韓亞琴,臧素綱,周玉貴,劉昌元,陸曉云

(江蘇省東臺市人民醫(yī)院檢驗科 224200)

酸性α-醋酸萘酯酶(acid alpha naphthyl acetate esterase,α-NAE)是一種細(xì)胞溶酶體酶,主要分布于肝、胰、腎、小腸、單核巨噬細(xì)胞及組織細(xì)胞內(nèi)。此酶多應(yīng)用于細(xì)胞化學(xué)來鑒別診斷白血病、淋巴細(xì)胞亞群分類以及同工酶的研究中[1-3]。而血清α-ANE測定及其對肝病的臨床研究甚少,作者認(rèn)為除乙酰膽堿脂酶外血清α-ANE同樣是一新的具有實用價值的酶學(xué)指標(biāo)?，F(xiàn)將作者建立的方法以及臨床研究結(jié)果報道如下。

1 臨床資料

1.1 標(biāo)本來源 對照組40例為20～45歲體檢合格自愿者。肝病組為診斷明確的HBSAg(+)的肝病患者160例,其中急性肝炎25例,慢性肝炎40例,肝硬化者86例(按Child-pugh′s分類:A級40例,B級34例,C級12例),肝癌 9例(伴肝硬化4例)。

1.2 儀器與試劑 儀器為7060全自動生化分析儀及721分光光度計。試劑為本科室配制(見參考文獻(xiàn)[2])。R1為基質(zhì)液(以新鮮配制為佳)由 0.1mol/L、pH 6.2磷酸鹽和1.5%PVP組成緩沖液,使用時取緩沖液20.0mL(37℃預(yù)溫)再加1%α-醋酸萘酯丙酮液1mL(邊加邊搖)備用,濃度相當(dāng)于2.5 mmol/L;R2為顯色劑,由1.0mol/L冰醋酸和0.5%二甲基甲酰胺(DMF)組成,使用時取100mL加入固蘭 B鹽24mg振搖助溶備用,濃度相當(dāng)于 0.5mmol/L。標(biāo)準(zhǔn)液為 4mmol/L α-萘酚。

1.3 實驗方法 取血清標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)液0.005mL加R1基質(zhì)液0.1mL于37℃水浴5min后加R2顯色液0.2mL,水浴5min后比色。比色條件為波長505nm,比色杯光徑0.70cm。計算公式:RA-BA/SA-BA×0.02×1 000/0.005/5=RA/SA×800=α-ANE/L。如手工操作則在反應(yīng)終止后立即加1.0mol/L冰醋酸1.2mL,選530nm波長、0.5cm光徑比色。單位定義:每升血清37℃酶促反應(yīng)每分鐘產(chǎn)生 1mol的α-萘酚為1個酶活性單位。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 組間比較用t檢驗。

2 結(jié) 果

各種肝病患者血清α-ANE檢測結(jié)果見表1。

表1 各種肝病患者與對照組血清α-ANE檢測結(jié)果比較(u/L

表1 各種肝病患者與對照組血清α-ANE檢測結(jié)果比較(u/L

*:與對照組比較,P＜0.01;**:與A級比較,P＜0.01;△:與伴肝硬化組比較,P＜0.01。

組別 n α-ANE對照組 40 1 625±275急性肝炎組 25 1 315±280*慢性肝炎組 40 1 250±335*肝硬化組 86 715±201*A級 40 871±261 B級 34 445±62**C級 12 425±43**肝癌組 9 950±162*伴肝硬化組 4 580±125無肝硬化組 5 1 300±200△

3 討 論

血清酸性α-ANE主要合成于肝臟,屬于細(xì)胞外血清(漿)固有的功能酶類,是反映肝細(xì)胞合成功能的一種非特異性酯酶之一,當(dāng)肝細(xì)胞變性、壞死和纖維化后,血清中酸性α-ANE活性下降[2]。本檢測結(jié)果顯示4組肝病患者血清酸性α-ANE結(jié)果與對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,其酶活性都有不同程度的改變。酶活性降低程度依次分別為急性肝炎組、慢性肝炎組、肝癌組、肝硬化組,肝硬化組酶活性降低程度尤為明顯。86例肝硬化患者按照 Child-pugh′s分類分為 A、B、C級,其中血清α-ANE活性A級與B、C兩級比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01),且肝癌組中無肝硬化組與伴肝硬化組比較,差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義。表明肝炎和肝癌(不伴肝硬化)組酶活性下降程度相對肝硬化組小,是基于肝細(xì)胞損傷程度較輕或病變局限性,受損面積小,肝臟代償能力強(qiáng),合成功能尚好。肝硬化患者酶活性下降幅度大是由于肝臟受到進(jìn)行性、彌漫性損害,肝細(xì)胞受累嚴(yán)重,病變范圍廣,肝臟功能嚴(yán)重受損,酶活性反應(yīng)更敏感。從肝硬化晚期B、C級α-ANE值也應(yīng)證此點,酶活性降低程度與肝臟損傷程度、硬化級別一致。慢性肝炎患者當(dāng)病情加重,肝功能受損,病變累及線粒體,細(xì)胞功能下降,血清α-ANE趨低時可視為慢性肝炎向肝硬化發(fā)展趨勢的變動指標(biāo)之一,提示肝損傷進(jìn)一步加重,應(yīng)予以重視[4]。

目前應(yīng)用于肝臟疾病診斷的指標(biāo)雖然都有一定的臨床價值,但也有一定的局限性,α-ANE活性與肝臟疾病有明顯的相關(guān)性,如果結(jié)合血清α-ANE檢測,做到多項指標(biāo)聯(lián)合檢測,綜合判斷對病情的發(fā)展、療效觀察、預(yù)后判斷都有重要的參考價值。

[1]朱辛為,李質(zhì)馨,竇肇華,等.T淋巴細(xì)胞標(biāo)記染色——ANAE法的改進(jìn)[J].解剖學(xué)雜志,2003,26(3):300.

[2]周玉貴,王傳芳,陸曉云,等.血清酸性α-醋酸萘酯酶比色測定及初步臨床應(yīng)用[J].臨床檢驗雜志,2003,21(4):211.

[3]肖云,王燕,戴志敏,等.肝病患者血清酸性a-醋酸萘酯酶及其同工酶的變化[J].世界華人消化雜志,2004,12(8):1932.

[4]李慶琳,葉躍紅,唐波.多指標(biāo)聯(lián)合檢測在肝病診斷中的意義[J].重慶醫(yī)學(xué),2007,36(5):907.