郭俊杰,王寶山,馮瑪莉,賈力莉,趙玉立

胰復(fù)敏膠囊主要由黃芪、女貞子、黃連、鬼箭羽、黃精等中藥組成,具有益氣養(yǎng)陰、化痰活血解毒之功效。經(jīng)臨床觀察,胰復(fù)敏膠囊可顯著減輕患者癥狀,改善胰島素抵抗。為進(jìn)一步研究該藥對(duì)胰島素抵抗的作用機(jī)制,現(xiàn)將胰復(fù)敏膠囊對(duì)高熱量加四氧嘧啶致胰島素抵抗小鼠的影響研究報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 小鼠,昆明種,雌雄各半,體重22 g±2 g。山西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供,合格證號(hào):晉動(dòng)(證)字第A00-001號(hào)。

胰復(fù)敏膠囊(山西省中醫(yī)藥研究院制劑室,每粒0.5 g,每克折合生藥4.03 g批號(hào)為071126);鹽酸二甲雙胍腸溶片(北京利齡恒奈藥業(yè)有限公司,每片250 mg,批號(hào)為 060702);地塞米松磷酸鈉注射液(天津金耀氨基酸有限公司,批號(hào)為0505091);四氧嘧啶(北京西中化工廠,批號(hào)20070201);葡萄糖粉(石家莊市華營(yíng)聯(lián)合葡萄糖廠,批號(hào)20070417);全脂加糖奶粉(山西古城乳業(yè)有限公司,批號(hào)20070628);血糖測(cè)定試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司,批號(hào)200706);胰島素測(cè)定試劑盒(深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司);小鼠胰島受體β測(cè)定試劑盒(ADLITTERAM DIAGNOSTIC LABORATORIES)。

島津UV-3000紫外分光光度計(jì),日本島津株式會(huì)社;M ULTIDKAN M K3酶標(biāo)儀:Thermo公司;微量血糖儀:美國(guó)強(qiáng)生公司。

1.2 方法 取小鼠80只,雌雄各半,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周。隨機(jī)取10只為正常對(duì)照組,飼以普通飼料和常水。其余小鼠飼以高脂高熱量飼料并同時(shí)以10%葡萄糖溶液代水喂養(yǎng)。第15周,肌肉注射地塞米松2 mg/kg;第19周,禁食12 h,尾靜脈注射四氧嘧啶35 mg/kg,72 h后微量血糖儀測(cè)定空腹血糖,選擇取空腹血糖≥7.0 mmol/L的小鼠,作為胰島素抵抗模型小鼠。

將入選模型小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、胰復(fù)敏高劑量、胰復(fù)敏中劑量、胰復(fù)敏低劑量共 5組,各組小鼠10%葡萄糖溶液20mL/(kg?d);陽(yáng)性對(duì)照組灌胃鹽酸二甲雙胍腸溶片0.25 g/(kg?d),相當(dāng)于臨床用量10倍;胰復(fù)敏高劑量組3.00 g/(kg?d)、中劑量組1.5 g/(kg?d)、低劑量組0.75 g/(kg?d),分別相當(dāng)于臨床用量的30倍、15倍、7.5倍。正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予等量生理鹽水,灌胃給藥,20 mL/kg,每日1次,連續(xù)15 d。

1.3 檢測(cè)指標(biāo) 給藥15 d后,禁食6 h,眶后靜脈叢取血,頸椎脫臼處死小鼠,2 500/min離心,取血清,葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血清葡萄糖、化學(xué)發(fā)光法測(cè)定空腹血清胰島素;取小鼠股四頭肌約100 mg加入適量生理鹽水,制成10%勻漿備用,蒽酮法測(cè)定肌糖原含量(mg/100g組織)及免疫酶標(biāo)法測(cè)定胰島受體

β。胰島素敏感指數(shù)(ISI)=LN[1/FIN×FBG][1];穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=LN[FIN×FBG/22.5],FIN為空腹胰島素,FBG為空腹血糖[2]。

2 結(jié) 果

2.1 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠一般狀況的影響 給藥前正常對(duì)照組體重顯著低于模型對(duì)照組,其余各組與模型對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;給藥后模型對(duì)照組體重顯著高于正常對(duì)照組,胰復(fù)敏膠囊高劑量組顯著低于模型對(duì)照組;正常對(duì)照組體重與給藥前無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,模型對(duì)照組體重顯著高于給藥前,胰復(fù)敏膠囊中、高劑量組給藥后體重顯著低于給藥前(P＜0.05或P＜0.01);胰復(fù)敏膠囊低、中、高劑量組給藥前后體重差值均顯著低于模型對(duì)照組。詳見(jiàn)表1。

表1 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠體重的影響(±s)g

表1 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠體重的影響(±s)g

組別 劑量 n 給藥前 給藥后 差值正常對(duì)照組 - 10 44.3±3.01) 45.4±3.11) 1.09±2.02模型對(duì)照組 - 14 47.3±3.7 49.2±4.23) 1.83±2.98二甲雙胍組 0.25 g/kg 13 48.0±4.9 45.8±4.43) -2.15±4.281)胰復(fù)敏低劑量組 0.75 g/kg 14 46.9±6.8 45.2±6.01) -1.92±5.011)胰復(fù)敏中劑量組 1.50 g/kg 14 47.1±4.0 45.1±6.61)3) -1.17±2.481)胰復(fù)敏高劑量組 3.00 g/kg 14 47.5±5.2 45.3±4.61)4) -2.42±4.362)與模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01;與給藥前比較,3)P＜0.05,4)P＜0.01

2.2 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠胰島素敏感性的影響 空腹胰島素水平、胰島素敏感指數(shù)、胰島素抵抗指數(shù)模型對(duì)照組顯著高于正常對(duì)照組,胰復(fù)敏膠囊低、中、高劑量組空腹胰島素水平顯著低于模型對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01)。詳見(jiàn)表2。

表2 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素及其敏感指數(shù)、抵抗指數(shù)的影響(±s)

表2 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素及其敏感指數(shù)、抵抗指數(shù)的影響(±s)

組別 劑量 n 胰島素(μ IU/mL)胰島素敏感指數(shù) 胰島素抵抗指數(shù)正常對(duì)照組 - 10 1.07±2.382) 0.30±2.542) -3.41±2.542)模型對(duì)照組 - 11 5.16±3.10 -3.41±0.58 -0.30±0.58二甲雙胍組 0.25 g/kg 12 1.87±1.292) -1.87±1.722) -1.24±1.722)胰復(fù)敏低劑量組 0.75 g/kg 11 3.33±1.711) -2.86±0.541) -0.25±0.541)胰復(fù)敏中劑量組 1.50 g/kg 12 2.41±2.401) -1.96±1.742) -1.15±1.742)胰復(fù)敏高劑量組 3.00 g/kg 13 1.21±0.922) -1.22±1.962) -1.89±1.962)與模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01

2.3 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠血糖的影響 給藥前模型各組小鼠空腹血糖顯著高于正常對(duì)照組;給藥后與給藥前空腹血糖差值胰復(fù)敏膠囊低、中、高劑量組均顯著高于模型對(duì)照組(P＜0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

表3 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

組別 劑量 n 給藥前 給藥后 差值正常對(duì)照組 - 10 4.70±0.931) 6.43±0.62 1.19±1.811)模型對(duì)照組 - 11 7.94±2.30 7.89±3.02 0.17±0.97二甲雙胍組 0.25 g/kg 12 8.26±2.07 6.47±1.06 -1.99±2.921)胰復(fù)敏低劑量組 0.75 g/kg 11 9.49±5.75 6.00±0.44 -3.47±5.991)胰復(fù)敏中劑量組 1.50 g/kg 12 7.35±0.87 6.17±1.03 -1.02±1.561)胰復(fù)敏高劑量組 3.00 g/kg 13 9.59±3.24 6.23±0.71 -3.28±3.192)模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01

2.4 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間的影響 正常對(duì)照組小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間顯著高于模型對(duì)照組,胰復(fù)敏膠囊高劑量組顯著高于模型對(duì)照組(P＜0.05)。詳見(jiàn)表4。

表4 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間的影響(±s)

表4 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間的影響(±s)

組別 劑量 n 轉(zhuǎn)棒時(shí)間(s)正常對(duì)照組 - 10 14.7±8.51)模型對(duì)照組 - 11 9.3±4.8二甲雙胍組 0.25 g/kg 12 9.5±6.4胰復(fù)敏低劑量組 0.75 g/kg 11 9.4±5.2胰復(fù)敏中劑量組 1.50 g/kg 12 9.2±3.8胰復(fù)敏高劑量組 3.00 g/kg 13 12.5±5.21)與模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05

2.5 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠胰島素受體的影響 模型對(duì)照組胰島β受體含量顯著低于正常對(duì)照組,胰復(fù)敏膠囊低、中、高劑量組胰島β受體含量均顯著高于模型對(duì)照組(P＜0.05或 P＜0.01)。詳見(jiàn)表5。

表5 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠胰島素β受體的影響(±s)

表5 胰復(fù)敏膠囊對(duì)胰島素抵抗小鼠胰島素β受體的影響(±s)

組別 劑量 n 胰島受體β ng/mL正常對(duì)照組 - 10 3.83±1.721)模型對(duì)照組 - 11 2.34±1.14二甲雙胍組 0.25 g/kg 12 3.72±1.011)胰復(fù)敏低劑量組 0.75 g/kg 11 3.45±0.551)胰復(fù)敏中劑量組 1.50 g/kg 12 3.59±0.761)胰復(fù)敏高劑量組 3.00 g/kg 13 3.19±1.192)與模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01

3 討 論

2型糖尿病胰島素抵抗多見(jiàn)多食善饑、口干多飲或小便頻數(shù)、疲倦乏力、形體偏胖或頭重、視物模糊、心煩胸悶、肢體麻木疼痛等,部分患者無(wú)明顯癥狀,依其癥狀表現(xiàn)屬于中醫(yī)“消渴”“消癉”范疇。

中醫(yī)治療常見(jiàn)的有滋陰清熱、益氣養(yǎng)陰、活血化瘀以及補(bǔ)腎、從脾從肝論治等其他治法。2型糖尿病胰島素抵抗患者多辨證為氣陰兩虛,痰瘀毒互結(jié),針對(duì)其證型特點(diǎn)研制的益氣養(yǎng)陰、化痰活血解毒制劑胰復(fù)敏膠囊,臨床應(yīng)用療效顯著。

胰復(fù)敏膠囊組方黃芪、女貞子、蒼術(shù)、丹參、黃連、鬼箭羽、黃精。方中黃芪甘微溫,歸脾肺經(jīng),善補(bǔ)肺、脾之氣,肺氣足能調(diào)節(jié)水液,使津液四布;脾氣旺可輸布水谷精微,且黃芪有補(bǔ)氣提升運(yùn)轉(zhuǎn)之功,調(diào)整臟腑活動(dòng)機(jī)能,可使脾胃健運(yùn),使生痰無(wú)源;女貞子味苦甘平,滋陰補(bǔ)腎,二者共為君藥,以健脾補(bǔ)腎,益氣養(yǎng)陰。蒼術(shù)辛苦溫,歸脾胃經(jīng),苦溫燥濕則可化痰、辛香健脾則使痰濕自消;丹參苦微寒,活血祛瘀;黃連苦寒,燥濕解毒,三者共為臣,以化痰活血解毒。鬼箭羽苦寒,活血解毒;黃精性味甘平,益脾補(bǔ)中共為佐使,助君健脾益氣,活血解毒。

從本實(shí)驗(yàn)可以看出,胰復(fù)敏膠囊明顯降低胰島素抵抗小鼠體重、增加胰島素抵抗小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間,具有改善胰島素抵抗小鼠一般狀況的作用;胰復(fù)敏膠囊低、中、高劑量組均顯著降低胰島素抵抗小鼠血糖;提高胰島素敏感指數(shù),降低胰島素抵抗指數(shù),對(duì)胰島素抵抗小鼠具有增加胰島素敏感作用。

胰島素抵抗發(fā)生時(shí),血清胰島素水平可以正?；蛏?但是與胰島素受體的結(jié)合能力以及受體后的效應(yīng)均減弱,胰島素介導(dǎo)下肌肉和脂肪組織攝取葡萄糖的能力下降,同時(shí)肝臟、肌肉組織中糖原分解葡萄糖生成增加。胰復(fù)敏膠囊對(duì)于飼以高脂高熱量飼料并同時(shí)以10%葡萄糖溶液喂食加小劑量地塞米松、四氧嘧啶致胰島B細(xì)胞部分破壞制造胰島素抵抗糖尿病小鼠模型,顯著降低空腹血糖和胰島素水平,增加胰島素敏感指數(shù)、胰島素β受體含量,降低胰島素抵抗指數(shù),其對(duì)胰島素抵抗小鼠顯著的增敏作用可能通過(guò)增加肌肉組織中胰島素受體含量,增加肌肉組織胰島素的敏感性,促進(jìn)肌肉組織對(duì)葡萄糖的攝取,進(jìn)而轉(zhuǎn)化為肌糖原,或抑制肌糖原分解而實(shí)現(xiàn)的。

胰復(fù)敏膠囊增加胰島素抵抗小鼠肌肉組織中胰島素受體β含量,推測(cè)其作用機(jī)制可能為:促進(jìn)胰島素受體β合成,激活酪氨酸激酶,催化底物蛋白上的酪氨酸殘基磷酸化;促進(jìn)胰島素與胰島素受體結(jié)合,并與細(xì)胞內(nèi)靶蛋白結(jié)合,激活糖原合成酶,磷酸化酶激酶等與糖脂蛋白有關(guān)的酶系,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝和生長(zhǎng),減輕胰島素抵抗,增加外周組織對(duì)胰島素的敏感性。

本實(shí)驗(yàn)提示胰復(fù)敏膠囊具有改善高熱量加四氧嘧啶致胰島素抵抗小鼠胰島素抵抗的作用,為中醫(yī)藥研究2型糖尿病胰島素抵抗提供了新的途徑,但其影響胰島素抵抗的確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1]李光偉,潘孝仁,Stephen,等.檢測(cè)人群胰島素敏感性的一項(xiàng)指數(shù)[J].中華內(nèi)科雜志,1992,31(1):42.

[2]楊文英,楊兆軍,李光偉,等.聯(lián)合測(cè)量腰臀圍比值(或腰圍)和血壓可預(yù)測(cè)代謝綜合征[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2005,21(3):227-229.