陳 梅，鄭 永，魏 來，鄒品文

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400010）

磷酸苯丙哌林緩釋膠囊為非麻醉性鎮(zhèn)咳藥，其鎮(zhèn)咳作用是可待因的2～4倍，具有起效快、不抑制呼吸、維持時間長、毒副作用小等特點(diǎn)，主要用于治療急性支氣管炎及各種原因引起的咳嗽，對刺激性干咳效果最佳。經(jīng)國家藥品食品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)（批準(zhǔn)文號為2005L02961），受西南藥業(yè)股份有限公司委托，我院臨床藥理基地實(shí)施了該公司研制的磷酸苯丙哌林緩釋膠囊的人體生物等效性試驗(yàn)，以驗(yàn)證其生物等效性?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，包括Waters 1525泵、Waters 2487紫外可變波長檢測器、Waters Breeze工作站；WHX微型渦旋混合器（上海躍進(jìn)機(jī)械廠）；KL512J型氮吹儀（北京康林科技有限責(zé)任公司）。試驗(yàn)藥物為西南藥業(yè)股份有限公司研制的磷酸苯丙哌林緩釋膠囊（40 mg/粒，批號為20050901）；參比藥物為湖北中佳藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的磷酸苯丙哌林緩釋片（40 mg/片，批號為050101）；乙腈（天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，色譜純）；正庚烷（蘇州工業(yè)園區(qū)正興化工研究院），三乙胺及異丙醇（重慶川東化工〈集團(tuán)〉有限公司化學(xué)試劑廠），磷酸二氫鉀（重慶化學(xué)試劑廠），均為分析純；磷酸苯丙哌林標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號為0237-9701）。

2 方法與結(jié)果

2.1 受試者選擇

選擇18名男性健康志愿受試者，漢族，平均年齡（21.1±1.0）歲，平均身高（173.1±5.6）cm，平均體重（65.2 ±6.7）kg。試驗(yàn)前所有受試者經(jīng)肝功能、腎功能、血壓、心電圖等檢查均正常，受試前2周未用一切藥物，受試期間禁煙、酒、茶、咖啡和劇烈體力活動；受試前均簽署知情同意書并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會討論通過。

2.2 溶液配制

精密稱取干燥至恒重的磷酸苯丙哌林標(biāo)準(zhǔn)品7.8 mg，用適量甲醇溶解，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即為312.0 μg/mL的磷酸苯丙哌林標(biāo)準(zhǔn)貯備液；精密稱取干燥至恒重的安定標(biāo)準(zhǔn)品2.1 mg，用適量甲醇溶解，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即為42.0 μg/mL的安定內(nèi)標(biāo)貯備液。

2.3 給藥方法及生物樣本采集

將18名受試者隨機(jī)分為2組，每組9名，禁食12 h后，于次日晨空腹口服80 mg磷酸苯丙哌林受試藥物或參比藥物，均用200 mL溫開水服下。于給藥前及給藥后 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0，24.0，36.0，48.0 h 時抽取前臂靜脈血 3 mL，5 000 r/min離心5 min后分離血漿，將血漿樣本于低溫（-20℃）保存，待測。間隔2周后交換服用另一種藥物，再按上法采集、分離、保存血漿樣本。

2.4 血藥濃度測定

2.4.1 色譜條件及色譜行為

色譜柱：Phenomenex? Gemini C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm），固定進(jìn)樣環(huán)20 μL；流動相：乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀-5%磷酸 - 三乙胺（125 ∶175 ∶10 ∶0.1）[1-3]；流速：1.0 mL/min；紫外檢測波長：210 nm；柱溫：25℃。在擬訂的色譜條件下，色譜圖見圖1。可見苯丙哌林、安定與血中內(nèi)源性雜峰分離良好，峰形尖銳，雜質(zhì)和代謝物不干擾藥物的測定。

2.4.2 樣品處理

精密吸取受試者血漿1.0 mL，精密加入質(zhì)量濃度為4.2 μg/mL的安定內(nèi)標(biāo)液 50 μL，加入 2 mol/L 的 NaOH 0.2 mL，旋搖 30 s，再加入3 mL提取液[正庚烷 -異丙醇（95∶5），V/V]，渦旋震蕩1 min，5 000 r/min離心1 min，吸取上層有機(jī)層，置尖底試管，70℃水浴氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?0 μL流動相復(fù)溶，取復(fù)溶液20 μL進(jìn)樣。

2.4.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：在空白血漿中加入質(zhì)量濃度為31.2 μg/mL的苯丙哌林標(biāo)準(zhǔn)溶液，使血藥濃度分別為461.08，230.54，115.27，57.64，28.82，14.41 ng/mL，按 2.4.2 項(xiàng)下操作測定，記錄色譜圖、樣品峰面積。以苯丙哌林峰面積 A1與安定內(nèi)標(biāo)峰面積 A2的比值 I對苯丙哌林血藥濃度 C進(jìn)行回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 C=10.883+323.551I，r=0.997 2（n=6），線性范圍為 461.08～14.41 ng/mL ，最低檢測質(zhì)量濃度為7.71 ng/mL。

回收率試驗(yàn)：在空白血漿中加入質(zhì)量濃度為31.2 μg/mL的苯丙哌林標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制高、中、低質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)血樣，使血樣的苯丙哌林質(zhì)量濃度分別為461.08，115.27，14.41 ng/mL。按2.4.2項(xiàng)下操作測定，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出血樣中苯丙哌林的藥物質(zhì)量濃度，將求得的質(zhì)量濃度與已知血藥濃度相比，計(jì)算方法回收率，連續(xù)測定5次。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

精密度試驗(yàn)：取回收率試驗(yàn)項(xiàng)下高、中、低質(zhì)量濃度的3種溶液，按2.4.2項(xiàng)下操作測定，日內(nèi)測定5次，并連續(xù)測定5 d。結(jié)果高（461.08 ng/mL）、中（115.27 ng/mL）、低（14.41 ng/mL）質(zhì)量濃度的日內(nèi)精密度 RSD分別為6.47%，4.89%，6.07%（n=5），日間精密度 RSD分別為7.93%，8.36%，3.06%（n=5）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：將質(zhì)量濃度為115.27 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)血樣于常溫放置8 h，按2.4.2項(xiàng)下操作測定，結(jié)果0，8 h時的血藥濃度分別為（119.67±18.21）ng/mL 和（117.77±8.89）ng/mL。將質(zhì)量濃度為115.27 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)血樣放置于-20℃冰箱中保存，于0，7，14 d時取出血樣，常溫下融凍后，依法測定血藥濃度，血樣測定完后放回冰箱保存，下次融凍再測濃度，結(jié)果7 d和14 d時的血藥濃度分別為（121.98±13.26）ng/mL 和（116.47±10.92）ng/mL。以上結(jié)果表明，血樣在常溫下放置8 h、-20℃冰箱保存14 d均穩(wěn)定。

2.5 藥-時數(shù)據(jù)及藥代動力學(xué)參數(shù)

18名健康男性受試者交叉服用80 mg的苯丙哌林受試藥物及參比藥物后，每位受試者的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)采用微機(jī)3P97程序自動擬合，參考實(shí)測值與理論值的相關(guān)系數(shù)（R2）、最大絕對誤差和相對誤差、曲線擬合優(yōu)度及 AIC等指標(biāo)選擇模型。結(jié)果表明，口服苯丙哌林緩釋片或膠囊后，藥-時數(shù)據(jù)符合一室藥代動力學(xué)模型，平均血藥濃度藥 -時曲線見圖2，有關(guān)藥代動力學(xué)參數(shù)及生物利用度見表2。

表2 樣品人體藥代動力學(xué)參數(shù)（X ± s，n=18）

2.6 生物等效性分析

AUC0-48未經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果顯示，兩藥間無顯著性差異（ P ＞ 0.05），雙單側(cè) t檢驗(yàn)結(jié)果，t1=2.826≥ t1α=1.746，t2=3.363≥t1α=1.746（等效），90% 置信區(qū)間為 87.0% ～ 109.5% ；經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果顯示，兩藥間無顯著性差異（P＞0.05），雙單側(cè) t檢驗(yàn)結(jié)果，t1=3.159，t2=3.897（等效），90%置信區(qū)間為87.5%～109.1%。Cmax未經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果顯示，兩藥間無顯著性差異（P＞0.05），雙單側(cè) t檢驗(yàn)結(jié)果，t1=9.500，t2=13.631（等效），90%置信區(qū)間為93.5% ～104.0%；經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果顯示，兩藥間無顯著性差異（ P＞0.05）；雙單側(cè) t檢驗(yàn)結(jié)果，t1=9.449，t2=9.594（等效），90%置信區(qū)間為 93.5% ～106.5%。對實(shí)測的受試藥物與參比藥物的 Tmax用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)Wilcoxo法進(jìn)行檢驗(yàn)，兩藥間無顯著性差異。

3 討論

采用高效液相色譜法測定人體血漿中苯丙哌林質(zhì)量濃度，方法簡便、靈敏、可靠，能夠滿足磷酸苯丙哌林緩釋膠囊人體藥代動力學(xué)和生物利用度研究需要。通過對兩種緩釋制劑的主要藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，顯示兩制劑間無顯著性差異，兩種制劑生物利用度相當(dāng)，即兩制劑生物等效。

[1]楊秀娟，楊秀云.高效液相色譜法測定磷酸苯丙哌林片的含量[J].色譜，2000，11（6）：566-567.

[2]王本杰，郭瑞臣，李朝武，等.磷酸苯丙哌林緩釋片人體生物利用度試驗(yàn)[J]. 中國藥房，2001，11（12）：671-673.

[3]杜宗敏，張逸凡，鐘大放，等.磷酸苯丙哌林人體藥代動力學(xué)及其制劑的相對生物利用度研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2000，16（5）：209-213.