連文元, 李 悅, 王新春,2*, 蘇 紅, 張美玲
(1.石河子大學(xué)藥學(xué)院,新疆石河子 832002;2.石河子大學(xué)一附院,新疆石河子 832008)
紫草是常用中藥之一,為紫草科植物新疆紫草,紫草,內(nèi)蒙紫草等的干燥塊根,具有止血,抗炎,抗菌及抗癌作用[1]。其抗腫瘤主要活性成分左旋紫草素能影響腫瘤細(xì)胞的代謝、增殖、分化、信號(hào)傳遞、基因表達(dá)等過(guò)程,阻礙腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),抗腫瘤應(yīng)用前景廣闊[2]。但左旋紫草色素水溶性差的性質(zhì)限制了其廣泛應(yīng)用。
微乳(ME)是由油相、水相、表面活性劑及助表面活性劑以適當(dāng)比例混合后,自發(fā)形成的一種透明或半透明、低黏度的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)都很穩(wěn)定的混合體系,其液滴粒徑介于10~100 nm之間。微乳作為油、水難溶性藥物的良好載體可增加藥物的溶解度,提高藥物的生物利用度[3]。
因此,為增加左旋紫草素溶解度,采用偽三元相圖法進(jìn)行左旋紫草素微乳的研究,用紫外法測(cè)定其載藥量,考察微乳對(duì)左旋紫草素的增溶作用,為左旋紫草素相關(guān)制劑的研究提供一定的依據(jù)。
紫外分光光度計(jì)-2401PC(日本島津公司);HJ-六聯(lián)磁力攪拌器(金壇市華峰儀器有限公司);BS110S電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);左旋紫草素 (批號(hào):110769-200405,中國(guó)藥品生物制品檢定所);聚氧乙烯(35)蓖麻油甘油醚(Cremophor EL12-14,德國(guó) BASF公司);肉豆蔻酸異丙酯(IPM,浙江物美化學(xué)品有限公司);其余試劑為分析純。
2.1.1 空白微乳的處方選擇 將乳化劑(EL)與助乳化劑(乙醇)按Km為1∶1混合,用磁力攪拌器充分混合均勻得混合乳化劑,再與油相(IPM)分別按 9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9 混合均勻,邊攪拌邊逐滴加入注射用水,觀察體系由濁至清的現(xiàn)象,記錄臨界點(diǎn)時(shí)的各組分百分比。以溶液外觀、流動(dòng)性、成乳難易程度及成乳區(qū)域的大小為指標(biāo),最終選定EL、IPM、乙醇為本實(shí)驗(yàn)的乳化劑、油相和助乳化劑。
2.1.2 Km值的選擇 見(jiàn)圖1。將Km=1∶1和Km=2∶1定為候選Km值。(Km為乳化劑和助乳化劑的質(zhì)量比)。分別按兩個(gè)Km值配制混合乳化劑,混合乳化劑與油相分別按 9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9 比例混合,在25℃恒溫條件下攪拌混勻,后逐滴加入水,至體系成透明或半透明并帶藍(lán)色乳光時(shí),停止加水即得空白微乳;記錄加水量,各組分量換算成質(zhì)量百分?jǐn)?shù)后用Origin7.5軟件繪制偽三元相圖。圖1中M表示微乳相,LG表示凝膠相,E表示普通乳相。
比較兩個(gè)相圖,前者在微乳區(qū)、凝膠相區(qū)及普通乳區(qū)分界明顯,有利于判斷區(qū)分各相形態(tài);后者所得相圖中凝膠相和普通乳相的臨界點(diǎn)難于判斷,且相區(qū)發(fā)生交叉,無(wú)法明確相區(qū)內(nèi)相態(tài),故選擇Km=1∶1;根據(jù)乳化劑用量少和隨機(jī)的原則,從所得相圖中取三個(gè)處方配比進(jìn)行制備,攪拌12 h后,結(jié)果配比2的微乳還比較透明,且具有藍(lán)色乳光。故選擇處方2來(lái)制備空白微乳。微乳處方用量配比見(jiàn)表1。
圖1 微乳的偽三元相圖
表1 微乳處方用量配比表
2.2.1 最大檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 取左旋紫草素對(duì)照品約18 mg,精密稱定,置50 mL棕色量瓶中,加入乙醇溶解,稀釋至刻度,制成濃度每1 mL為0.392 mg的對(duì)照品貯備液。精密吸取對(duì)照品貯備液1.0 mL,置于10 mL棕色量瓶中,加入乙醇稀釋至刻度。以乙醇為空白,400~800 nm范圍內(nèi)掃描。同時(shí),精密吸取左旋紫草素微乳與空白微乳各400 μL,分別置25 mL棕色量瓶中,各加入乙醇適量,再加入乙醇稀釋至刻度,搖勻。分別以乙醇為空白,400~800 nm范圍內(nèi)掃描。結(jié)果,左旋紫草素微乳中左旋紫草素與左旋紫草素對(duì)照品在516 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收峰,而空白微乳在此波長(zhǎng)處無(wú)吸收,故對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。
2.2.2 左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密移取左旋紫草素對(duì)照品貯備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,各置于10 mL 棕色量瓶中,加入乙醇至刻度,搖勻。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo),吸收度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=28.011C+0.000 9(r=0.998)。結(jié)果表明,左旋紫草素在7.12~28.53 μg/mL范圍內(nèi)與吸收度線性關(guān)系良好。2.2.3 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液,分別于同日不同時(shí)間及隔日測(cè)定1次,測(cè)定5次吸收度。結(jié)果,供試品溶液日間及日內(nèi)吸收度RSD分別為0.50%和0.32%。
2.2.4 回收率試驗(yàn) 精密移取空白微乳9份各400 μL,分別置25 mL棕色量瓶中,各精密加入左旋紫草素對(duì)照品溶液適量,再加入乙醇稀釋至刻度,搖勻、測(cè)定。計(jì)算回收率,結(jié)果平均回收率為98.97%,RSD為0.35%(n=9)。
移取溶劑蒸餾水、空白微乳各10 mL,分別置于50 mL磨口錐形瓶中,各加入左旋紫草素至不溶,于振蕩器上連續(xù)振24 h(25±1)℃,達(dá)飽和狀態(tài)后,各取適量液體置離心管中,離心15 min(2 500 r/min)。取上清液,微孔濾膜(0.22 μm)過(guò)濾,得2種濾液。精密移取2種濾液適量,分別置25 mL棕色量瓶中,加入乙醇至刻度。于516 nm處測(cè)定吸收度,計(jì)算溶解度。結(jié)果,左旋紫草素在微乳中的溶解度比水中有明顯的增大,在微乳中的溶解度為3.72 mg/mL,在蒸餾水中的溶解度為0.003 9(mg/mL),提高約955倍,說(shuō)明微乳對(duì)左旋紫草素有明顯的增溶作用,(P<0.05)。
3.1 左旋紫草素由于其為溶解度極低大大限制其臨床應(yīng)用,本實(shí)驗(yàn)探索了新型給藥系統(tǒng)微乳對(duì)難溶性藥物的增溶作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,微乳可大大提高左旋紫草素的溶解度,為其臨床應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。
3.2 在篩選乳化劑、助乳化劑及油相時(shí),分別以吐溫-80、卵磷脂及EL為乳化劑,以PEG-400、乙醇、丙二醇及正丁醇為助乳化劑,以肉豆蔻異丙酯(IPM)、油酸、辛酸/葵酸三甘油酯(GTCC)為油相,按正文中2.1.1項(xiàng)法進(jìn)行微乳制備研究,繪制偽三元相圖。結(jié)果,以樣品外觀、流動(dòng)性、成乳難易程度及微乳區(qū)域大小為綜合指標(biāo),選擇了乙醇、EL、IPM為本實(shí)驗(yàn)的助乳化劑、乳化劑和油相。
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