24.6%。

1.3 基礎(chǔ)飼料的組成

精飼料在當(dāng)?shù)刈孕信渲疲囼?yàn)期內(nèi)每天現(xiàn)用現(xiàn)配，按時、按量添加半胱胺脂質(zhì)體，料型采用粉型。粗飼料冬天飼喂干羊草、豆皮和青儲飼料，夏天喂當(dāng)?shù)厍嗖莺鸵恍┣鄻淙~。精飼料冬夏基本不變，其配方及成分比例見表1。

表1 幼梅花鹿精飼料配方及所占百分比Table 1 The fine fodder formulation for sika deer

1.4 血液樣品采集及指標(biāo)測定

試驗(yàn)至180日齡時空腹稱重，并從耳朵靜脈采血，將分離的血清置-20℃冰箱保存待測。血液SS和GH含量用放免法測定，SS藥盒由上海第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)研究室提供，GH藥盒為本次研究人員自制的pGH藥盒，已作倍比稀釋實(shí)驗(yàn)，有相關(guān)性。為排除性別、疾病及死亡鹿對結(jié)果的干擾，每組中發(fā)病及死亡梅花鹿資料不作統(tǒng)計(jì)，故論文中出現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)開始與結(jié)束時梅花鹿數(shù)量的不相等。

1.5 鈣、磷及粗蛋白測定

用凱氏定氮法測定飼料樣及糞樣中粗蛋白質(zhì)含量；用KMnO4法測定飼料樣及糞中鈣的含量；用鉬藍(lán)法721分光光度計(jì)測定飼料樣及糞樣中磷的含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和處理，試驗(yàn)結(jié)果采用方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及最小顯著極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

表2 半胱胺脂質(zhì)體對幼梅花鹿增重的影響Table 2 The effect of liposome-cysteamine on the body weight gain of sika deer

2.1 幼梅花鹿增重的影響

通過2個生物學(xué)周期的試驗(yàn)研究，半胱胺脂質(zhì)體對幼梅花鹿體增重影響顯著（表2），由表2可知，CS100組凈增重比對照組提高48.3%（P＜0.05），而其它劑量組增重?zé)o明顯變化。

2.2 幼梅花鹿血液SS和GH含量的影響

表3 半胱胺脂質(zhì)體對幼梅花鹿血液SS和GH含量的影響Table 3 The effect of liposome-cysteamine on the content of SS and GH in the blood of sika deer

血液SS的放免測定結(jié)果表明，與對照組相比，CS100、CS150、CS200組的 SS含量分別下降 69.6%（P＜0.05）、75.4%（P＜0.025） 和 75.8%（P＜0.01），但 GH 水平只在CS100組有明顯升高（P＜0.05），其它劑量組無明顯變化（表 3）。

2.3 半胱胺脂質(zhì)體對幼梅花鹿鈣、磷、粗蛋白表觀消化率的影響

在測定時,分別記錄每個組幼梅花鹿每日平均采食量和平均排糞量,再分別計(jì)算其中各養(yǎng)份的含量,并折成干物質(zhì)，算出具體含量，最后按下列公式算出表觀消化率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

表觀消化率=（食入該養(yǎng)分的質(zhì)量—糞中該養(yǎng)分的質(zhì)量）/食入該養(yǎng)分的質(zhì)量

表4 鈣、磷、粗蛋白的表觀消化率比較Table 4 The apparent digestibility of calcium,phosphorus and crude protein

從表4鈣、磷、粗蛋白的表觀消化率比較一覽表中可以看出，在各個組中，CS100組的效果明顯好于對照組，CS150和CS200組差別不明顯。CS100對幼梅花鹿鈣、磷、粗蛋白表觀消化率影響的方差分析結(jié)果達(dá)到了顯著的水平（P＜0.05）（與對照組相比）。

2.4 幼梅花鹿成活率的比較

試驗(yàn)120d后，對4個組的梅花鹿成活率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，CS0（對照）成活率為86.7%，CS100的成活率為100%，CS150和CS200的成活率分別為90%、93.3%。CS100組梅花鹿的成活率最好，達(dá)到了100%，這與飼喂半胱胺脂質(zhì)后提高了梅花鹿的消化率，也提高了自身的抵抗力和免疫力有關(guān)，所以發(fā)病率低，成活率高。

3 討論

一般認(rèn)為SS抑制垂體前葉GH的釋放，而GH又是促進(jìn)動物生長的關(guān)鍵激素。Lassiter CA等［4］報道，大鼠紋狀體局部注射不同劑量 CS（0，7.5，15，30，50，100mg），結(jié)果以30mg劑量所致的SS含量下降最明顯。因?yàn)镾S抑制垂體GH的釋放，有人又研究了CS對GH分泌的影響，Millard等［5］報道，皮下注射CS改變了大鼠GH的分泌模式，當(dāng)注射CS300 mg/kg時，血漿GH水平在給CS后立即下降，以后略微回升，但分泌缺乏峰和谷；當(dāng)90mg/kg時，GH分泌有明顯的峰和谷，基線水平抬高；而30mg/kg對GH分泌無明顯影響。在本次試驗(yàn)中，幼梅花鹿飼喂不同劑量 CS（100、150、200mg/kg體重），SS含量比對照分別下降 69.6%、75.4%和75.8%，GH水平僅在CS100組明顯升高。這些結(jié)果與上述報道基本一致，所以CS的作用表現(xiàn)在劑量上具有依賴性。在超過150mg/kg體重劑量后，即使加大CS的飼喂?jié)舛龋琒S含量也不呈繼續(xù)下降趨勢，并且盡管CS150和CS200組的SS含量低于CS100組，但GH水平的升高僅發(fā)生在CS100組。這些可能是由于下丘腦SS與生長激素釋放因子（GRF）之間的超短反饋或垂體GH的短環(huán)負(fù)反饋所致的GRF分泌減少所致。

SS除分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)外，還廣泛存在于消化器官中，抑制其消化吸收機(jī)能［6］。CS通過降低消化道SS含量，加強(qiáng)營養(yǎng)物的消化吸收，從而提高飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)幼梅花鹿生長和發(fā)育。CS能明顯降低梅花鹿消化道的SS含量，飼喂半胱胺脂質(zhì)體（100mg/kg體重）能顯著提高鈣、磷和粗蛋白的表觀消化率。

總之，半胱胺脂質(zhì)體拌于幼梅花鹿飼料內(nèi)飼喂，間隔一天一次，使用方便，成本低。以降低水平SS水平，促進(jìn)動物生長的方法，有希望發(fā)展成為通過神經(jīng)內(nèi)分泌途徑調(diào)控生長的一項(xiàng)生物技術(shù)在畜牧生產(chǎn)中推廣應(yīng)用，將有良好的經(jīng)濟(jì)效益。

［1］王艷玲，陳偉華.不同劑量半胱胺對肉用仔雞增重及血液生長抑素、生長激素含量的影響［J］.中國畜牧雜志，1997，4：11～ 13.

［2］林玲，韓正康.半脆胺對生長動物生長速度和有關(guān)激索水平的影響［C］//第十八屆中國生理學(xué)大會學(xué)術(shù)論文摘要匯編.上海:生理學(xué)通訊增刊，286～287.

［3］趙世臻.養(yǎng)鹿文化薈萃［M］.長春:吉林人民出版社,2001.553～586.

［4］LASSITER C A，F(xiàn)RIES G F，HUFFMAN C F，et a1.Effect of pepsin on the growth and health of young dairy Ca1ves fed Varies milk-replacer rations［J］.Journal ofDairyScience,1959（42）：666～670.

［5］MILLARD，S R EICH LIN，A New Feed Additive-Cysteamine&Mechanism and Its Effects on Animal［J］.Endocrinology，1981，109:2255～2257.

［6］王艷玲、韓正康.半胱胺對妊娠大鼠乳腺發(fā)育及血液生長抑素生長激素含量的影響［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1993，16（增刊）:5～8.