閻立英

(河北省唐山市怡安生物工程有限公司 河北 唐山 063020)

乙腦滅活疫苗生產(chǎn)過程中采用甲醛溶液進(jìn)行滅活處理。甲醛已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織確定為致癌和致畸物質(zhì),因而須控制制品中游離甲醛的殘留含量,提高制品的安全性[1]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 ①主要材料及試劑:0.05%甲醛對照品貯備液;品紅亞硫酸溶液;混合酸溶液;乙腦滅活疫苗。②主要儀器:SPECTROUV-VISAUTO紫外 -可見分光光度計 Labomed,Inc,U.S.A。

1.2 方法 ①供試品:取甲醛含量約為0.005%供試品溶液1.0mL,置 50mL納氏比色管中,加水稀釋至 5.0mL,即為供試品溶液。加品紅亞硫酸溶液 10mL,混合酸溶液 10mL,搖勻,在25℃放置 3小時,在波長 590nm處測定吸光度。②標(biāo)準(zhǔn)曲線:精密量取 0.05%甲醛對照品貯備液 10mL,置 100mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,制成0.005%甲醛對照品溶液。精確量取0.005%甲醛對照品溶液 0.5、1.0l、1.5、2.0mL,分別置 50mL納氏比色管中,加水稀釋至5.0mL,得到不同濃度即0.0025%、0.005%、0.0075%、0.0100%的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。加品紅亞硫酸溶液 10mL,混合酸溶液 10mL,搖勻,在 25℃放置 3小時,在波長590nm處測定吸光度。以甲醛對照品溶液的濃度(X)為橫坐標(biāo),以相應(yīng)濃度的吸光度(Y)為縱坐標(biāo)作直線回歸,將 X值、Y值輸入計算機,應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件 STA1(14)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)。③將供試品溶液的吸光度代入回歸方程,計算出供試品的游離甲醛含量。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(99%可信限范圍) 取不同濃度的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液,測定吸光值,重復(fù) 3次,相關(guān)系數(shù)在 0.9821～0.9976之間。表明甲醛濃度在 0.0025%～0.0100%范圍內(nèi),甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液與吸光度具有較好的線性關(guān)系,見表 1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.2 6批乙腦滅活疫苗游離甲醛含量測定結(jié)果 應(yīng)用該方法進(jìn)行 6批乙腦滅活疫苗游離甲醛含量測定,每批疫苗檢測 6次,結(jié)果游離甲醛含量均小于 0.01%,見表 2。

表2 6批乙腦滅活疫苗游離甲醛含量測定結(jié)果

3 討論

標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的確定。三條標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.0025%～0.0100%4個濃度下所測得的吸光度值在 0.038～0.598范圍內(nèi),根據(jù)理論吸光度值在 0.3～0.7之間比較穩(wěn)定,所測結(jié)果顯示低濃度時的吸光度值偏低。但是由于乙腦滅活疫苗中游離甲醛含量極低,所以標(biāo)準(zhǔn)甲醛濃度還應(yīng)在 0.0025%～0.0100%。因此要求操作人員在檢驗過程中一定要做到細(xì)心、準(zhǔn)確、認(rèn)真,將相關(guān)系數(shù) r2控制在 0.98以上,以保證結(jié)果的可信度。通過 6批乙腦滅活疫苗游離甲醛含量測定的結(jié)果可以看出,甲醛含量均小于 0.01%,說明疫苗生產(chǎn)工藝可行,建議乙腦滅活疫苗游離甲醛含量質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)小于 0.01%。

通過討論及實驗結(jié)果分析,說明游離甲醛含量測定方法用于乙腦滅活疫苗生產(chǎn)中測定殘留甲醛含量是可行的。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].三部,北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.34

[2]李湘鳴,漆德瑤.SPSS10.0生物醫(yī)學(xué)使用指導(dǎo)[M].南京:東南大學(xué)出版社,2005.107-115