宮健偉，葉蕾（濱州醫(yī)學(xué)院，山東煙臺264003）

補(bǔ)陽還五湯對腦缺血再灌注大鼠腦組織NO及NOS的影響

宮健偉，葉蕾
（濱州醫(yī)學(xué)院，山東煙臺264003）

目的觀察補(bǔ)陽還五湯對腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影響。方法采取血管內(nèi)栓塞阻斷法制成大鼠腦缺血再灌注模型，比較補(bǔ)陽還五湯與尼莫地平對大鼠腦組織中的NO、NOS的變化。結(jié)果與假手術(shù)組比較，各組大鼠腦組織NO及NOS含量均不同程度降低；補(bǔ)陽還五湯組與尼莫地平組均較模型組顯著增高NO及NOS含量，補(bǔ)陽還五湯組作用明顯。結(jié)論補(bǔ)陽還五湯具有增加腦NO及NOS含量的作用。

補(bǔ)陽還五湯；腦缺血；一氧化氮；一氧化氮合酶；大鼠

腦卒中病具有高發(fā)病率和高病死率的特點(diǎn)，其中缺血性腦卒中約占腦卒中病人的70%以上。補(bǔ)陽還五湯出自清代醫(yī)家王清任的《醫(yī)林改錯》，方由黃芪四兩，當(dāng)歸尾一錢半，赤芍二錢，地龍、川芎、桃仁、紅花各一錢等7味藥物組成，具有補(bǔ)氣、活血、通絡(luò)作用，主治腦卒中后遺癥，是中醫(yī)臨床上用于預(yù)防腦卒中和治療腦卒中及后遺癥的常用名方?，F(xiàn)代藥理研究證實，補(bǔ)陽還五湯具有改善腦循環(huán)、增加腦血流量、改善血流動力學(xué)、改善腦細(xì)胞能量代謝、抗氧化作用及抑制自由基的產(chǎn)生和滅活自由基、拮抗神經(jīng)毒性作用、減輕炎癥反應(yīng)、促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)肽紊亂等多方面作用［1］。本實驗采取血管內(nèi)栓線阻斷法制成經(jīng)典的大鼠腦缺血再灌注模型（MACO模型），觀察補(bǔ)陽還五湯對腦組織一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及藥物試劑清潔級SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量150～180 g，購自煙臺綠葉制藥股份有限公司。補(bǔ)陽還五湯液：按《醫(yī)林改錯》原方所載的各藥（黃芪120 g，當(dāng)歸尾6 g，赤芍5 g，川芎、地龍、桃仁、紅花各3 g），依據(jù)原書的用量比例，浸泡，進(jìn)行水煎煮，煎煮30 min，過濾；再加水煎煮30 min，過濾，兩次濾液合并，并濃縮成150%的液體（每毫升含原方生藥1.5 g），冰箱保存?zhèn)溆?。尼莫地平：天津制藥廠，冰箱保存?zhèn)溆?。水合氯醛：購自上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號20070716；一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）試劑盒：由南京建成生物工程研究所提供（批號200801017）。

1.2 實驗方法清潔級SD大鼠隨機(jī)編號分為4組：假手術(shù)組，模型對照組，補(bǔ)陽還五湯湯液組，尼莫地平組，每組10只。

采取灌胃法，補(bǔ)陽還五湯按7.5 mL／kg的劑量進(jìn)行灌胃；模型組及假手術(shù)組則分別給予等量的生理鹽水進(jìn)行灌胃；尼莫地平1 mg／kg術(shù)前30 min皮下注射。每日1次，連續(xù)7 d后，實施腦缺血再灌注造模。采取經(jīng)典方法血管內(nèi)栓線阻斷法造成MACO模型［2-3］：以10%水合氯醛（0.4 mL／100 g）腹腔注射麻醉大鼠，頸部正中切口，沿氣管兩側(cè)分離出左右頸總動脈（CCA），并在動脈下穿線備用。然后，迅速用套有硅膠的動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈，造成急性腦缺血。以翻正反射消失，雙側(cè)瞳孔放大，呼吸加深但能自主呼吸為模型成功標(biāo)志。30 min后開放CCA再灌注。假手術(shù)組所采用的方法與模型組相同，但不夾閉雙側(cè)頸總動脈的操作。腦缺血造模30 min后開放CCA再灌注2 d后，立即迅速斷頭取腦。在冰浴中取左側(cè)大鼠大腦從額極后3 mm取腦，用冰磷酸鹽緩沖液沖洗后置液氯保存待測。指標(biāo)測定時腦組織用冰磷酸鹽緩沖液制成10%腦組織勻漿，3 500 r／min于4℃離心15min，分離上清液，分別測定NO及NOS含量。具體按試劑盒操作步驟的要求測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，統(tǒng)計分析用t檢驗。

2 結(jié)果

模型組大鼠腦組織NO和NOS含量明顯低于假手術(shù)組；補(bǔ)陽還五湯組大鼠腦NO及NOS含量均不同程度低于假手術(shù)組，而高于模型組，且有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 對腦組織中NO、NOS含量的影響±s）μmol／g

表1 對腦組織中NO、NOS含量的影響±s）μmol／g

注：與假手術(shù)組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組別n NO NOS假手術(shù)組10 3.68±1.03 12.67±1.43＃＃模型組10 1.51±1.31＃＃8.96±1.04＃＃補(bǔ)陽還五湯組10 2.73±0.74?！?0.02±0.94＃?！崮仄浇M10 2.58±0.81?！?.64±1.28＃＃

3 討論

補(bǔ)陽還五湯是清代著名醫(yī)家王清任創(chuàng)立的益氣活血之代表方劑，方中重用黃芪大補(bǔ)元?dú)?，取其“氣旺而促進(jìn)血行”，血暢則絡(luò)脈通，從而治療氣虛血瘀絡(luò)阻的各種疾病。近年來報道用補(bǔ)陽還五湯治療缺血性腦血管病均取得了較好的療效。研究表明，缺血再灌注是大多數(shù)缺血性腦血管病的病理生理過程，而引起缺血再灌注損傷的機(jī)制比較復(fù)雜，至今尚未徹底闡明［4］。

NO是一種具有多種生物活性的氣體小分子，其主要生理作用是擴(kuò)張血管、促進(jìn)免疫、抗血栓形成等。研究表明，固有型NOS（cNOS）在基礎(chǔ)條件下起作用，產(chǎn)生的NO對腦循環(huán)起重要的調(diào)節(jié)作用；而誘導(dǎo)型NOS（iNOS）在基礎(chǔ)條件下不起作用，在缺血時表達(dá)并產(chǎn)生高濃度的NO，從而加速能量消耗，損傷DNA，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡。腦組織在遭受缺血性刺激時，NO濃度和NOS活性常明顯升高，特別是在缺血再灌注早期，是引起缺血性腦損傷的主要因素之一［5］?？梢?，NO既具有潛在的有益作用，又有毒性作用，NO濃度升高主要發(fā)生在缺血早期，此時對神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，而在再灌注后期，NO對腦血流等具有有益調(diào)節(jié)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在再灌注48 h后，腦組織NO含量降低，NOS活性降低，表明此時腦組織內(nèi)NO合成障礙。給予補(bǔ)陽還五湯后，可對抗再灌注后期NO含量和NOS活性的降低。總之，本研究表明，在腦缺血后再灌注48 h，腦組織NOS活性降低，NO合成減少。補(bǔ)陽還五湯對腦組織能量代謝具有一定的調(diào)節(jié)作用，并可增加NOS活性，促進(jìn)NO合成，提示該方有對抗腦缺血、保護(hù)腦組織的作用。

［1］王敏，鄧長青.補(bǔ)陽還五湯抗腦缺血作用的研究概況與展望［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，20（4）：71-72.

［2］陳奇.中藥藥效研究思路與方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：219.

［3］Longa E Z，Weinstein P R，Carisons，et，al.Reversible middle cerebral arteryocclusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1）：84-91.

［4］吳基良，劉超.補(bǔ)陽還五湯對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用［J］.中國老年學(xué)雜志，2004，24（6）：552.

［5］Hangai M.er al.Inducible Nitric Oxide Synthase in Retinal Ischemia2 Reperfusion Injury［J］.Exp Eye Res，1996，63（5）：501-509.

R285.5

A

1007－4813（2010）06－0819－02

2010－08－04）

宮健偉（1978－），男，碩士，講師。研究方向：古今名方的臨床與實驗研究。