文愛清,孫繼德,黃衡柳,袁 玲,何 靜,陳方祥

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所:1.輸血科;2.檢驗(yàn)科,重慶400042)

梅毒是由梅毒螺旋體(treponema pallidum TP)感染引起的一種慢性全身性以性傳播途徑為主的乙類傳染病。近年來,其發(fā)病率在我國呈明顯上升趨勢,已成為一個(gè)十分嚴(yán)重的社會(huì)和醫(yī)學(xué)問題[1-2]。梅毒的血清學(xué)檢查在梅毒的診斷中發(fā)揮著重要作用,已被衛(wèi)生部列為輸血前、術(shù)前等常規(guī)必查項(xiàng)目。目前對梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的選擇一般采用TP-ELISA法等對其進(jìn)行初篩,出現(xiàn)陽性者再用梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(Treponema pallidum particle assay,TPPA)、梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)(T reponema pallidum hemagglutination assay,TPHA)、熒光密螺旋體抗體吸收實(shí)驗(yàn)(Fluorescent treponemal antibody absorption test,FTA-ABS)等方法做確認(rèn)試驗(yàn)。TPPA法是目前應(yīng)用最廣泛的梅毒血清學(xué)確證試驗(yàn)之一,但據(jù)報(bào)道TPPA法存在不確定結(jié)果和1%～2%生物學(xué)假陽性率[3],在老年群體中假陽性率甚至高達(dá)37.21%[4-6]。為此,特以FTA-ABS法為金標(biāo)準(zhǔn),重新對TPPA法進(jìn)行評價(jià),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 89份血清分別取自2007年1月至2008年12月大坪醫(yī)院門診及住院部各科均確診為梅毒的患者,其中男52例,女 37例;年齡 20～92歲,平均48.3歲。135例非梅毒患者(對照組)中男 62例,女73例;年齡25～89歲,平均47.1歲,其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)20例,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)10例,妊娠26～30周孕婦11例,腫瘤9例,結(jié)核8例,冠心病15例,高血壓11例,糖尿病9例,腦血栓11例,肝硬化9例,健康獻(xiàn)血者20例。將對照組又分為老年組(≥60歲)65例和中青年組(＜60歲)70例。

1.2 試劑與儀器 TPPA法試劑由日本富士株式會(huì)社提供;FTA-ABS法試劑由德國歐蒙公司生產(chǎn)。熒光顯微鏡為日本OLYMPUS BX51。

1.3 檢測方法 收集研究對象血清,-70℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?均嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有計(jì)數(shù)資料采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法檢測89例梅毒患者血清抗體結(jié)果比較 見表1。

2.2 兩種方法檢測135例非梅毒患者血清抗體結(jié)果比較 見表2。

2.3 兩種方法敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較TPPA法與FTA-ABS法比較敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),見表3。

2.4 非梅毒患者不同年齡組兩種方法假陽性比較 在135例非梅毒患者(包括20例健康獻(xiàn)血者)中 TPPA法檢測梅毒 IgG抗體陽性12例,其中老年組10例,假陽性率高于中青年組,分別為15.38%、2.86%,也高于 FTA-ABS法,分別為 4.62%、1.43%,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.44,P=0.50),見表4。

表1 兩種方法檢測89例梅毒患者血清抗體結(jié)果比較〔n(%)〕

表2 兩種方法檢測135例非梅毒患者血清抗體結(jié)果比較(n)

表3 兩種方法敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較

表4 不同年齡組兩種方法假陽性比較〔n(%)〕

3 討 論

TPPA法基本原理是采用超聲裂解純化的梅毒螺旋體Nichols株為抗原,包被在人工載體明膠粒子上,該試驗(yàn)省略了吸收劑,減少了生物因素的影響,提高了敏感性和特異性。主要用于篩檢陽性標(biāo)本的確診,是近年來臨床常用的梅毒螺旋體確認(rèn)實(shí)驗(yàn),也是被美國疾病預(yù)防控制中心(CDC)定為確診的方法之一。本研究結(jié)果顯示TPPA法敏感性、特異性分別為94.4%、91.1%,與 FTA-ABS法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),說明TPPA法具有較高的特異性和敏感性,而且其結(jié)果穩(wěn)定、易判斷并可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)加樣,是一種比較好的梅毒血清學(xué)檢測確證方法。

TPPA法在工藝上進(jìn)行了改良,相比TP初篩方法如TPELISA法等而言,非特異性凝集的發(fā)生較少見,但所謂的確認(rèn)試驗(yàn),并非真正意義上的確認(rèn)。作者在工作中也注意到有很多臨床無癥狀、主訴無發(fā)病史和疾病接觸史的老年人血清TPPA法梅毒抗體檢測陽性[1],這將干擾臨床診療工作,易造成誤診,甚至引起醫(yī)療糾紛。本研究結(jié)果也顯示TPPA法在老年組的假陽性率為15.38%,在非老年組的假陽性率為4.62%,說明年齡對TPPA法的檢測結(jié)果有一定影響,本研究結(jié)果與武建國[7]報(bào)道一致。導(dǎo)致此種現(xiàn)象的原因可能是老年人容易出現(xiàn)免疫功能異常,產(chǎn)生一些針對聯(lián)接用的清蛋白抗體或是一些異常蛋白質(zhì)干擾了TPPA法的凝集反應(yīng);也可能是因?yàn)槔夏耆顺０橛行哪X血管疾病、糖尿病、腫瘤及白血病等慢性疾病,產(chǎn)生交叉性梅毒抗體成分而發(fā)生交叉反應(yīng)[8-9]。本組TPPA法12例假陽性患者中10例患有多年高血壓、糖尿病等,由此可見年齡與疾病因素是造成老年人梅毒抗體易發(fā)生假陽性的重要原因。因此在梅毒抗體檢測中了解出現(xiàn)假陽性的可能影響因素,對于減少工作中差錯(cuò)事故的發(fā)生有極其重要的意義。

值得一提的是本研究采用的梅毒檢測的金標(biāo)準(zhǔn)為FTAABS法,由于該法是采用非致病性密螺旋體提取物作為吸收劑吸收待檢血清,排除了同屬抗原的交叉結(jié)合,保證了試驗(yàn)結(jié)果的特異性;但是由于其試驗(yàn)過程繁瑣,技術(shù)要求高,需要熒光顯微鏡等諸多因素影響,現(xiàn)只用于有爭議的標(biāo)本確認(rèn),臨床常不開展此項(xiàng)檢測。少數(shù)情況下也有出現(xiàn)生物學(xué)假陽性的報(bào)道,本研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)(在135例非梅毒患者中仍有4例陽性)。所以作者認(rèn)為,為能正確反應(yīng)患者梅毒感染狀況,減少醫(yī)療糾紛的發(fā)生,保證醫(yī)療安全,從節(jié)約成本、提高試驗(yàn)準(zhǔn)確性和更好服務(wù)于臨床等多方面考慮,在進(jìn)行梅毒血清學(xué)檢測時(shí)應(yīng)選用其他方法(TP-IgG、TP-IgM和TPPA法等)篩選,當(dāng)出現(xiàn)TPPA法陽性反應(yīng)(尤其是老年人陽性)時(shí),一些有條件的中大型醫(yī)院或研究所還應(yīng)結(jié)合FTA-ABS法等方法加以確證,并綜合甲苯胺不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)進(jìn)行療效觀察[10]。

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