王 新,許秋實,李 壯,王 博,周 昱

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院腫瘤科,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學2007級普外專業(yè)研究生,黑龍江 佳木斯 154007)

環(huán)氧化酶(cyclooxy genase,COX)是前列腺素(prostaglandinum,PG)[1]生物合成過程中的一個關(guān)鍵酶,廣泛存在于核膜和微粒體膜上,在生理條件下不表達或低表達,而在病理狀態(tài)下呈高表達,經(jīng)研究表明 COX-2及其催化產(chǎn)物參與多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。為探討 COX-2 bFGF與乳腺癌的關(guān)系及臨床意義,我們采用免疫組化染檢測 COX-2、bFGF在乳腺癌組織中的表達情況,并對其表達與臨床病理各因素之間的關(guān)系進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選材2004— 03～ 2005— 03在佳木斯大學附屬第一醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的原發(fā)性乳腺癌組織石蠟包埋標本38例。病人均系女性 ,年齡29～ 70歲 ,平均53歲 ,術(shù)前未經(jīng)抗腫瘤治療。另在乳腺組織良性病變中取材20例正常乳腺組織作對照。并根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC)和美國腫瘤聯(lián)合會(AJCC)聯(lián)合制定的 TNM分期法[2]分為 I期 10例,Ⅱ 期19例,Ⅲ期9例 ,其中有淋巴轉(zhuǎn)移者 20例;另按乳腺癌 SBR癌組織 (細胞 )學分類標準[3],分為 I級 12例 ,Ⅱ 級 14例,Ⅲ 級12例。

1.2 實驗方法及結(jié)果判定

1.2.1 COX-2組

①SP法免疫組織化學染色[4]：1)首先脫蠟和水化;2)PBS沖洗15min;3)滴加在 3%的過氧化氫;4)PBS沖洗15min;5)抗原修復;6)沖洗15min;7)滴入山羊血清封閉液;8)滴加Ⅰ 抗 (鼠抗人環(huán)氧化物酶 -2單克隆抗體 );9)沖洗15min;10)滴加羊抗小鼠 IgG二抗;11)再次沖洗 15min;12)DAB顯色 10min;13)PBS沖洗10min;14)蘇木精復染2min;15)進行后期制作。

②結(jié)果判定標準：選用 Fromowitz分級法[5](A)根據(jù)染色深度不同計分,不著色為0分;淡黃色 1分;棕黃色2分;棕褐色或強烈著色者記為 3分。(B)陽性細胞數(shù)量計分：低于5%為0分,6%～ 25%為 1分,26%～ 50%為2分,51%～ 75%為3分,大于75%為4分。(C)最后將染色強度記分與陽性細胞數(shù)量百分比記分相加之和再分為4級：強陽性(+++)6～ 7分 ,中等陽性 (++ )4～ 5分 ,弱陽性 (+ )2～ 3分 ,陰性 (-)0～ 1分。

1.2.2 bFGF組

①實驗方法：SP法免疫組織化學染色,方法同 COX組;使用 A10782R兔抗人 bFGF多克隆抗體一抗代替鼠抗人COX-2單克隆抗體;羊抗兔 IgG二抗代替羊抗小鼠 IgG二抗。②結(jié)果判定標準：方法同 COX組。

1.3 統(tǒng)計學處理

使用 SPSS11.5軟件統(tǒng)計實驗結(jié)果。對 COX-2、bFGF、VEGF表達與臨床病理因素關(guān)系的數(shù)據(jù)處理及 COX-2與bFGF表達關(guān)系的數(shù)據(jù)處理采用卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 COX-2和 bFGF在乳腺癌中的表達及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

分析對 COX-2、bFGF的表達情況及其與乳腺癌臨床病理特征之間的相互關(guān)系 ,結(jié)果表明：COX-2、bFGF、的表達與腫瘤體積、臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況關(guān)系較為密切,而與腫瘤的發(fā)病年齡無明顯相關(guān)性(見表1)。

表1 COX-2和 bFGF在乳腺癌中的表達及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2 乳腺惡性腫瘤中 COX-2陽性表達與 bFGF陽表達之間的關(guān)系

通過對 COX-2和 bFGF免疫組化驗查的數(shù)據(jù)進行分析,結(jié)果表明：二者在乳腺組織惡性腫瘤中的的表達呈高度的一致性即在 COX-2高陽性表達率組,bFGF因子的陽性表達率也相對較高(詳見表2)。

表2 乳腺癌中 COX-2的表達與 bFGF表達間的關(guān)系

3 討論

乳腺癌在婦女群體中的發(fā)病率中僅次于子宮癌,已成為現(xiàn)代社會女性健康的第二大殺手,是女性最常見的惡性腫瘤之一,嚴重影響婦女身心健康。每年全世界約50萬婦女死于乳腺癌 ,其中僅在我國死亡人數(shù)就超過 5萬[6]。并且隨著人們生活水平的日益提高,月經(jīng)初潮的提前、生育、哺乳的減少,近年乳腺癌發(fā)病率逐年增長,這一趨勢引起了人們越來越多的重視。近年來臨床病理學研究表明：早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療,是治愈乳腺癌的關(guān)鍵手段。目前,COX-2、bFGF的表達與乳腺癌間關(guān)系研究尚少,其具體機制亦不完全清楚。因此,在本實驗的目的即研究 COX-2、bFGF在乳腺癌中的表達和臨床病理意義。在試驗過程中使用 S-P免疫細胞方法檢測了38例乳腺癌組織和20例乳腺正常組織中 COX-2、bFGF的表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn) COX-2、bFGF與乳腺癌患者的腫瘤直徑、臨床分期、組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。綜合分析 COX-2和 bFGF在乳腺癌中的表達情況對乳腺癌的研究具有重要的意義,通過抑制 COX-2和 bFGF的高表達來抑制乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、增殖、轉(zhuǎn)移可能會成為一項有效的乳腺癌輔助治療措施。

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