肖 慧， 劉清飛， 王義明， 羅國安*， 鄭亞玉

(1.清華大學生命科學與醫(yī)學研究院，北京100084;2.貴陽中醫(yī)學院，貴州貴陽550002)

巖白菜素(Bergenin)，又稱巖白菜內(nèi)酯、矮茶素、佛手配質(zhì)，分子式為C14H16O9，為白色疏松針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末;氣微，味苦。遇光和熱變色，在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶。巖白菜素具有鎮(zhèn)咳祛痰，提高免疫的作用，是治療慢性支氣管炎的常用藥，2005年版《中國藥典》一部收載為鎮(zhèn)咳祛痰藥，用于慢性支氣管炎。目前市場上主要劑型有普通片、口含片、口崩片、滴丸、軟膠囊、糖漿、口服液等等，其中以普通片劑應(yīng)用最廣泛。但普遍存在口服吸收差，生物利用度低的問題。緩釋片的吸收時間長，血藥峰濃度相對降低且血藥濃度波動減小，藥物總吸收不變，因此可更好的維持平穩(wěn)的血藥濃度，提高患者的治療依從性。但是緩釋制劑也有不足之處，如釋藥緩慢，所以藥物起效較普通制劑慢，為了改善這一點，本實驗將巖白菜素壓制成既有速釋又有緩釋部分的雙層片，達到既速效又長效的目的。本研究探討巖白菜素雙層片的制備并對其進行質(zhì)量評價。

1 儀器與試藥

大連依利特 C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);Agilent 1100型高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司);YST-100雙層壓片機(江蘇省金壇市威克壓片廠);XS105 型電子天平(d=0.01 mg，METTLERTOLEDO);AL104型電子天平(METTLER-TOLEDO);Tu-1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);RC-8溶出度測試儀(天津市新天光分析儀器技術(shù)有限公司);CJY-300B型片劑脆碎度測試儀(上海黃海藥檢儀器有限公司);YPD-200C型片劑硬度儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)。

巖白菜素(批號:20080515，純度:98.2%，南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司);巖白菜素雙層片(自制，批號:20080801，20080802，20080803，規(guī)格:325 mg);羥丙基甲基纖維素(K100M，K15M，K4M，藥用級，上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司);乳糖(藥用級，武漢合中醫(yī)藥化工有限公司);微晶纖維素(101，藥用級，曲阜市天利藥用輔料有限公司);硬脂酸鎂(藥用級，湖州展望藥業(yè)有限公司);水為蒸餾水;甲醇(色譜純，美國Merck公司);甲醇、乙醇(分析純，天津市大茂化學試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 巖白菜素雙層片制備 為使巖白菜素雙層片既具有速釋作用又具有緩釋作用，欲制備的巖白菜素雙層片的理論累積釋放度標準如表1。

表1 巖白素雙層片理論累積釋放度

10 min前主要由速釋層釋藥，發(fā)揮速效作用;10 min～10 h由緩釋層釋藥，發(fā)揮長效作用。

2.1.1 緩釋層骨架材料的篩選 為篩選出適合的骨架材料，根據(jù)初步研究，對20%的 HPMCK4M、HPMCK15M和HPMC K100M壓制的單層緩釋片的累積釋放度進行比較，結(jié)果見圖1。

圖1 不同黏度HPMC制得緩釋片釋放曲線

由圖1可知，隨著HPMC黏度增加藥物釋放速度逐漸減慢，本試驗選用HPMCK4M作為骨架緩釋材料。

2.1.2 HPMCK4M用量的篩選 選擇占總片重的比率分別為20%、30%、40%的HPMCK4M用量，同時加入巖白菜素及其它輔料，以乳糖調(diào)節(jié)片重恒定250 mg。按照制備工藝制備緩釋片，測定不同時間的累積釋放度，繪制釋放曲線，實驗結(jié)果見圖2。

由圖2可知，隨著HPMCK4M用量的增加藥物釋放速度逐漸減慢，HPMCK4M占20%時釋放快，30%時釋放慢，最佳HPMCK4M用量在20% ～30%之間。

圖2 不同用量的HPMCK4M釋放曲線

對HPMCK4M的用量和片劑硬度大小進行進一步篩選，結(jié)果表明當水凝膠骨架材料選用HPMCK4M且用量為25%，硬度為40N～70 N時，釋放度曲線與緩釋層理論釋放曲線接近，2、5、10h累積釋放度分別為 24.03%、53.16%、92.65%。根據(jù)巖白菜素的藥動學性質(zhì)，緩釋層:速釋層以2:1比例的巖白菜素量添加速釋層，制備的巖白菜素雙層片的釋放曲線與設(shè)計的理論釋放曲線比較接近。

2.1.3 巖白菜素雙層片制備 將雙層片各組分過80目篩。按緩釋層處方量稱取巖白菜素及輔料，按等量遞增法混勻，用適量1%的PVPK30乙醇溶液制軟材，24目制粒，烘干，24目整粒，外加0.5%硬脂酸鎂混勻，制備得緩釋顆粒;按速釋處方量稱取巖白菜素、微晶纖維素及乳糖等輔料，充分混勻，用適量5%PVPK30乙醇溶液制成軟材，24目制粒，烘干，24目整粒，外加0.5%硬脂酸鎂混勻，制備得速釋顆粒。先以較小的壓力壓制緩釋片，再在緩釋片的基礎(chǔ)上壓制雙層片。

2.2 巖白菜素陰性雙層片制備 除巖白菜素外，將其它所有組分按巖白菜素雙層片的處方配比和制備方法制備即得。

2.3 外觀性狀 制備的巖白菜素雙層片表面光潔，白色片。

2.4 硬度 隨機從制備的3批白菜素雙層片中各取20片，用硬度儀檢測硬度。結(jié)果:巖白菜素雙層片的硬度均在40 N～70 N，3批巖白菜素雙層片的硬度均較好。

2.5 脆碎度 隨機從制備的3批巖白菜素雙層片中各取45片，按照《中國藥典》2005年版二部附錄XG(片劑脆碎度檢查法)檢測?！吨袊幍洹?005年版二部附錄XG(片劑脆碎度檢查法)規(guī)定，本實驗一般僅作1次，如減失重量超過1%時，應(yīng)復檢2次，3次的平均減失重量不得超過1%，并不得檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。結(jié)果表明，3批樣品均符合《中國藥典》2005年版規(guī)定。

2.6 片重差異 隨機取3批巖白菜素雙層片各20片，按照《中國藥典》2005年版二部附錄ⅠA片劑中重量差異檢測方法檢測。結(jié)果表明，3批巖白菜素雙層片片重差異較小，RSD分別為0.98%、1.17%、1.25%，符合《中國藥典》2005年版二部附錄ⅠA片劑中重量差異要求。

2.7 含量測定

2.7.1 標準曲線制備 精密稱取巖白菜素對照品24.82 mg，置25 mL棕色量瓶中，用5 mL甲醇溶解，并用水稀釋制成濃度為每1 mL含巖白菜素0.9928 mg的溶液，即得對照品貯備液。精密吸取上述對照品貯備液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置于 10 mL棕色量瓶中，加入20%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為 49.64、99.28、198.6、297.8、397.1、496.4 μg/mL的對照品溶液，按上述色譜條件測定，測定峰面積，以巖白菜素峰面積為縱坐標，對照品濃度(μg/mL)為橫坐標，繪制標準曲線，線性回歸方程:Y=12190X-17.917(r=1.0000)，結(jié)果表明巖白菜素在49.64～496.4 μg/mL 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.7.2 樣品溶液制備 取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于巖白菜素10 mg)置50 mL量瓶中，加10 mL甲醇溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得巖白菜素雙層片樣品溶液。

2.7.3 巖白菜素雙層片陰性溶液的制備 取陰性雙層片，照供試品溶液制備項下制備，即得巖白菜素陰性溶液。

2.7.4 色譜條件 色譜柱:大連依利特 C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);柱溫:25 ℃;流動相:甲醇-水(23:77);檢測波長:275 nm;流速:1.0 mL/min。

2.7.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 本試驗采用流動相甲醇-水系統(tǒng)進行洗脫，測定本品中巖白菜素的含量，分離效果良好，色譜圖見圖3。

從以上HPLC圖可見，巖白菜素的保留時間在7.3 min左右，陰性無干擾，理論塔板數(shù)按巖白菜素峰計為10786。

2.7.6 檢測限和定量限的測定 在選定的色譜條件下，按信噪比為3:1、10:1分別對其最低檢測限和定量限進行測定，結(jié)果表明，檢測限和定量限分別為2.97 μg、9.93 μg。

2.7.7 樣品的含量測定 取批號為20080801批、20080802批、20080803的巖白菜素雙層片按2.7.2項下制備9份樣品，按2.7.4項下的色譜條件測定峰面積，根據(jù)線性方程計算含量，三批巖白菜素雙層片的含量分別為 57.18%、57.41%、57.18%。

圖3 巖白菜素HPLC圖

2.8 巖白菜素雙層片釋放度檢測

2.8.1 標準液配制 精密稱取巖白菜素對照品22.00 mg置于50 mL棕色量瓶中，用10 mL甲醇溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，得濃度為440 μg/mL的對照品貯備液，精密量取此對照品貯備液2、3、4、5、6、7 mL置于100 mL棕色量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為 8.800、13.20、17.60、22.00、26.40、30.80 μg/mL 巖白菜素對照品溶液。

2.8.2 標準曲線的制備 取上述對照品溶液在275 nm波長處測定吸度，吸收度A對濃度C對進行線性回歸，得回歸方程，A=22.591C+0.0006(r=0.9999)。結(jié)果表明在275 nm處，巖白菜素的濃度在8.80～30.80 μg/mL范圍內(nèi)與吸收度線性相關(guān)。

2.8.3 釋放度測定 根據(jù)2005年版《中國藥典》緩釋制劑指導原則(附錄X D)釋放度測定法的有關(guān)規(guī)定，采用第1法測定緩釋片在不同時間點的累積釋放度。分別量取經(jīng)脫氣處理的純水900 mL于6個溶出杯中，加溫至釋放介質(zhì)溫度恒定在(37±0.5)℃。調(diào)整攪拌漿的轉(zhuǎn)速至100 r/min。自巖白菜素雙層片接觸釋放介質(zhì)起，立即計時;分別于第10 min、30 min、1 h、2 h、3 h、5 h、7 h 和 10 h 吸取釋放液6 mL，用0.45 μL 微孔濾膜過濾，收集濾液，待檢測。同時補充6 mL空白釋放介質(zhì)。采用UV法進行樣品含量測定，計算累積釋放度。

2.8.4 巖白菜素雙層片的累積釋放度檢測 分別對巖白菜素雙層片和巖白菜素速釋部分在水中累積釋放度進行了考察。從而推算出巖白菜素緩釋部分的累積釋放度，結(jié)果見表2。累積釋放曲線見圖4。

2.8.5 釋藥動力學分析 巖白菜素雙層片及巖白菜素速釋、緩釋部分的體外釋放行為見圖4。巖白菜素雙層片速釋部分在10 min內(nèi)完全崩解，巖白菜素雙層片緩釋部分釋藥持續(xù)10 h。

表2 巖白菜素雙層片的累積釋放度

圖4 巖白菜素雙層片、速釋部分、緩釋部分的體外釋放曲線

對10 min ～10 h 分別按 Peppas、Higuchi、零級方程和一級方程進行擬合，結(jié)果見表3。

表3 10 min～10 h巖白菜素雙層片緩釋層釋放方程的擬合

如表3所示，在10 min～10 h，Peppas方程相關(guān)系數(shù)最大，最能反應(yīng)緩釋層的釋放動力學特征及釋放過程。

3 討論

3.1 巖白菜素雙層片的緩釋層采用國內(nèi)外應(yīng)用廣泛的非離子型纖維素，其具有可壓性好、流動性好、釋藥特性不受pH影響等優(yōu)點［1-2］，巖白菜素雙層片速釋層應(yīng)用易崩解輔料，使其在10 min內(nèi)崩解完全。因速釋層釋放非?？?，雖然壓成雙層片后有一個側(cè)面被隔離不能與溶出介質(zhì)直接接觸，但考慮到速釋片釋放非?？?，因此可以認為不影響雙層片中速釋部分的檢測。此外，緩釋部分的釋放因為也是有一個面被隔離，但速釋部分崩解快，因此可認為不影響緩釋層釋放。

3.2 從圖4釋放度曲線可看出，0～10 min曲線斜率遠大于10 min～10 h曲線斜率，由此可見0～10 min主要是速釋層釋藥，10 min后則是緩釋層釋藥。速釋層快速釋藥使血藥濃度快速達到有效濃度，發(fā)揮療效;緩釋層緩慢釋藥能使機體在一段時間內(nèi)維持平穩(wěn)有效血藥濃度，提高治療依從性。

3.3 巖白菜素雙層片的釋放曲線按Peppas方程進行擬合，n為0.88(10 min～10 h)，說明在10 min～10 h段表現(xiàn)為不規(guī)則轉(zhuǎn)運。

3.4 國內(nèi)已上市的巖白菜素的劑型基本為口服制劑，分為單方和復方，但普遍存在口服吸收差，生物利用度低的問題。通過查閱資料僅能得知普通制劑給予人和狗口服后，吸收快但不完全，半衰期短(T1/2β)為 4.13 h［3］，生物利用度不高，4 h 后尿中出現(xiàn)原型藥物。狗肌注后出現(xiàn)血藥濃度高峰，1 h后出現(xiàn)尿藥濃度高峰。本文雙層片中的緩釋層釋藥使有效血藥濃度維持一定時間，提高生物利用度。

3.5 本試驗僅進行了巖白菜素雙層片的體外釋藥，巖白菜素雙層片的體內(nèi)釋藥有待進一步研究。

［1］羅明生，高天惠.藥劑輔料大全［M］.成都:四川科學技術(shù)出版社，1995.

［2］Mehuys E，Vervaet C，Remon J P.Hot-melt extruded ethyllellulose cylinders containing a HPMC-Gelucire core for sustained drug delivery［J］.J Controlled Release，2004，94(2):273.

［3］Yan B S，Yan P S，Qing G M.Determination and pharmacokinetic study of bergenin in rat Plasma by RP-HPLC method［J］.Biomed Chromatogr，2006，20:1069.