趙宏偉，趙玉珍

（1.陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046； 2.陜西省食品藥品檢驗所，陜西 西安 710061）

金蓮花對革蘭陽性球菌及陰性桿菌都有抑制作用，對綠膿桿菌的抗菌作用尤為明顯，臨床用于治療扁桃體炎、咽炎，對泌尿系感染等亦有一定療效。金蓮花是難得的純天然植物抑菌良藥，抗菌譜廣，無耐藥性，高效安全，尤其適合于兒童用藥[1]。本試驗采用雞胚培養(yǎng)流感病毒，并用雞紅血球凝集試驗檢測藥物對病毒在雞胚尿囊液中增殖的抑制作用[2-4]，研究了金蓮花醇提物抗甲型流感病毒作用，報道如下。

1 材料

試驗藥物：受試藥物金蓮花醇提物（含生藥0.4 g/mL）。陽性對照藥物雙黃連注射醇提物（哈爾濱藥業(yè)集團中藥二廠，600 mg/瓶，批號為02111220），棕色凍干粉劑，試驗用藥質(zhì)量濃度為100 g/L；陽性對照藥物病毒唑（華北秦皇島制藥有限公司），試驗用藥質(zhì)量濃度為0.25 g/L。

病毒：流感病毒甲型PR8株購自中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所，由本實驗室傳代保存，病毒血凝滴度為1∶640，試驗中使用流感病毒（PR8株）的濃度為80個血凝單位。

雞胚：取9～10日齡雞胚的胚蛋（西安華秦肉雞公司），檢查雞胚生長良好。

雞紅細胞：采取健康的公雞血，以生理鹽水洗滌3次，配成0.5%雞紅細胞懸液，用于檢測流感病毒滴度的血凝試驗。

2 方法與結(jié)果

2.1 雞胚生長發(fā)育影響試驗

常規(guī)選擇生長良好的雞胚，將金蓮花醇提物原液 （含生藥400 g/L）進行 2倍連續(xù)稀釋到 1∶64（400～12.5 g/L），將不同質(zhì)量濃度的藥液分別接種到9日齡生長良好的雞胚尿囊腔中，每胚0.2 mL，每一稀釋度9個雞胚，36.5℃孵育，逐日觀察，以雞胚生長發(fā)育良好、72 h雞胚仍然存活的質(zhì)量濃度為最大無毒濃度。逐日觀察雞胚接種后的活動、發(fā)育情況和雞胚體有無充血，判斷藥物對雞胚的毒性作用。同時設(shè)生理鹽水對照、正常雞胚對照。在接種金蓮花醇提物藥液后，24 h內(nèi)雞胚死亡為非特異性死亡。結(jié)果72 h后雞胚發(fā)育正常，胚體無明顯出血；除接種藥物原液 （含生藥400 g/L時雞胚發(fā)育較小外，接種試驗藥物原液和藥物的各個稀釋質(zhì)量濃度時雞胚均未見死亡，也未見明顯毒性作用。結(jié)果表明金蓮花醇提物藥液對雞胚的最大無毒濃度為200 g/L。

2.2 雞胚流感病毒增殖抑制作用試驗

試驗采用流感病毒甲型PR8株 （80個血凝單位），藥物濃質(zhì)量度為200～12.5 g/L（2倍連續(xù)稀釋）。分為兩個試驗組，A組采用病毒與藥物等量混合，室溫下直接作用2小時后，再共同接種雞胚；B組采用病毒和藥物分別接種，先接種病毒4 h后，再接種不同質(zhì)量濃度的藥物。每個雞胚的尿囊腔中接種0.2 mL病毒液，每一濃度接種9個雞胚。同時設(shè)病毒對照、陽性藥物對照和正常對照組。在35℃孵育72 h，收獲雞胚的尿囊液，測定病毒的血凝滴度，以“++”的血凝狀態(tài)為血凝效價的終點，并計算其幾何平均滴度（GMT），同時觀察雞胚發(fā)育情況。試驗重復(fù)2次，對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果接種受試藥物72 h后，病毒對照組胚體發(fā)育偏小、有片狀出血；陽性藥物對照組與正常對照組的雞胚大小基本一致，無明顯充血。試驗結(jié)果見表1?？梢夾組中，將病毒與受試藥物等量混合作用2 h后再感染雞胚，金蓮花醇提物質(zhì)量濃度為25～200 g/L時對流感病毒甲型PR8株有直接殺滅作用（P＜0.05）；B組中，先接種病毒后加藥物，金蓮花醇提物質(zhì)量濃度為25～400 g/L時對流感病毒甲型PR8株在雞胚內(nèi)的增殖有抑制作用（P ＜ 0.05）。

表1 金蓮花醇提物對流感PR8株抑制作用測定結(jié)果

3 討論

金蓮花屬植物主要成分為生物堿、黃酮類，多具有消炎、抗病毒等作用，對多種細菌有抑制作用[1]。本試驗結(jié)果表明：金蓮花醇提物在體外對流感病毒甲型PR8株有直接殺滅作用，對流感病毒甲型PR8株在雞胚內(nèi)的增殖有抑制作用。這與其主要成分的抗菌作用有關(guān)，其抑菌作用機理有待進一步研究。

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