王 欣,唐 旭,王 新

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科,黑龍江 佳木斯 154003)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率逐年上升,據(jù)2010年 1月《中國乳腺疾病調(diào)查報告》,報告顯示：我國城市地區(qū)乳腺癌的死亡率增長了38.91%,乳腺癌已成為對婦女健康威脅最大的疾病,發(fā)病率位居大城市女性腫瘤的第一位,積極采取有效措施以控制其發(fā)生發(fā)展應(yīng)是當(dāng)務(wù)之急。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是多基因參與,經(jīng)過多步驟、多階段的復(fù)雜生物學(xué)過程[1],因此研究乳腺癌相關(guān)的特異性標(biāo)志物和治療靶點(diǎn),對于了解乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過用免疫組化 SP法檢測乳腺癌組織中 OPN、CD44V6的表達(dá)情況。探討兩者在乳腺癌中的發(fā)生、發(fā)展中的作用及相互關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤外科2009-03～2010-01行手術(shù)治療的乳腺癌患者64例,均為女性。根據(jù)2002年 AJCC制定的 TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：I期 18例,Ⅱ 期 21例,Ⅲ～ IV期 25例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 24例。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療、生物治療及內(nèi)分泌治療。

1.2 主要試劑

即用型鼠抗人 OPN單克隆抗體、即用型鼠抗人CD44V6單克隆抗體均購自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 乳腺癌標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林液固定,常規(guī)石蠟包埋。4 μm厚連續(xù)切片,供常規(guī) HE染色和免疫組化染色。參照檢測試劑盒說明書進(jìn)行。每批染色均用已知乳腺癌陽性片做陽性對照,并用 PBS取代一抗做陰性對照。

1.3.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞染成棕色至棕黃色者為陽性,OPN陽性著色定位于胞質(zhì)或胞膜,CD44v6陽性著色主要定位于胞膜。取表達(dá)最強(qiáng)的部分,按著色程度分為：基本未著色,染色與背景相似者為0分;著色淺,略高于背景者為1分;中度著色,明顯高于背景者為 2分;強(qiáng)染,著色深棕色者為 3分。陽性細(xì)胞數(shù) ＜10%為0分,10%～ 25%為 l分,26%～ 50%為 2分 ,51%～ 75%為 3分,＞ 75%為 4分。兩項(xiàng)相加后 0～ 1分為陰性(-),2～ 3分為陽性(+ ),4～ 5分為陽性(++ ),6～ 7分為陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析,陽性率之間用卡方檢驗(yàn)。以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織不同分期間 OPN和 CD44V6的表達(dá)

OPN的表達(dá)定位于胞漿,CD44V6的表達(dá)定位于胞膜和(或)胞漿。不同分期間表達(dá)結(jié)果見表1。

表1 乳腺癌組織不同分期間 OPN和 CD44V6表達(dá)的免疫組化結(jié)果

2.2 乳腺癌組織中 OPN和 CD44V6的表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系結(jié)果

見表2。

表2 OPN和 CD44V6在乳腺癌組織中的表達(dá)與腋窩琳巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.3 OPN和 CD44V6在乳腺癌中表達(dá)的關(guān)系

OPN表達(dá)陽性的38例乳腺癌組織中 ,CD44V6表達(dá)陽性32例;OPN表達(dá)陰性的28例乳腺癌組織中,CD44V6表達(dá)陽性6例。結(jié)果顯示在乳腺癌組織中 OPN、CD44V6表達(dá)之間存在顯著正相關(guān) (P＜0.05)。OPN、CD44V 6表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān) (P＜0.05)。

3 討論

關(guān)于癌細(xì)胞侵襲過程,Liotta等通過生化研究和超微結(jié)構(gòu)觀察 ,提出腫瘤侵襲的三步假說[2]。第一步 ,腫瘤與基底膜發(fā)生黏附?；啄な瞧毡榇嬖谟谏掀は?、內(nèi)皮下、和間皮下等的一種連續(xù)的細(xì)胞外基質(zhì)成分構(gòu)成的超微結(jié)構(gòu),主要含層連蛋白(LN)和 IV型膠原。第二步,局部蛋白質(zhì)水解導(dǎo)致基底膜降解、斷裂,有利于瘤細(xì)胞穿出。第三步,瘤細(xì)胞在趨化因子作用下,瘤細(xì)胞隨意運(yùn)動和定向運(yùn)動,侵犯周圍組織間隙。OPN人的骨橋蛋白 (OPN)基因位于4q13上,編碼產(chǎn)物為一種415000的酸性糖蛋白,富含精氨酸的序列能與羥磷灰石結(jié)晶結(jié)合參與骨鹽沉積。OPN蛋白中含有 RGD(Arg-Gly-Asp)基序,這一基序在不同物種的 OPN中都普遍存在。它對于 OPN的黏附起著重要作用。OPN在人許多腫瘤中過量表達(dá)[3]。目前已經(jīng)在整聯(lián)蛋白是 OPN的受體,由 α和 β兩種亞基組成 ,多種乳癌細(xì)胞株可表達(dá) α 1- α 5(β 1)和 α v(β 3)整聯(lián)蛋白。此外有報道 OPN可與 CD44相互作用,對 CD44依賴的化學(xué)趨化性敏感性增高。本實(shí)驗(yàn)研究顯示 OPN的表達(dá)與癌組織的分期以及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況有關(guān),I期乳腺癌 OPN的陽性率 (38.9%)顯著低于 II、III～ IV期乳腺癌分別為(66.7%和72.0%)(P＜0.05);腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者 OPN的陽性率(65.0%)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者 (33.3%)(P＜0.05)。從而提示 OPN的表達(dá)與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。CD44基因是編碼分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜蛋白,它定位于11號染色體短臂上,主要參與細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間特異性粘附過程。CD44基因有不含 V區(qū)外顯子的轉(zhuǎn)錄子 CD44S和含 V區(qū)外顯子的轉(zhuǎn)錄子 CD44V;后者因其 V區(qū)外顯子變異拼接方式不同而產(chǎn)生許多不同排列的CD44拼接變異體轉(zhuǎn)錄子[4]。CD44V6是最早被發(fā)現(xiàn)與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的 CD44變異體,它與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān),但有關(guān)CD44V6的表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性尚未明確[5]。而臨床病理研究表明,非轉(zhuǎn)移性乳腺癌中 CD44S呈低表達(dá),而在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中 CD44V6呈過表達(dá),認(rèn)為 CD44V6可能是乳腺癌轉(zhuǎn)移的重要因素[6]。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),OPN與 CD44V6的表達(dá)有顯著相關(guān)性,提示 CD44V 6水平升高可能上調(diào) OPN水平,OPN水平升高也可能上調(diào) CD44V 6水平,兩者可能有著互相促進(jìn)作用。與 Ito等[7]的研究結(jié)果相符合。Gao等[8]研究認(rèn)為,CD44v6的過表達(dá)是由 OPN通過與整合素結(jié)合,促進(jìn)腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。因此,通過 OPN和 CD44V6各自的作用以及相互間促進(jìn)作用,最終促使腫瘤發(fā)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

綜上所述,OPN與 CD44V 6的表達(dá)與乳腺癌的生物學(xué)行為有關(guān),兩者存在一定的協(xié)同性,有望成為預(yù)測乳腺癌侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志。

[1]孫慧.乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的研究現(xiàn)狀 [J].國外醫(yī)學(xué).腫瘤學(xué)分冊,2004.12(31)：916

[2]Liotta LA,Kohn EC.The microenvironment of the tumour-host interface[J].Nature,2001,411：375-379

[3]Weber GF.The metastssis gene osteopontin：a candidate target for cancer therapy[J].Biophys Acta,2001,(2)：61-85

[4]Selig er B,Cabrera T,Garrido F,et al.CD44class Iantig en abnormalities and immune escape by maligant cells[J].Semin Cancer Biol,2002,12(1)：3-13

[5]Anwar F and Wood BL.CD44H and CD44V6 expression in different subtypes of Hodgkin lymphoma[J].M od Pathol,2000,13(10)：1121-1127

[6]李燕平,徐惠綿,張斌,等.CD44V6表達(dá)與乳腺癌臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系 [J].中國腫瘤臨床與康復(fù),2001,8(4)：5-6

[7]Ito T,Hashimoto Y,Tanaka E,et al.An inducible shorthairpinRN A vector against osteopontin reduces metastatic potential of human esophageal squamous cell carcinomain vitro andin vivo[J].Clin Cancer Res,2006,12(4)：1308-1316

[8]Gao CJ,Guo HT,Downey L,el a1.Osteopontin- dependent CD44v 6 expression and cell adhension in HepG2 cells[J].Carcinogenesis,2003,124(12)：1871-1878