李英霞， 侯立靜

(山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014)

千金子為大戟科植物續(xù)隨子Euphorbia Lathyris L.的種子，有逐水消腫，破血散結(jié)的功效。用于水腫、痰飲、積聚腹脹，二便不通，癥瘕積聚等癥［1］。千金子為毒性中藥，一般認(rèn)為所含的脂肪油能產(chǎn)生峻瀉，必須去油炮制，炮制的目的在于減毒、緩和其峻瀉之性［2］。制霜法是千金子炮制文獻(xiàn)記載最多的一種方法，一般是將種仁碾碎如泥，紙包裹，上壓重物吸油或壓榨器反復(fù)壓榨，去除大部分油脂后，至“吸油紙上不顯油痕”或“藥物松散不再黏成餅”為度［3］。制霜方法又分冷法制霜、熱法制霜和蒸法制霜。長(zhǎng)期以來(lái)，由于制霜工藝落后，生產(chǎn)效率低下，缺乏專用的制霜設(shè)備和明確的工藝技術(shù)指標(biāo)，有些地區(qū)以炒品代替霜品，致使各地炮制品炮制程度各異，炮制品質(zhì)量相差較大。雖然在2005年版《中國(guó)藥典》(一部附錄21)［4］的炮制通則中規(guī)定了去油制霜方法:“取凈藥材碾碎如泥，經(jīng)微熱，壓榨除去大部分油脂后，取殘?jiān)兄瞥煞弦?guī)定要求的松散粉末”。但加熱的方式、加熱溫度和時(shí)間均沒(méi)有作明確的規(guī)定，仍然存在制霜工藝技術(shù)指標(biāo)不明確、去油程度不易掌握等問(wèn)題。研究者利用各自不同的去油方法進(jìn)行制霜，所得到的千金子霜雖然外觀質(zhì)量符合傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別的要求，但含油量相差較大［4-5］。因此，研制千金子制霜的專用設(shè)備，制定統(tǒng)一的制霜工藝技術(shù)指標(biāo)是很有必要的。本研究利用新研制的小型壓油制霜設(shè)備，采用正交試驗(yàn)方法，以千金子霜含油量和兩種主要瀉下成分續(xù)隨二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯為綜合考察指標(biāo)，對(duì)千金子的制霜工藝進(jìn)行了研究，為制定千金子制霜工藝技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器、設(shè)備與材料

Waters2695型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司);250型制霜機(jī)(杭州春江機(jī)械自動(dòng)化研究所研制);R-201型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司)，SW-2型便攜式數(shù)字指示表面溫度計(jì)(浙江省慈溪市光華數(shù)字顯示儀器)。

續(xù)隨二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯對(duì)照品購(gòu)自北京顯通時(shí)代醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司(批號(hào)20081106，200812228)，經(jīng) HPLC面積歸一化法測(cè)定，純度分別達(dá)98.0%和99.67%，經(jīng)光譜測(cè)定，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道［6-8］的結(jié)構(gòu)測(cè)定數(shù)據(jù)基本一致。

千金子藥材購(gòu)自主產(chǎn)地河南南陽(yáng)，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院李英霞副研究員鑒定為續(xù)隨子(Euphorbia Lathyris L.)的成熟種子。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 利用新研制的小型壓油制霜設(shè)備，經(jīng)反復(fù)制霜預(yù)試，千金子壓油制霜工藝選取了種仁前處理方式、加熱溫度及加熱時(shí)間作為正交設(shè)計(jì)的三個(gè)因素，分別設(shè)定相應(yīng)的三個(gè)水平，選用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，固定投料量為100 g，壓縮體積約為35 cm3，以千金子霜含油量和主要瀉下成分續(xù)隨二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯為考察指標(biāo)，結(jié)合傳統(tǒng)霜的經(jīng)驗(yàn)鑒別標(biāo)準(zhǔn)，綜合評(píng)價(jià)，對(duì)壓油制霜過(guò)程中的工藝參數(shù)進(jìn)行了正交試驗(yàn)選擇。因素水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平表

固定投料量和壓縮體積后，采用該制霜小型設(shè)備壓制的千金子霜中含油量基本保持在18%以上。2005年版《中國(guó)藥典》(一部)千金子霜項(xiàng)下規(guī)定含油量限度為18%～20%，根據(jù)所測(cè)千金子霜含油量和兩種瀉下成分含量范圍分別將其分為5個(gè)等級(jí)，含油量越接近18%～20%評(píng)分越高。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:18.0% ～20.0% 評(píng)為 90 ～100 分;21.0% ～25.0%評(píng)為70～89分;26% ～29%評(píng)為51～69分;30% ～40%評(píng)為0～50分。含油量越低，瀉下成分含量也越低，兩種瀉下成分含量越低評(píng)分越高。續(xù)隨二萜酯含量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:0.10% ～0.16%評(píng)為90～100分;0.17% ～0.25% 評(píng)為 70～89 分;0.26% ～0.30%評(píng)為51～69分;0.31% ～0.40%評(píng)為0～50分。千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯含量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):0.20% ～0.25% 評(píng)為 90 ～100 分;0.26% ～0.36%評(píng)為70～89分;0.37% ～0.40%評(píng)為51～69分;0.41% ～0.69%評(píng)為0～50分。

2.2 千金子霜的制備

直接粉碎壓油制霜:稱取千金子種仁100 g，粉碎成泥狀(粒度約為40～60目)，裝入制霜機(jī)物料腔內(nèi)，接通電源，打開(kāi)溫控開(kāi)關(guān)，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表中的要求設(shè)定加熱溫度和時(shí)間，對(duì)物料進(jìn)行加熱，通過(guò)對(duì)物料擠壓出油，記錄出油量及出油時(shí)間。待壓油完畢，打開(kāi)物料腔，取出藥渣，放涼，稱取重量，記算得率，粉碎過(guò)40目篩。

微炒后粉碎壓油制霜:稱取千金子種仁100 g，置炒鍋內(nèi)，鍋底溫度控制在90～100℃，微炒3 min，種仁略變黃色，粉碎成泥狀，裝入物料腔內(nèi)，按上述制霜方法進(jìn)行壓制。

粉碎后略蒸壓油制霜:稱取千金子100 g，粉碎成泥狀，紗布包裹，置蒸鍋內(nèi)蒸約8 min(蒸透)，取出，裝入物料腔內(nèi)，按上述制霜方法進(jìn)行壓制。不同壓制條件下千金子制霜情況見(jiàn)表2。

表2 不同壓制條件千金子制霜結(jié)果表

2.3 含油量測(cè)定 分別稱取正交試驗(yàn)中9份千金子霜樣品適量，加石油醚(60℃ ～90℃)索氏提取至完全后，放冷，濾過(guò)，濾液回收溶媒，蒸干，105℃干燥至恒重，計(jì)算含油量。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.4 續(xù)隨二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯含量測(cè)定 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［9-10］千金子中的續(xù)隨二萜酯(即6，20-環(huán)氧千金二萜醇苯乙酸酯二乙酸酯，又稱千金子甾醇)具有導(dǎo)瀉作用，為千金子中的主要瀉下成分。經(jīng)作者初步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)千金子中的另一成分千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯也具有明顯提高小鼠小腸推進(jìn)率的作用，且含量較高，因此，作者以HPLC法測(cè)定了千金子霜中兩種瀉下成分的含量。

2.4.1 色譜條件:Kromasil C18柱(4.6 mm × 150 mm，5 μm)，流動(dòng)相:甲醇-水(68 ∶32)，柱溫:40 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng):280℃，體積流量:1 mL/min，進(jìn)樣量:10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

表3 正交試驗(yàn)計(jì)劃表及結(jié)果

圖1 對(duì)照品(A)和千金子霜樣品(B)HPLC圖

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 分別取續(xù)隨二萜酯和 千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯對(duì)照品適量，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇適量溶解，稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度為0.200 mg/mL和0.206 mg/mL的溶液作為貯備液。分別精密量取兩種貯備液2.0 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇適量稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，濃度分別為0.080 mg/mL和0.105 mg/mL。

2.4.3 線性關(guān)系考察 精密量取上述對(duì)照品貯備液 0.5、1.0、2.0、3.0、3.5、4.0mL，分別置 5 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成相應(yīng)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為:續(xù)隨二萜酯:Y=16699902X-28424.03，r=0.9997，千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯:Y=1492670X-33977，r=0.9999，結(jié)果表明，續(xù)隨二萜酯在0.200 μg ～1.200 μg，千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯在 0.206 μg ～1.651 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.4 樣品測(cè)定 取正交試驗(yàn)得到的9份千金子霜0.15 g，精密稱定，加甲醇 20 mL，水浴回流 2 h，放冷，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，加甲醇適量溶解，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，進(jìn)樣 10μL 測(cè)定，對(duì)照品溶液同時(shí)測(cè)定，采用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中兩種成分的含量。結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

表4 方差分析表(F0.01(2，2)=99.00)

由直觀分析和方差分析結(jié)果來(lái)看，B因素(加熱溫度)對(duì)千金子霜含油量和兩種瀉下成分續(xù)隨二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的含量有極顯著影響，A因素(種仁前處理方式)和C因素(加熱時(shí)間)對(duì)結(jié)果影響不明顯。對(duì)于B因素，K3＞K2＞K1，說(shuō)明加熱溫度越高，出油量越大，霜中含油量越低，兩種瀉下成分含量也隨之降低，但溫度太高會(huì)加深霜的顏色，在所選的溫度內(nèi)，含油量可以達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求，故選擇水平3，即加熱溫度為55℃;對(duì)于A因素來(lái)說(shuō)，K3＞K2＞K1，可選水平3，但在壓制過(guò)程中發(fā)現(xiàn)種仁泥經(jīng)蒸制后變黏稠，出油時(shí)間加長(zhǎng)且易堵塞油孔，制備的霜含水量明顯比冷壓和炒壓要高，而炒壓比冷壓容易出油，A因素又是次要因素，故選水平2，即種仁先炒后再壓。對(duì)于C因素來(lái)說(shuō)，K3＞K2＞K1，選水平3，即加熱時(shí)間為30 min。綜合分析，確定千金子最佳制霜工藝為A2B3C3，即千金子種仁于100～120℃微炒3 min后，粉碎成泥狀(粒度約為40～60目)，55℃左右加熱30 min，出油率控制在51% ～53%(g/g)，出霜率控制在45% ～47%(g/g)，霜含油量可控制在20%左右。

3 驗(yàn)證試驗(yàn)

為進(jìn)一步考察上述優(yōu)選工藝的重復(fù)性，按上述條件進(jìn)行了3次重復(fù)性試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 3批千金子霜驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

由表5可以看出千金子制霜工藝重復(fù)性良好，含油量均符合規(guī)定要求。

4 討論

4.1 傳統(tǒng)制霜方法多是手工操作，周期長(zhǎng)，效率低，一般需要幾十天甚至數(shù)月，費(fèi)工費(fèi)時(shí)，缺乏專有的制霜設(shè)備，嚴(yán)重影響制霜品的質(zhì)量，難以保證其臨床用藥的安全性和有效性。本試驗(yàn)所采用的壓油制霜新設(shè)備，具有溫控裝置及出油口，可有效控制加熱溫度、加熱時(shí)間及出油量，制霜過(guò)程一般僅需1個(gè)小時(shí)左右，大幅度提高了制霜效率，填補(bǔ)了制霜設(shè)備的空白。

4.2 關(guān)于千金子霜中主要瀉下成分質(zhì)控方法的研究以及制霜是否對(duì)瀉下成分產(chǎn)生影響，尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究建立了HPLC法測(cè)定千金子霜中主要瀉下成分含量的方法，并且考察了其在制霜過(guò)程含量的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)瀉下成分隨千金子霜含油量的降低而降低，初步揭示了千金子制霜炮制的科學(xué)內(nèi)涵。

4.3 千金子霜的炮制方法各地不一，加熱方法有烘烤、炒制、蒸熱、曝曬和炕熱等，溫度不同，時(shí)間也不一致，對(duì)不同制霜條件進(jìn)行對(duì)比研究的相關(guān)報(bào)道也屬空白。本試驗(yàn)首次利用新型制霜設(shè)備，采用多種考察指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，對(duì)千金子制霜工藝參數(shù)進(jìn)行了正交試驗(yàn)優(yōu)選，填補(bǔ)了制霜工藝研究的空白，為制定千金子制霜工藝技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

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