張 宏，盧婷利，趙 雯，陳 濤，2

(1.西北工業(yè)大學(xué)生命學(xué)院 空間生物實(shí)驗(yàn)?zāi)M技術(shù)國防重點(diǎn)學(xué)科實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安 710072； 2.陜西脂質(zhì)體工程技術(shù)研究中心，陜西 西安 710075)

磁性脂質(zhì)體(Magnetic liposome)是磁導(dǎo)向藥物遞送系統(tǒng)中的一種新型藥物導(dǎo)向載體，是將磁性粒子結(jié)合在載藥脂質(zhì)體中，當(dāng)其進(jìn)入體內(nèi)后，利用體外磁場的作用引導(dǎo)其在體內(nèi)定向移動，集中到靶部位后釋放藥物，從而避免藥物對正常組織的傷害，使其靶向性和專一性更強(qiáng)，達(dá)到快速、高效、低毒的效果[1，2]。目前磁性脂質(zhì)體多用于腫瘤治療，除可以實(shí)現(xiàn)低毒、靶向、緩釋外，在外加交變磁場的作用下，利用磁性粒子發(fā)熱進(jìn)行熱療，使腫瘤組織細(xì)胞升溫至42～47℃，進(jìn)一步消滅腫瘤細(xì)胞[3～5]。

乙醇和氯仿是制備磁性脂質(zhì)體中溶解脂質(zhì)膜材經(jīng)常使用的有機(jī)溶劑，若不除去會嚴(yán)重影響磁性脂質(zhì)體的使用安全性，因此應(yīng)保證乙醇和氯仿在磁性脂質(zhì)體中的殘留量低于規(guī)定的0.5%和0.006%[6]。磁性脂質(zhì)體制備過程中一般采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、真空干燥、抽真空等方法來除去有機(jī)溶劑[2，7，8]。脂質(zhì)體中乙醇和氯仿殘留量的氣相色譜檢測法已有報(bào)道[9，10]，均采用外標(biāo)法，雖然操作簡單、方便，但是受儀器和操作的影響誤差較大，且不能同時(shí)檢測兩種殘留物。

作者在此采用內(nèi)標(biāo)法同時(shí)、定量測定磁性脂質(zhì)體中乙醇和氯仿殘留量，結(jié)果令人滿意。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試劑與儀器

磁性脂質(zhì)體，自制；無水乙醇、二甲基甲酰胺(DMF)、三氯甲烷，色譜純；二氯甲烷，分析純。

Agilent 6890型氣相色譜儀，美國Agilent公司；氫火焰離子化檢測器(FID)，高純氫氣(99.99%)，高純氮?dú)?99.99%)，鋼瓶空氣；磁分離架，吉林藍(lán)罡生物科技有限公司。

1.2 溶液的配制

(1)內(nèi)標(biāo)儲備液的配制

精密稱取二氯甲烷0.1271 g，置于500 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，即為內(nèi)標(biāo)儲備液。

(2)對照品溶液的配制

精密稱取乙醇3.7371 g、氯仿0.2952 g，分別置于500 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，搖勻，即為對照品儲備液。分別取上述對照品儲備液1 mL和內(nèi)標(biāo)儲備液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

(3)樣品溶液的制備

量取磁性脂質(zhì)體1 mL，加入2 mLDMF破乳，用磁分離架將磁性粒子分離，量取1 mL澄清液于10 mL容量瓶中，加入1 mL內(nèi)標(biāo)儲備液，加DMF定容至刻度，搖勻，即得磁性脂質(zhì)體樣品溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-5型毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm，0.5 μm)；檢測器為FID；載氣為氮?dú)?；分流比?0∶1；柱流量為15 cm·s-1，恒流；進(jìn)樣量為1.0 μL；進(jìn)樣口溫度為170℃；檢測器溫度為250℃。色譜柱程序升溫方法為：35℃保持2 min；25℃· min-1升溫到90℃，保持5 min；60℃· min-1升溫到200℃，保持5 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 保留時(shí)間和檢測限的確定

量取對照品溶液1 mL，按色譜條件進(jìn)樣檢測，色譜圖如圖1所示。

1.乙醇 2. 二氯甲烷 3.氯仿 4.DMF

由圖1可以看出，乙醇、二氯甲烷、氯仿和DMF的分離度良好，保留時(shí)間分別為2.688 min、3.060 min、3.456 min和4.876 min。

通過逐級降低濃度，進(jìn)樣測定，確定檢測限，信噪比為3∶1。結(jié)果表明，乙醇、二氯甲烷和氯仿的最低檢測濃度分別為0.10 μg·mL-1、0.07 μg·mL-1和0.05 μg·mL-1。

2.2 線性關(guān)系考察

分別精密量取對照品儲備液100 μL、200 μL、400 μL、600 μL、800 μL、1000 μL、1500 μL，置于10 mL容量瓶中，每個(gè)容量瓶中分別加入1 mL內(nèi)標(biāo)儲備液，用DMF定容至刻度，分別進(jìn)樣1.0 μL，記錄色譜圖，并測定峰面積。結(jié)果表明，在所測濃度范圍內(nèi)，乙醇(7.47～112.11 μg·mL-1)和氯仿(0.59～8.85 μg·mL-1)的濃度與峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積具有良好的線性關(guān)系，回歸方程如下：

乙醇：y=1.2162c-0.10513R=0.9996(n=7)

氯仿：y=0.6739c-0.1003R=0.9997(n=7)

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為1.0 μL，測得乙醇與氯仿和二氯甲烷的峰面積比的RSD分別為0.96%、1.33%，表明方法精密度良好。

2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收率測定方法，按高、中、低濃度分別精密量取一定量的對照品儲備液加入到已知氯仿殘留量的1 mL磁性脂質(zhì)體中，按“樣品溶液的制備”方法處理，分別進(jìn)樣3次，結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

由表1可知，乙醇和氯仿的平均回收率分別為98.2%和97.3%，RSD≤3.0%(n=9)，表明方法準(zhǔn)確可靠。

2.5 樣品測定

精密吸取3個(gè)不同批次(100515，100521，100601)的磁性脂質(zhì)體樣品，得到3個(gè)脂質(zhì)體樣品溶液，每個(gè)樣品測3次，進(jìn)樣量1.0 μL，測定峰面積，根據(jù)回歸方程計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果/%

由表2可知，該方法可以準(zhǔn)確測定磁性脂質(zhì)體中乙醇和氯仿的殘留量，并且所測樣品的殘留量符合相關(guān)規(guī)定要求。

2.6 討論

2.6.1 溶劑選擇

由于進(jìn)樣前需要將阿霉素磁性脂質(zhì)體中的磁性粒子分離，所以選擇有機(jī)試劑作為溶劑將脂質(zhì)體破乳。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，乙醚、甲苯等低沸點(diǎn)溶劑均不能很好地將樣品破乳，而二甲基甲酰胺沸點(diǎn)較高，采用頂空進(jìn)樣法操作不便。因此，本實(shí)驗(yàn)采用直接進(jìn)樣法同時(shí)檢測乙醇和氯仿的殘留量。

2.6.2 色譜柱的選擇

比較了乙醇、氯仿和二甲基甲酰胺在不同色譜柱(HP-5、HP-INNOWAX和DB-1701)下的分離度。結(jié)果表明，采用HP-5的分離度最高。

2.6.3 內(nèi)標(biāo)物的選擇

由于磁性脂質(zhì)體在制備過程中經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和抽真空，乙醇和氯仿的殘留量都較少，因此本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法定量以減少儀器和操作帶來的誤差。經(jīng)過對多種有機(jī)試劑進(jìn)行篩選，其中二氯甲烷、乙醇、氯仿、二甲基甲酰胺的分離度均良好，最終選擇二氯甲烷作為內(nèi)標(biāo)物。

3 結(jié)論

建立了氣相色譜法(內(nèi)標(biāo)法)檢測磁性脂質(zhì)體中有機(jī)溶劑殘留量的方法，乙醇和氯仿在所測范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R>0.9995，n=7)，回收率高，重復(fù)性好。該法簡單、快捷、精密可靠，適于磁性脂質(zhì)體中乙醇和氯仿有機(jī)溶劑殘留量的定量檢測。

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