王崇丹 扈清云 姜云生 興桂華 王曉帆

子宮內膜癌是婦科常見的惡性腫瘤，近年來發(fā)病有逐漸增加趨勢，但其發(fā)病機制尚不明確。目前認為腫瘤的發(fā)生可能是染色體的特定區(qū)域缺失、癌基因的激活和抑癌基因的失活，以及細胞增殖與凋亡的平衡失調所致。p15基因是已被公認的腫瘤抑制基因[1]，nm23基因是近年來發(fā)現的重要轉移抑制基因[2]，有關兩者與子宮內膜癌關系的研究較少。本研究旨在探討p15基因和nm23基因在子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其相互關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集齊齊哈爾醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院病理科2005年10月—2008年10月存檔石蠟包埋子宮內膜癌組織標本60例 ?；颊吣挲g38～72歲，平均（52.03±5.41）歲。子宮內膜癌采用1988年FIGO分期標準：I期40例，II期10例，III期7例，IV期3例；腫瘤浸潤肌層深度<1/2者35例，≥1/2者25例；有淋巴結轉移7例，無淋巴結轉移53例；組織學分級高分化36例，中分化18例，低分化6例；組織類型腺癌53例，腺鱗癌5例，透明細胞癌1例，漿液性乳頭狀腺癌1例。另選正常增生期子宮內膜組織標本10例作為對照組，患者年齡40～52歲，平均（49.70±3.02）歲。2組年齡差別無統(tǒng)計學意義（t=1．326，P＝0．189）。

1.2 染色方法 主要試劑有p15鼠抗人單克隆抗體、nm23兔抗人多克隆抗體和即用型免疫組織化學超敏SP試劑盒（廣譜），均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。所有標本均經10%福爾馬林溶液固定、石蠟包埋。使用HE染色初步觀察正常子宮內膜組織和子宮內膜癌組織的病變特點，確定組織類型和病理分級，篩選入組。SP免疫組織化學染色按照試劑盒說明書操作，用已知陽性切片做陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照，均用微波抗原修復。

1.3 結果判定 以細胞膜、細胞漿或細胞核出現清晰的黃色或棕褐色顆粒判定為陽性。每例先在100倍鏡下選取陽性細胞多且分布均勻的區(qū)域，然后隨機計數10個不重復、不重疊的400倍視野，每個視野計數100個細胞中的陽性細胞數，取平均值作為結果。根據陽性細胞所占百分比進行評分，0分為陽性細胞<5%;1分為陽性細胞5%～50%;2分為陽性細胞>50%，將≥1分判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件，組間比較應用t或χ2檢驗，影響因素分析用Logistic回歸分析，相關性分析用Spearman秩相關檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 p15 表達情況p15表達定位于細胞核和細胞漿，細胞核著色深，見圖1。p15在正常子宮內膜組織中均陽性表達，1分2例、2分8例；在子宮內膜癌組織中40例（66.7%）陽性表達，1分為18例，2分22例，2組比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=9.618，P<0.01）。不同組織學分級子宮內膜癌組織中p15的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其余分組間p15的陽性表達率差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。組織學分級是p15表達的影響因素，見表2。

2.2 nm23表達情況nm23表達主要彌漫性分布在細胞漿內，見圖2。nm23在正常子宮內膜組織中有7例（70%）陽性表達，1分和2分分別為3例和4例，在子宮內膜癌組織中36例（60．0%）陽性表達，1分和2分分別為29例和7例，2組比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2=4.246，P=0.120）。不同臨床分期及有無淋巴結轉移子宮內膜癌組織中nm23的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其余分組間nm23的陽性表達率差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。Logistic回歸分析未見影響nm23表達的因素入選，見表3。

表1 p15和nm23表達與臨床病理學參數的關系 例（%）

表2 p15表達影響因素Logistic回歸分析結果

表3 nm23表達影響因素logistic回歸分析結果

2.3 p15與nm23表達的相關性p15和nm23在子宮內膜癌中的表達呈正相關（rs＝0．754，P＜0．01），見表4。

表4 p15與nm23在子宮內膜癌中表達的相關性

3 討論

p15是迄今發(fā)現的最直接抑制細胞周期的多腫瘤抑癌基因之一，其通過作用于細胞周期蛋白依賴激酶（CDK）與細胞周期蛋白D（cyclinD）復合物，特異性抑制CDK4、CDK6激酶活性，阻止Rb蛋白磷酸化，限制細胞從G1期進入S期，從而抑制細胞增殖[3]。本研究結果顯示p15在正常子宮內膜組織中陽性表達率高于在子宮內膜癌中的陽性表達率，而且內膜癌分化程度越低，p15陽性表達率越低，提示低組織學分級是p15表達的影響因素,與夏瑾瑜等[4]研究結果相似，與張麗志等[3]研究結果不一致，考慮可能與判定方法不同有關，推斷p15低表達可能不僅參與子宮內膜癌的發(fā)生，而且可能導致細胞無限制由G1期進入S期，并可以在細胞未成熟時即開始分裂，惡性度增高，并使惡性細胞不斷增殖，最終導致細胞永生化。因此，p15的表達在子宮內膜癌的發(fā)生發(fā)展進程中發(fā)揮著重要作用。

nm23基因為一重要的轉移抑制基因，位于人17號染色體的著絲點附近，其蛋白產物為二磷酸核苷激酶(NDPK)，此酶通過調節(jié)G蛋白介導的細胞信號傳遞反應，影響微絲、微管細胞骨架蛋白的生物活性，改變細胞的黏著力和遷移力，抑制腫瘤轉移[2]。nm23等位基因的突變、缺失、低表達與多種惡性腫瘤發(fā)生轉移的潛能密切相關[5]。本研究中nm23的陽性表達率隨內膜癌臨床分期增高及淋巴結轉移而降低，提示nm23低表達可能會促進子宮內膜癌的進程。但臨床分期較高的患者可能就是淋巴結轉移的患者，兩者之間可能有相互影響，故多因素分析結果顯示未見影響nm23的表達因素入選，提示腫瘤的發(fā)展可能還有本研究未列入的其他影響因素作用的結果。另外，本研究Ⅲ～Ⅳ期患者、淋巴結轉移患者、低分化患者和其他組織類型患者蠟塊較少，也可能影響研究結論，有待增加樣本量以進一步研究。

本研究還表明p15與nm23在子宮內膜癌中的表達呈正相關，推測可能是由于子宮內膜癌細胞中p15表達缺失使其抑制細胞增殖的作用減弱，導致細胞增殖異?；钴S，分化程度減低，繼而nm23表達亦減低，導致腫瘤轉移抑制功能缺失，從而加速了腫瘤轉移。p15和nm23在子宮內膜癌中的協同作用有待雙染等方法進一步證實。

[1]劉冬滿，張志勇，鄭寰宇，等.老年原發(fā)性卵巢癌p16和p15蛋白的表達及其臨床意義[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2008，28(12):2347-2348.

[2]王從玉，鄧躍華，劉弋，等.nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大腸癌中的表達及意義[J].中國腫瘤臨床，2008，35(19):1117-1120.

[3]張麗志，崔滿華，白鳳玲.p16和p15基因在子宮內膜癌中的表達[J].吉林大學學報(醫(yī)學版)，2005，31（1）：118-120.

[4]夏瑾瑜，戴淑真，羅兵.原發(fā)性子宮內膜癌組織p15基因及其蛋白的表達[J].齊魯醫(yī)學雜志,2002,17(4):283-285.

[5]Wang LB,Jiang ZN,Fan MY,et al.Changes of histology and expression of MMP-2 and nm23-H1in primary and metastatic gastric cancer[J].World J Gastroenterol,2008,14(10):1612-1616.