王珊珊 徐國(guó)興

?

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化視網(wǎng)膜神經(jīng)樣細(xì)胞的研究進(jìn)展

王珊珊1.2徐國(guó)興1

1.福建醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 2.福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院

視網(wǎng)膜色素變性及老年性黃斑變性是嚴(yán)重威脅視力的疾病，目前臨床上缺乏有效的治療方法。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs) 有跨胚層分化能力，在一定的條件下可以向神經(jīng)細(xì)胞分化。大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成為視網(wǎng)膜色素細(xì)胞的研究為此類疾病的治療帶來(lái)了希望，成為近年來(lái)該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。本文對(duì)近年來(lái)不同培養(yǎng)條件對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的影響以及視網(wǎng)膜前體細(xì)胞眼內(nèi)移植的進(jìn)展綜述如下。

1 BMSCs體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)

BMSCs向某一特定細(xì)胞的分化，必須依靠相應(yīng)微環(huán)境所提供的各種營(yíng)養(yǎng)因子來(lái)完成。原始視網(wǎng)膜發(fā)育的微環(huán)境是最適宜的微環(huán)境，這種微環(huán)境提供了BMSCs定向誘導(dǎo)分化所具備的各種生長(zhǎng)因子以及營(yíng)養(yǎng)成分。人工誘導(dǎo)分化干細(xì)胞的方法，就是對(duì)這種微環(huán)境的模擬。模擬的準(zhǔn)確性越高，分化效率也就越高。

1.1 單用誘導(dǎo)介質(zhì)

1.1.1堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)：堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)誘導(dǎo)方法是誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)元方向分化的經(jīng)典方法，其優(yōu)點(diǎn)是可以獲得較多的神經(jīng)元樣細(xì)胞，分化的陽(yáng)性率為78%。劉東寧等[1]用bFGF誘導(dǎo)后結(jié)果與Woodbury一致。用bFGF誘導(dǎo)后細(xì)胞GFAP表達(dá)陰性，認(rèn)為主要是向成熟神經(jīng)元方向分化，而不是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。誘導(dǎo)后從形態(tài)學(xué)上在細(xì)胞間建立了突觸聯(lián)系，但誘導(dǎo)后細(xì)胞難以長(zhǎng)期存活，需聯(lián)合其他神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子進(jìn)行維持培養(yǎng)，才利于長(zhǎng)期存活。在培養(yǎng)中，劉東寧等用含10 ng/mL bFGF進(jìn)行接觸性的誘導(dǎo)，有報(bào)道是用20 ng/mL bFGF進(jìn)行接觸性的誘導(dǎo)。

1.1.2乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞：采用新出生1~3天的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑。有學(xué)者把將視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)換液的上清液收集于干凈玻璃瓶中，真空抽濾后按2∶3比例與DMEM培養(yǎng)液混合后備用。用上述混合液進(jìn)行BMSC細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)及分化情況。徐春玲等[2]是將新出生1~3天的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞置于Transwell雙層培養(yǎng)板的上層，這些尚未成熟的視網(wǎng)膜組織內(nèi)尚存在一些促進(jìn)原始視網(wǎng)膜干細(xì)胞分化和發(fā)育的細(xì)胞因子及細(xì)胞外基質(zhì)成分，可通過(guò)上層的濾膜孔擴(kuò)散至下層的BMSCs周圍，而上層的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞卻無(wú)法濾過(guò)到BMSCs周圍，從而模擬了原始視網(wǎng)膜發(fā)育的微環(huán)境。BMSCs在此微環(huán)境中，分化為具有神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)特征的神經(jīng)樣細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)3d后，檢測(cè)到RGCs標(biāo)志物Nestin陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，比率為30.9%±7.7%，但7d后表達(dá)減弱(23%±4%)。

1.1.3 activin A、牛磺酸和表皮生長(zhǎng)因子（EGF）：Anthony等[3]應(yīng)用activin A、?；撬岷虴GF體外誘導(dǎo)分化后，發(fā)現(xiàn)有20%～32%的細(xì)胞在體外可表達(dá)感光細(xì)胞特異標(biāo)志——視紫紅質(zhì)、視蛋白和recoverin。將MSC植入RCS大鼠視網(wǎng)膜下腔內(nèi)，移植入視網(wǎng)膜下腔的MSC未表達(dá)細(xì)胞增殖的標(biāo)志，說(shuō)明MSC在移植入視網(wǎng)膜下腔后經(jīng)歷的是分化的過(guò)程而非增殖。這與Kicic A實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。

還有，Woodbury等利用BME、DOSO、BHA為誘導(dǎo)劑將BMSCs誘導(dǎo)成為神經(jīng)樣細(xì)胞。還有人利用中藥，如人參、丹參、當(dāng)歸、黃芪等誘導(dǎo)BMSCs為神經(jīng)樣細(xì)胞。

2 借用支架培養(yǎng)

2.1 三維支架的選擇

三維支架培養(yǎng)是組織工程中最典型的培養(yǎng)方式，使細(xì)胞間形成適宜的空間分布和細(xì)胞連接，而且為細(xì)胞提供特異性的生長(zhǎng)和分化信號(hào)，形成與體內(nèi)相似的細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境，引導(dǎo)組織形成。近年來(lái)，BMSCs的三維培養(yǎng)已用于骨、軟骨、肌腱和脂肪等組織的工程研究，其主要的支架材料為明膠海綿、水凝膠、β-磷酸三鈣及聚己內(nèi)酯等。但應(yīng)用在神經(jīng)元細(xì)胞上未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

羊膜(human amniotic membrane，HAM)基質(zhì)：王晶等[4]采用人的HAM基質(zhì)負(fù)載BMSCs定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞。在實(shí)驗(yàn)中，觀察到BMSCs接種到HAM基質(zhì)上后能很快貼附生長(zhǎng)，細(xì)胞活力好，折光性強(qiáng)，第3-10天可在HAM基質(zhì)面密集生長(zhǎng)，這與張妍等報(bào)道相同。王晶等則認(rèn)為，把HAM基質(zhì)作為細(xì)胞培養(yǎng)載體具有以下的優(yōu)點(diǎn)：HAM基質(zhì)主要成分為膠原纖維和網(wǎng)狀纖維，其三維支架結(jié)構(gòu)為神經(jīng)元樣細(xì)胞及其軸突的生長(zhǎng)提供了廣闊的空間；HAM基質(zhì)免疫原性低，具有良好的生物相容性和抗炎性；HAM基質(zhì)內(nèi)的EGF、bFGF等多種生長(zhǎng)因子為細(xì)胞的增生和分化提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，HAM內(nèi)可能產(chǎn)生的某種未知的有很強(qiáng)神經(jīng)保護(hù)作用的因子，為神經(jīng)元樣細(xì)胞及其軸突的生長(zhǎng)提供了更多的營(yíng)養(yǎng)支持。

2.2 三維支架的誘導(dǎo)劑

王晶等[4]以HAM基質(zhì)作為載體，以新出生1～3 d的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑進(jìn)行非接觸培養(yǎng)。以HAM基質(zhì)為載體，以2-巰基乙醇（DMEM/F12）接觸培養(yǎng)將其誘導(dǎo)定向分化成神經(jīng)樣細(xì)胞。關(guān)于二種實(shí)驗(yàn)方法的效果比較未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。也未見(jiàn)借用HAM基質(zhì)作為載體和單用乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑這二種誘導(dǎo)方式效果比較的相關(guān)報(bào)道。

3 BMSCs體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)

BMSCs移植入體后，如何從受體辨別供體干細(xì)胞，并觀察其在體內(nèi)的遷移變化情況，一直是讓人困擾的問(wèn)題。近年來(lái)，主要運(yùn)用的標(biāo)記物有以下幾種。

3.1 超順磁性鐵納米顆粒(SPIO)。SPIO是研究發(fā)現(xiàn)的新型磁共振陰性對(duì)比劑，可在活體標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞。Frank等研究發(fā)現(xiàn)SPIO顆粒與轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合后標(biāo)記干細(xì)胞比使用單純SPIO顆粒高100倍。陳舒澤等[5]研究發(fā)現(xiàn)，SPIO的濃度對(duì)此有至關(guān)重要的影響：濃度過(guò)低無(wú)法達(dá)到較高的標(biāo)記效率滿足MR的需要。在標(biāo)記濃度為11.2mg/L左右時(shí)，既能達(dá)到較高的標(biāo)記效率，又不影響視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的體外生長(zhǎng)增殖，但這與有些文獻(xiàn)報(bào)道不同。轉(zhuǎn)染劑結(jié)合SPIO并無(wú)短期或長(zhǎng)期毒性作用。

3.2 溴脫氧尿嘧啶(BrdU)。BrdU是胸腺嘧啶類似物，移植的細(xì)胞與含有BrdU的培養(yǎng)基一起孵育，讓它取代胸腺嘧啶而摻入處于DNA合成期細(xì)胞的DNA中作為標(biāo)記，用免疫熒光或免疫組織化學(xué)顯示移植的細(xì)胞。BrdU作為標(biāo)記應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臐舛?，采用質(zhì)量濃度為10μg/mL的BrdU標(biāo)記的了BMSCs與未做標(biāo)記的細(xì)胞生長(zhǎng)情況基本相同，在熒光顯微鏡下可見(jiàn)BrdU標(biāo)記的MSCs細(xì)胞核被染色，未做標(biāo)記的細(xì)胞不著色。

3.3 細(xì)胞熒光黃(LY)。顯微鏡下選取誘導(dǎo)后1 d形態(tài)和活性良好的細(xì)胞，將細(xì)胞爬片置于灌流槽中。電極拉制器拉制玻璃毛細(xì)管微電極，注入電極液后電阻范圍為8～12mΩ。調(diào)節(jié)微操縱器，使電極尖端接近細(xì)胞，利用特定的測(cè)試方波電脈沖形成封接，在電極尖端接觸細(xì)胞表面之前，向微電極加正壓。當(dāng)接近細(xì)胞時(shí)，給予短暫負(fù)壓吸引。當(dāng)電極尖端與細(xì)胞膜表面形成1～5 gΩ封接電阻時(shí)，用力吸破電極尖端上的膜片，LY通過(guò)記錄電極尖端擴(kuò)散入所記錄的細(xì)胞內(nèi)，5～10min后，在Leica熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并拍片。

3.4 視網(wǎng)膜電圖。視網(wǎng)膜電圖是客觀有效地反映視網(wǎng)膜功能變化的一個(gè)敏感指標(biāo)，b波反映了視網(wǎng)膜內(nèi)核層區(qū)域細(xì)胞的電活動(dòng)，是視網(wǎng)膜缺血的敏感指標(biāo)。用視網(wǎng)膜電圖、b波觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞視網(wǎng)膜下移植對(duì)大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的影響。

3.5 熒光染料。4，6-二脒222苯基吲哚(DAPI)是一種藍(lán)色熒光染料，可被不同時(shí)期的細(xì)胞攝取并與DNA結(jié)合。把(DAP I)儲(chǔ)存液(Sigma)加入第2代BMSCs培養(yǎng)液中，至終濃度為50mg/L，37℃孵育染色1 h，Hanks平衡液沖洗6遍，消化、離心收集細(xì)胞，重懸于PBS中(106個(gè)/mL)，置于冰上待用，然后采用標(biāo)記細(xì)胞直接在熒光顯微鏡下識(shí)別，陽(yáng)性率達(dá)100%。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度與內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度是檢測(cè)視網(wǎng)膜損傷修復(fù)程度的常用指標(biāo)。用蘇木精-伊紅染色研究?jī)?nèi)核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)和排列情況，用尼氏染色是對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行定量研究。還有用綠色熒光染料(PKH-67)標(biāo)記了BMSCs進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

4 動(dòng)物模型與結(jié)果

4.1 正常模型

張枝橋等[6]把MSCs移植到同種異體成年大鼠視網(wǎng)膜下腔后14 d，主要分布于RPE層和視錐、視桿細(xì)胞層，證明MSCs能夠在視網(wǎng)膜下腔存活并能與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合；免疫熒光結(jié)果顯示，移植后的MSCs細(xì)胞并未表達(dá)光感受器細(xì)胞的特異性抗原Rhodopsin。對(duì)于這一陰性結(jié)果，認(rèn)為原因可能有以下兩點(diǎn)：一是由于實(shí)驗(yàn)條件所限，觀察時(shí)間太短，移植后的BMSCs可能還來(lái)不及發(fā)生分化，這一點(diǎn)可在下一步的實(shí)驗(yàn)中通過(guò)延長(zhǎng)觀察時(shí)間來(lái)證實(shí)。二是本實(shí)驗(yàn)選用的受體為正常的成年大鼠，正常成年大鼠的視網(wǎng)膜與新生大鼠視網(wǎng)膜及非健康的大鼠視網(wǎng)膜相比，后者的微環(huán)境更有利于移植細(xì)胞的遷移、整合、分化，在這一微環(huán)境中起主要作用的可能是一些生長(zhǎng)因子，如bFGF、NGF、GDNF、BDNF和CNTF等。而在正常成年大鼠的視網(wǎng)膜中，這些生長(zhǎng)因子的水平相對(duì)較低，對(duì)移植細(xì)胞產(chǎn)生的趨化作用較弱，不利于移植細(xì)胞的整合、分化。大鼠MSCs移植于正常和Nd:YAG激光損傷后的大鼠視網(wǎng)膜下5周，MSCs可與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合分布于RPE層、視細(xì)胞層、雙極細(xì)胞層及節(jié)細(xì)胞層，ERG檢測(cè)表明損傷移植組的b波水平高于對(duì)照組。

4.2 損傷模型

光損傷模型：張鈺等[7]光損傷模型的制作：除N組外的SD大鼠經(jīng)過(guò)24 h暗適應(yīng)，被放入光損傷儀中(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部?jī)x器廠制作)光照24 h，光照強(qiáng)度為(950±50)lx，波長(zhǎng)為480～520 nm，光照后置于黑暗中3 d，此后恢復(fù)到正常光環(huán)境，并在視網(wǎng)膜下移植BMSCs，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BMSCs可能是通過(guò)其分泌的細(xì)胞因子bFGF發(fā)揮其營(yíng)養(yǎng)支持作用，從而對(duì)光感受器細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用，抑制了光損傷大鼠光感受器細(xì)胞的凋亡，但BMSC并沒(méi)有整合到大鼠視網(wǎng)膜組織中起替代作用。

注射3%NaIO3損傷RPE模型：在Lewis大鼠腹腔注射3%NaIO3(100mg/kg)建立大鼠RP模型，將體外培養(yǎng)的BMSCs植入視網(wǎng)膜下腔，術(shù)后第1周即可見(jiàn)BMSCs主要分布于RPE層和視錐、視桿細(xì)胞層，并從第3周開(kāi)始表達(dá)RPE細(xì)胞及光感受器細(xì)胞的表面標(biāo)志，但尚未需從功能上進(jìn)行驗(yàn)證。龔莉華等[8]用同一方法研究發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)RPE細(xì)胞、光感受器細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志，但沒(méi)有整合入神經(jīng)視網(wǎng)膜層，也沒(méi)有證據(jù)支持其分化為光感受器細(xì)胞。

視網(wǎng)膜缺血再灌注動(dòng)物模型：用血管結(jié)扎法建立視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型。即是分離、暴露視神經(jīng)，在其根部用3/0滌綸線打活結(jié)，60 min后拆除結(jié)扎線，恢復(fù)血流。缺血再灌注損傷后28 d后視網(wǎng)膜下移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組與非移植組相比，移植組視網(wǎng)膜電圖b波增高，組織結(jié)構(gòu)破壞不顯著，內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度顯著增厚，研究認(rèn)為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷有神經(jīng)保護(hù)作用，且該作用與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植有關(guān)，而與磷酸鹽緩沖液無(wú)關(guān)。王陸飛等[9]眼缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪窃谟已劢庆柲ぞ壌┐?，注入BSS平衡鹽溶液，用間接檢眼鏡觀察，當(dāng)眼內(nèi)壓上升到80 mmHg維持約60 min時(shí)，間接檢眼鏡下可見(jiàn)視網(wǎng)膜血管阻塞，視網(wǎng)膜變白，也可發(fā)現(xiàn)虹膜變白，此時(shí)終止眼內(nèi)灌注。以間接檢眼鏡確定血管再充盈后，用Br2dU標(biāo)記的BMSCs進(jìn)行視網(wǎng)膜下移植。然后做了BrdU陽(yáng)性細(xì)胞連續(xù)切片的免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)BMSCs在視網(wǎng)膜下移植后有一部分參與了視網(wǎng)膜的重建，一部分參與了損傷的增生，還有一部分形成了新的節(jié)細(xì)胞層增生。BMSCs的參與可以緩解缺血對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷，具有向損傷部位遷移的能力。證明了BMSCs能夠在視網(wǎng)膜下存活并能與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合，初步判斷形成的視網(wǎng)膜樣結(jié)構(gòu)具有神經(jīng)細(xì)胞特性，但尚不能確定這種新形成結(jié)構(gòu)是否能夠建立一定的神經(jīng)傳導(dǎo)。

5 鑒定

鑒定指標(biāo)有以下幾種：(1)Nestin：為神經(jīng)巢蛋白，是神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白，屬于中間絲蛋白，只在多潛能的神經(jīng)外胚層細(xì)胞中表達(dá)，是神經(jīng)干細(xì)胞特有的生物學(xué)標(biāo)記。(2)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP-43)：是一種細(xì)胞骨架蛋白，特異性地分布于神經(jīng)元胞體及突起中，是軸突成熟的標(biāo)志之一，國(guó)際上將GAP-43列為研究神經(jīng)生長(zhǎng)發(fā)育和損傷修復(fù)等神經(jīng)可塑性的首選分子標(biāo)志物。(3)神經(jīng)絲(Neurofilament，NF)：屬于中間絲家族的第Ⅳ型，廣泛分布于成熟神經(jīng)元中。(4)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物Thy111檢測(cè)。但大部分的學(xué)者只用其中一種或幾種：王晶等[4]用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定分化所得細(xì)胞的Nestin、NF表達(dá)；或應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白Nestin、神經(jīng)元特異性標(biāo)記物GAP-43的表達(dá)；劉東寧等[1]則檢測(cè)Thy111表達(dá)。

6 討論

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化出視網(wǎng)膜神經(jīng)樣細(xì)胞為視神經(jīng)損傷等疾病的治療提供了新的方法。然而，由于對(duì)MSC來(lái)源的分化研究尚處于初級(jí)階段。盡管近年來(lái)對(duì)MSC的研究取得了很大進(jìn)展，但仍然存在以下問(wèn)題尚待解決：

（1）不同條件誘導(dǎo)骨骼間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化成視網(wǎng)膜細(xì)胞所需微環(huán)境的是否存在蛋白差異，未被證實(shí)。

（2）還未形成相對(duì)有統(tǒng)一的、高效的誘導(dǎo)劑與誘導(dǎo)方法，未形成相對(duì)統(tǒng)一條件培養(yǎng)劑。

（3）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中損傷模型的仿真程度還未經(jīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)證實(shí)。正常視網(wǎng)膜與病變視網(wǎng)膜以及不同病變視網(wǎng)膜間的微環(huán)境對(duì)移植細(xì)胞的影響有何不同?

（4）雖然檢測(cè)到了RGCs標(biāo)志物的表達(dá)，但未能在功能學(xué)以及電生理學(xué)等方面上證實(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞的功能。所以，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞其分化成的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞是否具有特定的功能，移植后與宿主神經(jīng)細(xì)胞整合發(fā)揮修復(fù)作用等尚有待進(jìn)一步研究。

（5）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)光感受器細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用機(jī)制未明了。是通過(guò)其分泌的細(xì)胞因子發(fā)揮其營(yíng)養(yǎng)支持作用，還是整合到大鼠視網(wǎng)膜組織中起替代作用，還在探討中。

雖然MSCs移植目前尚不能應(yīng)用于眼科臨床，但是已經(jīng)取得的研究成果表明MSCs移植有可能成為治療視網(wǎng)膜變性疾病的新的有效途徑。

[1] 劉東寧，陰正勤，吳楠，等.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J].眼科研究,2007,25(12):901.

[2] 徐春玲,蘇冠方,牟大鵬. 視網(wǎng)膜細(xì)胞誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2007, 11(1):1975.

[3] Anthony K,Shen W Y,Wilson AS,et al.D ifferentiation of marrow strom cells into photorecep tors in the rat eye[J].J Neurosci,2003,23(21)7742-7749.

[4] 王晶,蘇冠方,李海波,等.人羊膜載體培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的研究[J].眼科新進(jìn)展,2009,29(5):325-329.

[5] 陳舒懌,古宏晨,吳強(qiáng),等.超順磁性鐵納米顆粒標(biāo)記對(duì)視網(wǎng)膜前體細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響[J].國(guó)際眼科雜志2008;8(5):913-915.

[6] 張枝橋,于偉泓,董方田，等.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞視網(wǎng)膜下移植的短期觀察[J].眼科研究，2007, 25(9): 863.

[7] 張鈺,張弛,王薇等,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞視網(wǎng)膜下移植對(duì)光損傷SD大鼠光感受器細(xì)胞凋亡的影響[J].眼外傷職業(yè)眼病雜志,2007,29(10):741.

[8] 龔莉華,周佳,吳強(qiáng),等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在碘酸鈉注射大鼠視網(wǎng)膜下[J].眼科研究,2008,26(3):187.

[9] 王陸飛,石艷,蘇冠方,等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠缺血再灌注損傷眼的視網(wǎng)膜下移植[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2008,12(7):826.

福建省重點(diǎn)科研課題（基金編號(hào)：2008Y0040）。

徐國(guó)興，zjfmuxgx@pub5.fz.fj.cn。