張 巍，艾中偉，鄭立紅，陳 萍，王 玉

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理中心，黑龍江齊齊哈爾 161006）

子宮腺肌病（adenomyosis，AM）嚴(yán)重影響婦女的身心健康，發(fā)病率逐年上升而發(fā)病機制尚不清楚，因而備受關(guān)注。近年來，關(guān)于子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EM）的研究取得很大進(jìn)展，但對子宮腺肌病的深入研究卻較少。本研究應(yīng)用免疫組化SP法檢測子宮腺肌病中凋亡調(diào)節(jié)蛋白Bax及轉(zhuǎn)錄因子E2F-1的表達(dá)情況，以探討其與子宮腺肌病發(fā)生及發(fā)展的相關(guān)性，為尋找該病的病因及臨床防治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院各附屬醫(yī)院2006～2008年因患子宮腺肌病而行手術(shù)治療的術(shù)后切除標(biāo)本72例為研究組，取其異位子宮內(nèi)膜及原位內(nèi)膜，其中，增生期39例，分泌期33例；對照組正常子宮內(nèi)膜取自因非子宮內(nèi)膜疾?。ㄗ訉m肌瘤等良性病變）而切除子宮的內(nèi)膜標(biāo)本55例，其中，增生期31例，分泌期24例。所有患者平均年齡（43.5±4.7）歲，月經(jīng)周期25～41 d。兩組患者術(shù)前均無性激素治療等特殊病史，孕產(chǎn)次、月經(jīng)周期等差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，標(biāo)本內(nèi)膜分期及診斷依據(jù)月經(jīng)周期時間結(jié)合HE染色組織切片后的病理診斷為準(zhǔn)。

1.2 試劑與方法

所有標(biāo)本行常規(guī)石蠟包埋后4 μm厚連續(xù)切片4張，1張行HE染色，其他做免疫組化染色（SP法）。E2F-1鼠抗人單克隆抗體購自美國Neo Markers公司。Bax單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)公司。設(shè)陰性及陽性對照，其他按說明書常規(guī)操作。

1.3 結(jié)果判定

免疫組化染色反應(yīng)為黃至棕黃色顆粒，Bax的陽性表達(dá)產(chǎn)物為細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)黃色或棕黃色顆粒，E2F-1的陽性表達(dá)產(chǎn)物為細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒。細(xì)胞數(shù)>10%為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用χ2檢驗，經(jīng)SPSS 12.0分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Bax的表達(dá)

在子宮腺肌病組織中，其原位子宮內(nèi)膜和異位子宮內(nèi)膜中Bax蛋白的表達(dá)明顯增加，與正常子宮內(nèi)膜組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。子宮腺肌病組織中Bax表達(dá)在增生期和分泌期差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），Bax在原位與異位內(nèi)膜組間表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

表1 子宮腺肌病組織和正常子宮內(nèi)膜組織中Bax的表達(dá)[n(%)]Tab.1 The expression of Bax in endometrium of adenomyosis and normal endometrium[n(%)]

2.2 E2F-1的表達(dá)

轉(zhuǎn)錄因子E2F-1在子宮腺肌病組織中的表達(dá)明顯增加，且其表達(dá)與正常子宮內(nèi)膜組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。子宮腺肌病組織中E2F-1表達(dá)在增生期與分泌期差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），E2F-1在原位與異位內(nèi)膜組間的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。在子宮腺肌病患者組織中Bax、E2F-1的表達(dá)具有一定的正相關(guān)性（表2）。

表2 子宮腺肌病組織和正常子宮內(nèi)膜組織中E2F-1的表達(dá)[n(%)]Tab.2 The expression of E2F-1 in endometrium of adenomyosis and normal endometrium[n(%)]

3 討論

細(xì)胞凋亡（apoptosis，APO）是一種由基因調(diào)控的細(xì)胞自身程序性死亡，在生物體的正常生理活動和病理過程中都有十分重要的意義。當(dāng)細(xì)胞凋亡調(diào)控程序紊亂時就會引發(fā)疾病，但近年研究熱點都在惡性腫瘤上[1-2]，子宮腺肌病雖為良性病變，但其異位內(nèi)膜腺體及間質(zhì)侵及子宮肌層，其生物學(xué)行為與惡性腫瘤有相似之處，以此推斷其發(fā)病機制可能與凋亡相關(guān)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者內(nèi)膜細(xì)胞與正常人內(nèi)膜細(xì)胞凋亡率差異顯著，細(xì)胞凋亡異常可能是子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生及發(fā)展的重要原因之一[3-4]。

凋亡調(diào)節(jié)蛋白Bax于1993年被發(fā)現(xiàn)，作為Bcl-2的對抗劑。bcl-2基因是近年來發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞凋亡控制基因，通過控制細(xì)胞凋亡而延長細(xì)胞的壽命[5]。在正常子宮內(nèi)膜中Bcl-2表達(dá)呈周期性變化，增生期強于分泌期，分泌期強于月經(jīng)期，但在子宮腺肌病病灶中，Bcl-2持續(xù)表達(dá)而無周期性變化[6]。與其相似，Bax可促進(jìn)細(xì)胞死亡，被稱為“凋亡促進(jìn)基因”，可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡而縮短細(xì)胞壽命。本研究顯示，在正常子宮內(nèi)膜中Bax表達(dá)呈明顯周期性變化，且增生期高于分泌期；在子宮腺肌病組織中Bax蛋白的表達(dá)顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織，且持續(xù)表達(dá)而無周期性變化（正常子宮內(nèi)膜Bax表達(dá)低于子宮腺肌病的異位內(nèi)膜Bax表達(dá)）。以此推斷子宮腺肌病的發(fā)病機制可能與Bax的表達(dá)增加、內(nèi)膜細(xì)胞對凋亡敏感性下降有關(guān)。這為研究子宮腺肌病的發(fā)病機制和尋找防治對策提供了新的理論依據(jù)。

E2F-1蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，對細(xì)胞周期限制點起直接調(diào)控作用，是細(xì)胞周期中G1期向S期過渡的重要調(diào)控因子[7-8]。E2F-1的表達(dá)可縮短細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期的時間，使細(xì)胞周期失調(diào)，引發(fā)細(xì)胞過度增殖。研究顯示，E2F-1既可作為癌基因又能作為抑癌基因起作用，推測與細(xì)胞所處環(huán)境不同及器官特異性有關(guān)[9-12]。本研究表明，E2F-1的表達(dá)在子宮腺肌病組織中明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，說明E2F-1蛋白的高表達(dá)可促進(jìn)異位內(nèi)膜過度增殖，可使異位內(nèi)膜細(xì)胞具有更強的分裂增殖及浸潤能力，與子宮腺肌病的發(fā)生呈正相關(guān)。

綜上所述，Bax、E2F-1的表達(dá)與子宮腺肌病的發(fā)生密切相關(guān)。子宮內(nèi)膜細(xì)胞自發(fā)性凋亡是其保持正常結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵，而凋亡異常是子宮腺肌病發(fā)生的重要因素。因此，推測E2F-1表達(dá)增高，同時Bcl-2也增高，兩者發(fā)揮協(xié)同作用誘發(fā)子宮腺肌病。研究細(xì)胞凋亡對探討子宮腺肌病的發(fā)病機制及指導(dǎo)臨床治療有重要意義。

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