張麗霞

血脂升高是動(dòng)脈粥樣硬化的重要致病因素。降脂治療可顯著降低心血管疾病所致死亡和相關(guān)事件，逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生。他汀類藥物是臨床常用的降脂藥物，研究發(fā)現(xiàn)其物除降脂作用外，還具有抗炎、保護(hù)內(nèi)皮、穩(wěn)定斑塊、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用［1，2］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察阿托伐他汀鈣對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化血管內(nèi)皮的保護(hù)作用，探討其防治動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康日本大耳白兔30只，SPF級(jí)，雄性，體重(2.01±0.15)kg，兔齡4個(gè)月，由遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［許可證編號(hào):AYXK(遼2003－0011］。

1.2 試劑與儀器 內(nèi)皮素-1(ET-1)試劑盒(天津千葉生物制品有限公司)、NO試劑盒(南京建成生物工程研究所)、阿托伐他汀鈣(每片10mg，輝瑞公司生產(chǎn)，批號(hào):85837012)、膽固醇(TC，北京邦定生物制藥有限公司)、日立7170A全自動(dòng)生化分析儀、上海751型分光光度計(jì)。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組與模型制備:將30只健康日本大耳白兔，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，每組10只?？瞻讓?duì)照組:給予普通飼料喂養(yǎng);模型組:給予高脂飼料喂養(yǎng)(高脂飼料配方:1%TC+10%豬油+7.5%蛋黃粉+81.5%普通飼料);治療組:在給予高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)加用阿托伐他汀鈣5mg·kg－1·d－1。每天每只兔給予飼料限制在200 g以內(nèi)，飲水不限。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行12周。

1.3.2 血脂測(cè)定:在日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定TC、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

1.3.3 血清NO和ET-1的測(cè)定:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，空腹12 h經(jīng)兔耳中央動(dòng)脈采血5ml，3000 r/min離心后取血清測(cè)定NO和ET-1。血清NO采用硝酸還原酶法測(cè)定，血清ET-1采用放射免疫法測(cè)定。

1.3.4 病理形態(tài)學(xué)檢查:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死動(dòng)物，取主動(dòng)脈全長(zhǎng)，常規(guī)脫水、石蠟包埋后連續(xù)切片，切成4 μm的薄片，HE染色，觀察病理形態(tài)學(xué)改變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，2組間比較采用LSD檢驗(yàn)，理形態(tài)學(xué)資料采用對(duì)比描述分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組血脂水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型組、治療組兔的血清TC、TG、LDL-C水平顯著升高(P ＜0.01)，而 HDL-C濃度顯著降低(P＜0.01);與模型組比較，治療組兔血清TC、TG、LDL-C水平顯著降低(P ＜0.01)，而HDL-C水平顯著升高(P ＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1 3組血脂水平比較n=10，mmol/L，

表1 3組血脂水平比較n=10，mmol/L，

注:與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.01;與模型組比較，#P ＜0.01

2.2 3組血清NO、ET-1水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型組、治療組血清NO水平顯著降低(P＜0.01)，而ET-1水平顯著升高(P＜0.01);與模型組比較，治療組血清NO顯著升高(P ＜0.01)，而ET-1水平顯著降低(P ＜0.01)。見(jiàn)表2。

表2 3組血清NO和ET-1水平比較n=10，

表2 3組血清NO和ET-1水平比較n=10，

注:與空白組比較，*P ＜0.01;與模型組比較，#P ＜0.01

組別 NO(μmol/L) ET-1(pg/ml)空白對(duì)照組116.6 ±5.8 312.53 ±6模型組 80.8 ±3.5*463.53 ±24*治療組 95.8 ±0.8*#351.25 ±8*#

2.3 病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果 HE染色后于光鏡下觀察，可見(jiàn)空白對(duì)照組兔血管內(nèi)膜光滑完整，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊，內(nèi)皮下無(wú)泡沫細(xì)胞沉積(圖1);模型組兔血管內(nèi)膜明顯增厚并向管腔突起，形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，內(nèi)含大量泡沫細(xì)胞，中膜平滑肌細(xì)胞增生、排列紊亂，具有典型的動(dòng)脈粥樣硬化表現(xiàn)(圖2);治療組兔血管內(nèi)膜輕度增厚，有較少量泡沫細(xì)胞，中膜平滑肌細(xì)胞增生及排列紊亂不明顯(圖3)。

圖1 空白對(duì)照組血管內(nèi)膜(HE×100)

圖2 模型組血管內(nèi)膜(HE×100)

圖3 治療組血管內(nèi)膜(HE×100)

3 討論

Austin等［3］研究證實(shí)應(yīng)用他汀類藥物強(qiáng)化降脂可逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展。阿托伐他汀鈣屬于3羥基-3甲基龍二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，通過(guò)抑制TC合成的限速酶-HMG-CoA還原酶，抑制肝細(xì)胞內(nèi)TC的合成，上調(diào)肝細(xì)胞表面LDL-C受體的密度和活性，從而顯著降低血LDL-C水平。Nissen等［4］研究顯示，應(yīng)用阿托伐他汀強(qiáng)化降脂治療可阻斷冠心病患者冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變的進(jìn)展。本研究顯示:模型組兔的血清TC、TG、LDL-C水平均顯著升高(P ＜0.01)，而HDL-C水平顯著降低(P＜0.01);兔血管內(nèi)膜明顯增厚，形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，內(nèi)含大量泡沫細(xì)胞，具有典型的動(dòng)脈粥樣硬化表現(xiàn);而治療組兔血清TC、TG、LDL-C水平顯著降低(P ＜0.01)，HDL-C水平顯著升高;兔血管內(nèi)膜輕度增厚，動(dòng)脈粥樣硬化病變程度較模型組明顯減輕。表明:阿托伐他汀鈣具有強(qiáng)大的降脂作用，并能升高HDL-C水平，逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展。

在多種致病因素(血脂異常、糖尿病、高血壓等)作用下，內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)受損和功能改變，導(dǎo)致血管屏障功能的損害，使血液中的脂質(zhì)和單核細(xì)胞等更易沉積在內(nèi)皮下間隙，進(jìn)一步形成泡沫細(xì)胞，并促使血管平滑肌細(xì)胞增殖，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化病變的形成。因此，改善血管內(nèi)皮功能已成為防治動(dòng)脈粥樣硬化的重要措施。NO是內(nèi)皮細(xì)胞合成的一種重要的血管活性物質(zhì)，具有舒張血管，抑制血小板聚集、白細(xì)胞黏附及平滑肌增殖，減弱氧自由基產(chǎn)生、低密度脂蛋白氧化等抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。ET也是由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，是目前已知的最強(qiáng)的血管收縮劑。內(nèi)皮功能障礙導(dǎo)致NO降低、ET增加，在動(dòng)脈粥樣硬化病理進(jìn)程中起重要作用［5］。研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物通過(guò)多種途徑激活NOS，促進(jìn)NO合成［6］，改善血管內(nèi)皮功能本研究顯示:模型組兔的血清NO濃度顯著降低，而ET-1水平顯著升高;兔血管內(nèi)膜明顯增厚，形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，具有典型的動(dòng)脈粥樣硬化表現(xiàn);表明伴隨血脂升高血管內(nèi)皮功能受損促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化的形成;而治療組兔血清NO濃度顯著升高，ET-1濃度顯著降低，兔血管內(nèi)膜輕度增厚，動(dòng)脈粥樣硬化病變程度較模型組明顯減輕。

綜上所述，阿托伐他汀鈣除具有強(qiáng)大的降脂作用外，還通過(guò)升高NO濃度降低ET-1濃度，改善血管內(nèi)皮功能發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用［7］。

1 龔志剛，蘇東東，丁世芳，等.辛伐他汀對(duì)柯薩奇B3病毒感染小鼠心肌早期的保護(hù)作用.心臟雜志，2006，18:149-151，158.

2 張曉捷，孫宗全，杜心靈.洛伐他汀預(yù)處理的延遲性心肌保護(hù)作用及其機(jī)制.心臟雜志，2006，18:50-53.

3 Austin PC，Mamdani MM.Impact of the pravastatin or atorvastatin evaluation and infection therapy－thrombolysis in myocardial infarction 22/Reversal of Atherosclerosis with Aggressive Lipid Lowering trials on trends in intensive versus moderate statin therapy in Ontario.Canada Circulation，2005，112:1296-1300.

4 Nissen SE，Tuzcu EM，Schoenhagen P，et al.Effect of intensive compared with moderate lipid－lowering therapy on progression of coronary atherosclerosis:a randomized controlled trial.JAMA，2004，291:1071-1080.

5 Desjardins F，Balligand JL.Nitric oxide－ dependent endothelial function and cardiovascular disease.Acta Clin Belg，2006，61:326-334.

6 Yamanouchi D，Banno H，Nakayama M，et al.Hydrophilic statin suppresses vein graft intimal hyperplasia via endothelial cell－tropic Rho－kinase inhibition.J Vasc Surg，2005，42:757-764.

7 王順光，趙紅寧.阿托伐他汀鈣對(duì)短暫性腦缺血發(fā)作患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊和血脂的影響.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2008，11:2175-2176.