周曉霞

杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院制劑室 杭州 310003

祛痘合劑為我院臨床常用制劑,具有清熱利濕解毒等功效,治療濕熱內(nèi)壅及腸胃濕熱型痤瘡療效顯著。筆者對(duì)其制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

S22PC型可見分光光度計(jì)(上海棱光技術(shù)有限公司),BS110S電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司),80-2離心沉淀器(上海手術(shù)器械廠)。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):100080-20030)。乙醇、亞硝酸鈉、氯化鋁、氫氧化鈉等均為分析純。祛痘合劑(由我院制劑室提供,批號(hào):061031、070306、070402)。

2 方法與結(jié)果

2.1 處 方 黃芩、龍膽草、梔子、柴胡、地黃、車前子、澤瀉、當(dāng)歸、黃連、枇杷葉、大黃(制)、生石膏等。

2.2 制備工藝 取生石膏先煎 2次,時(shí)間分別為 1小時(shí)和 0.5小時(shí),過濾,得濾液備用。取柴胡和當(dāng)歸提取芳香水 200ml,藥渣與余藥合并煎煮 2次,時(shí)間分別為 1小時(shí)和 0.5小時(shí),合并煎濾液,靜置過夜,上清液濃縮至比重不小于 1.01(20℃),用 85℃藥液溶解尼泊金乙酯,放冷,加入芳香水,加入石膏濾液,調(diào)整至全量 1000ml,靜置過夜,過濾,經(jīng)半成品檢驗(yàn)合格后,灌裝,105℃熱壓滅菌 1小時(shí)即得。

2.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

2.3.1 性 狀 本品為棕色液體,久置有少許沉淀,味苦。

2.3.2 鑒 別 取本品 10ml,加硅藻土 2g,拌勻,水浴蒸干,殘?jiān)蛹状?10ml超聲提取 10min,濾過,濾液作為供試品液。另取黃芩苷,加甲醇制成 1mg/ml的溶液作為對(duì)照品。同法制作缺黃芩的陰性對(duì)照液。參照薄層色譜試驗(yàn)[1],吸取上述三種溶液各2μl,分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸為展開劑,展開,取出,晾干。置紫外燈 365nm下檢視,供試品色譜中,應(yīng)與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),而陰性對(duì)照液則無,見圖 1。

圖1 祛豆合劑薄層鑒別

2.4 總黃酮含量測(cè)定

2.4.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取 105℃干燥恒重的蘆丁對(duì)照品 13.0mg,加 50%乙醇置 25ml量瓶定容,得濃度為 0.26mg/ml的對(duì)照品溶液備用。

2.4.2 供試品溶液制備 精密吸取 1.0ml樣品溶液于 10ml容量瓶中,用 95%乙醇稀釋到刻度,渦旋混勻,轉(zhuǎn)移至離心管中 4000r/min離心 5min,精吸上清液 1ml于 25ml容量瓶中,加 50%乙醇至刻度,作為供試品溶液,備用。

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 精密吸取對(duì)照品溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分別置于 25ml容量瓶中,加 50%乙醇至 6min,各加入 1.0ml的 5%NaNO2,搖勻,放置 6min,加入 1.0ml10%Al(NO3),搖勻,放置 6min后加 10%NaOH10.0ml,加 50%乙醇稀釋至 25ml,混勻,靜置 15min,于 510nm處比色測(cè)定,以相應(yīng)試劑為空白[2]。以濃度對(duì)吸光度繪制工作曲線,得回歸方程 C=3.0469A-0.008(r=0.9997),結(jié)果表明,在 0.13～1.30mg/ml范圍內(nèi)吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液 1ml,按“2.4.3”操作,重復(fù) 5次測(cè)定,RSD=0.18%,表示本法有較好的精密度。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 依照供試品溶液處理方法對(duì)同一批樣品 (批號(hào):061031)按“2.4.3”操作,重復(fù)測(cè)定 5次,結(jié)果表明,RSD=2.52%,重復(fù)性良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液,按“2.4.3”項(xiàng)下法每隔 5min測(cè)定吸光度,結(jié)果表明吸光度在顯色完全后 60min內(nèi)穩(wěn)定,RSD=2.66%。

2.4.7 回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取已知含量(批號(hào):061031)供試品溶液 1.0ml5份,分別精密加入對(duì)照品溶液適量,按“2.4.3”項(xiàng)操作,測(cè)定吸光度并計(jì)算,結(jié)果見表 1。

表1 回收試驗(yàn)結(jié)果

2.4.8 祛痘合劑總黃酮含量測(cè)定 精密吸取供試品溶液 1.0ml,按“2.4.3”項(xiàng)操作,于 510nm處測(cè)定吸光度,由回歸方程計(jì)算總黃酮含量。測(cè)定結(jié)果見表2。

2.5 與質(zhì)量有關(guān)的項(xiàng)目測(cè)定 相對(duì)密度、pH值等按中國(guó)藥典 2005版附錄 VIIA、VIID[1]檢測(cè),結(jié)果見表 2。

表2 祛痘合劑總黃酮含量測(cè)定結(jié)果(n=5)

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)制劑為中藥復(fù)方制劑,且主要通過水煎提取制備而成,成分復(fù)雜,故對(duì)供試品溶液需進(jìn)行前處理。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)采用 95%乙醇沉淀離心時(shí),雜質(zhì)干擾較小,所得樣品總黃酮含量回收率較高,重現(xiàn)性好,方法簡(jiǎn)便,可作為該制劑定量測(cè)定用。初步制訂該制劑總黃酮含量≥3mg/ml。由于祛痘合劑藥味較多,成分復(fù)雜,本文僅對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了初步研究,至于其他成分的質(zhì)控研究正在進(jìn)行中。

本文僅對(duì)祛痘合劑中君藥黃芩進(jìn)行了定性鑒別,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用甲苯 -乙酸乙酯 -甲醇 -甲酸展開劑時(shí),干擾嚴(yán)重;而采用醋酸為展開劑,分離效果佳,斑點(diǎn)圓整,無拖尾現(xiàn)象,可作為制劑黃芩藥材定性鑒別用。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.附錄 18、28.

[2] 馬鶯,王靜,牛天嬌,等.功能性食品活性成分測(cè)定[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.253.