張 琦,凌 偉,李 鑫,盧聯(lián)合,陳志海,李興旺

2009年3月墨西哥暴發(fā)甲型 H1N1流感疫情,隨后,全球多個國家出現(xiàn)疫情,2009-06-11世界衛(wèi)生組織 (WHO)將流感大流行警告級別提高至 6級。我國衛(wèi)生部也將其納入《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病,依照甲類傳染病采取預防、控制措施。自 2009-05-15起,北京地壇醫(yī)院開始收治甲型 H1N1流感患者,本研究通過檢測部分確診患者發(fā)病期和恢復期 T細胞亞群,并與健康對照者進行比較,初步探討甲型 H1N1流感患者細胞免疫功能變化特點及其臨床指導意見。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2009-05-15—2009-07-15于北京地壇醫(yī)院確診的甲型 H1N1流感患者 67例 (研究組),其中男38例,女 29例;年齡 4～60歲,平均 (20±14)歲。診斷標準及治愈標準參照衛(wèi)生部頒發(fā)的 《甲型 H1N1流感診斷治療方案 2009試行版第一版》[1]及衛(wèi)生部制定的 《甲型 H1N1流感出院標準》[2]。排除存在血液病史、免疫系統(tǒng)病史及其他影響血液細胞改變疾病者。同時選擇健康體檢者 40例作為對照組,其中男 23例,女 17例,年齡 23～36歲,平均 (30±4)歲。

1.2 標本采集及病原學檢測 采集患者咽拭子標本,送北京市疾病預防控制中心 (CDC)進行病毒核酸檢測,甲型 H1N1實驗室診斷標準:甲型流感病毒通用 (M基因)陽性,豬H1N1流感病毒通用 (NP基因)陽性,甲型 H1N1流感病毒特異 (HA基因)陽性的標本。

1.3 方法 患者均于發(fā)病期和恢復期采血,采用流式細胞儀檢測外周血 CD4+、CD8+T淋巴細胞。除外合并其他感染性疾病。治療上單獨應用奧司他韋者 19例,應用奧司他韋加中草藥者 11例,單獨應用中草藥者 10例,未應用奧司他韋或中草藥僅對癥治療者 27例。同時檢測對照組的外周血 CD4+、CD8+T淋巴細胞,與研究組進行比較。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用 SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,計量資料以 (x±s)表示,兩樣本資料的比較采用 t檢驗;多個樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析,各組間分析用 LSD-t檢驗。以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

67例患者均恢復良好。

2.1 甲型 H1N1流感患者發(fā)病期、恢復期及對照組 T細胞亞群比較 研究組發(fā)病期、恢復期和對照組 CD4+T、CD8+T淋巴細胞絕對數(shù)比較,差異均有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。其中研究組發(fā)病期 CD4+T、CD8+T淋巴細胞絕對數(shù)明顯低于恢復期和對照組,差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05);恢復期與對照組CD4+T淋巴細胞絕對數(shù)間差異無統(tǒng)計學意義 (P＞0.05),恢復期 CD8+T淋巴細胞絕對數(shù)多于對照組,差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05,見表 1)。

2.2 不同治療方法對甲型 H1N1流感患者 CD4+、CD8

+T淋巴細胞的影響 不同治療方法的患者治療前后 CD4+、CD8

+T淋巴細胞絕對數(shù)的差值間差異無統(tǒng)計學意義 (P＞0.05,見表2)。

3 討論

根據(jù)目前所掌握的資料,近期發(fā)生的甲型 H1N1流感是由變異后的新型甲型 H1N1流感病毒所引起的急性呼吸道傳染病。甲型 H1N1流感病毒屬于正粘病毒科,甲型流感病毒屬,為單股負鏈 RNA病毒,基因組約為 13.6 kb,由大小不等的 8個獨立片段組成[1]。該病毒傳染性較強,人群普遍易感。通過飛沫、氣溶膠、直接接觸或間接接觸傳播,臨床主要表現(xiàn)為流感樣癥狀,少數(shù)病例病情重,病情進展迅速,可出現(xiàn)病毒性肺炎,合并呼吸衰竭、多臟器功能損傷,嚴重者可以導致死亡。由于這種甲型 H1N1流感是一種新發(fā)疾病,其特點仍待進一步觀察總結。

根據(jù)人外周血T淋巴細胞表面分子受體的表達不同,主要分為三大亞群:CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴細胞。CD4+T淋巴細胞主要為輔助性 T細胞 (Th),能促進 B細胞、細胞毒性 T淋巴細胞 (Tc)和其他免疫細胞的增殖及分化,調節(jié)體液免疫和細胞免疫;而 CD8+T淋巴細胞主要由細胞毒性 T淋巴細胞組成,是抗病毒感染的主要效應細胞。有資料顯示,在抗流感病毒感染的過程中,CD4+T和CD8+T淋巴細胞發(fā)揮著重要作用[3-4]。正常情況下,CD4+T和CD8+T淋巴細胞相互作用,保持平衡,維護機體正常的免疫應答。感染甲型 H1N1流感病毒后,由于 CD4+T淋巴細胞和 CD8+T淋巴細胞參與清除病毒的過程,因此在發(fā)病期 T細胞亞群數(shù)目發(fā)生變化。

表 1 甲型 H1N1流感患者發(fā)病期、恢復期與正常對照者 T細胞亞群比較(x ±s)Table 1 T lymphocyte subsets comparison among the H1N1 influenza patients in eruption,recovery stages and the healthy controls respectively

表 2 不同治療方法對CD 4+、CD 8+T淋巴細胞的影響Table 2 Effects of various medical treatments on CD4+、CD8+T lymphocyte

本研究表明甲型 H1N1流感患者在發(fā)病期 CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞絕對數(shù)均較對照組明顯下降,這提示CD+T、CD+T淋巴細胞參與了病毒清除的過程。另外 CD+484

T淋巴細胞可通過分泌 TFN-γ等細胞因子促進 Tc前體細胞分化成Tc[5],CD4+T淋巴細胞的減少使這一作用減弱。而患者在恢復期血 CD4+T和CD8+T淋巴細胞絕對數(shù)明顯多于發(fā)病期,其中 CD4+T淋巴細胞與對照組比較無明顯差異,CD8+T淋巴細胞較對照組有所增多,這表明甲型 H1N1流感病毒所致的免疫抑制是一個可逆過程,但 CD8+T淋巴細胞較對照組有所增多的臨床意義尚不明確。Powell等[4]的研究結果提示,在抗流感病毒感染的免疫過程中,CD4+T淋巴細胞數(shù)量達峰后,CD8+T淋巴細胞數(shù)量仍持續(xù)增多,并且在數(shù)量降低方面比CD4+T淋巴細胞要慢?？赡苡捎?CD4+T和CD8+T淋巴細胞為了執(zhí)行不同的功能而被不同的機制所調節(jié)有關。

治療方面,本組 67例患者分別行單獨應用奧司他韋、奧司他韋加中草藥、僅應用中草藥及僅對癥治療 (未應用奧司他韋或中草藥),各治療組在 CD4+T、CD8+T淋巴細胞變化方面無明顯差異,表明4種治療方法對 T細胞亞群的影響沒有差異。

67例患者均恢復良好,未出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥。但有資料表明,幼兒、孕婦和伴有免疫缺陷或某些嚴重疾病的患者有病情危重的傾向[6]。本研究顯示,在發(fā)病期,患者機體免疫力下降,因此在臨床工作中,對于某些特殊人群,應及時應用抗病毒藥物,適當選用抗生素預防感染,也可以考慮免疫調節(jié)劑的使用,以改善預后。

本研究由于病例有限,尚需更大樣本的臨床研究來進一步加以證實。

1 衛(wèi)生部.甲型 H1N1流感診療方案 (2009年試行版第一版)[EB/OL].http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohyzs/s3585/200905/40478.htm.

2 衛(wèi)生部 .甲型 H 1N1流感確診病例出院標準 [EB/OL].http://www.gov.cn/gzdt/2009-05/15/content_1315931.htm.

3 Brown DM,Román E,Swain SL.CD4T cell responses to influenza infection.Seminars in immunology[J].Semin Immunol,2004,16(3):171-177.

4 Powell TJ,Brown DM,Hollenbaugh JA,et al.CD8+T cells responding to influenza infection reach and persist at higher numbers than CD4+T cells independently of precursor frequency[J].Clinical Immunology,2004,113(1):89-100.

5 金伯泉.細胞和分子免疫學 [M].北京:科學出版社,2001.

6 Novel swine-origin influenza A(H1N1)virus investigation team.Emergence of a novel swine-origin influenza A(H 1N1)virus in humans[J].The New England Journal of Medicine,2009,360:2605-2615.