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        微乳對左旋紫草素增溶作用的實驗研究

        2010-05-26 06:14:46連文元王新春張美玲
        中成藥 2010年5期
        關鍵詞:微乳油相紫草

        連文元, 李 悅, 王新春,2*, 蘇 紅, 張美玲

        (1.石河子大學藥學院,新疆石河子 832002;2.石河子大學一附院,新疆石河子 832008)

        紫草是常用中藥之一,為紫草科植物新疆紫草,紫草,內蒙紫草等的干燥塊根,具有止血,抗炎,抗菌及抗癌作用[1]。其抗腫瘤主要活性成分左旋紫草素能影響腫瘤細胞的代謝、增殖、分化、信號傳遞、基因表達等過程,阻礙腫瘤細胞的生長,抗腫瘤應用前景廣闊[2]。但左旋紫草色素水溶性差的性質限制了其廣泛應用。

        微乳(ME)是由油相、水相、表面活性劑及助表面活性劑以適當比例混合后,自發(fā)形成的一種透明或半透明、低黏度的動力學和熱力學都很穩(wěn)定的混合體系,其液滴粒徑介于10~100 nm之間。微乳作為油、水難溶性藥物的良好載體可增加藥物的溶解度,提高藥物的生物利用度[3]。

        因此,為增加左旋紫草素溶解度,采用偽三元相圖法進行左旋紫草素微乳的研究,用紫外法測定其載藥量,考察微乳對左旋紫草素的增溶作用,為左旋紫草素相關制劑的研究提供一定的依據(jù)。

        1 儀器與試藥

        紫外分光光度計-2401PC(日本島津公司);HJ-六聯(lián)磁力攪拌器(金壇市華峰儀器有限公司);BS110S電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);左旋紫草素 (批號:110769-200405,中國藥品生物制品檢定所);聚氧乙烯(35)蓖麻油甘油醚(Cremophor EL12-14,德國 BASF公司);肉豆蔻酸異丙酯(IPM,浙江物美化學品有限公司);其余試劑為分析純。

        2 方法與結果

        2.1 空白微乳的處方和Km的選擇、制備[4]

        2.1.1 空白微乳的處方選擇 將乳化劑(EL)與助乳化劑(乙醇)按Km為1∶1混合,用磁力攪拌器充分混合均勻得混合乳化劑,再與油相(IPM)分別按 9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9 混合均勻,邊攪拌邊逐滴加入注射用水,觀察體系由濁至清的現(xiàn)象,記錄臨界點時的各組分百分比。以溶液外觀、流動性、成乳難易程度及成乳區(qū)域的大小為指標,最終選定EL、IPM、乙醇為本實驗的乳化劑、油相和助乳化劑。

        2.1.2 Km值的選擇 見圖1。將Km=1∶1和Km=2∶1定為候選Km值。(Km為乳化劑和助乳化劑的質量比)。分別按兩個Km值配制混合乳化劑,混合乳化劑與油相分別按 9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9 比例混合,在25℃恒溫條件下攪拌混勻,后逐滴加入水,至體系成透明或半透明并帶藍色乳光時,停止加水即得空白微乳;記錄加水量,各組分量換算成質量百分數(shù)后用Origin7.5軟件繪制偽三元相圖。圖1中M表示微乳相,LG表示凝膠相,E表示普通乳相。

        比較兩個相圖,前者在微乳區(qū)、凝膠相區(qū)及普通乳區(qū)分界明顯,有利于判斷區(qū)分各相形態(tài);后者所得相圖中凝膠相和普通乳相的臨界點難于判斷,且相區(qū)發(fā)生交叉,無法明確相區(qū)內相態(tài),故選擇Km=1∶1;根據(jù)乳化劑用量少和隨機的原則,從所得相圖中取三個處方配比進行制備,攪拌12 h后,結果配比2的微乳還比較透明,且具有藍色乳光。故選擇處方2來制備空白微乳。微乳處方用量配比見表1。

        圖1 微乳的偽三元相圖

        表1 微乳處方用量配比表

        2.2 紫外分光光度法測定左旋紫草素的含量

        2.2.1 最大檢測波長選擇 取左旋紫草素對照品約18 mg,精密稱定,置50 mL棕色量瓶中,加入乙醇溶解,稀釋至刻度,制成濃度每1 mL為0.392 mg的對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液1.0 mL,置于10 mL棕色量瓶中,加入乙醇稀釋至刻度。以乙醇為空白,400~800 nm范圍內掃描。同時,精密吸取左旋紫草素微乳與空白微乳各400 μL,分別置25 mL棕色量瓶中,各加入乙醇適量,再加入乙醇稀釋至刻度,搖勻。分別以乙醇為空白,400~800 nm范圍內掃描。結果,左旋紫草素微乳中左旋紫草素與左旋紫草素對照品在516 nm波長處均有最大吸收峰,而空白微乳在此波長處無吸收,故對測定無干擾。

        2.2.2 左旋紫草素標準曲線的制備 精密移取左旋紫草素對照品貯備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,各置于10 mL 棕色量瓶中,加入乙醇至刻度,搖勻。以對照品濃度為橫坐標,吸收度為縱坐標進行線性回歸,得左旋紫草素標準曲線方程為:A=28.011C+0.000 9(r=0.998)。結果表明,左旋紫草素在7.12~28.53 μg/mL范圍內與吸收度線性關系良好。2.2.3 精密度試驗 取同一供試品溶液,分別于同日不同時間及隔日測定1次,測定5次吸收度。結果,供試品溶液日間及日內吸收度RSD分別為0.50%和0.32%。

        2.2.4 回收率試驗 精密移取空白微乳9份各400 μL,分別置25 mL棕色量瓶中,各精密加入左旋紫草素對照品溶液適量,再加入乙醇稀釋至刻度,搖勻、測定。計算回收率,結果平均回收率為98.97%,RSD為0.35%(n=9)。

        2.3 左旋紫草素溶解性能的考察

        移取溶劑蒸餾水、空白微乳各10 mL,分別置于50 mL磨口錐形瓶中,各加入左旋紫草素至不溶,于振蕩器上連續(xù)振24 h(25±1)℃,達飽和狀態(tài)后,各取適量液體置離心管中,離心15 min(2 500 r/min)。取上清液,微孔濾膜(0.22 μm)過濾,得2種濾液。精密移取2種濾液適量,分別置25 mL棕色量瓶中,加入乙醇至刻度。于516 nm處測定吸收度,計算溶解度。結果,左旋紫草素在微乳中的溶解度比水中有明顯的增大,在微乳中的溶解度為3.72 mg/mL,在蒸餾水中的溶解度為0.003 9(mg/mL),提高約955倍,說明微乳對左旋紫草素有明顯的增溶作用,(P<0.05)。

        3 討論

        3.1 左旋紫草素由于其為溶解度極低大大限制其臨床應用,本實驗探索了新型給藥系統(tǒng)微乳對難溶性藥物的增溶作用,實驗結果表明,微乳可大大提高左旋紫草素的溶解度,為其臨床應用奠定了理論基礎。

        3.2 在篩選乳化劑、助乳化劑及油相時,分別以吐溫-80、卵磷脂及EL為乳化劑,以PEG-400、乙醇、丙二醇及正丁醇為助乳化劑,以肉豆蔻異丙酯(IPM)、油酸、辛酸/葵酸三甘油酯(GTCC)為油相,按正文中2.1.1項法進行微乳制備研究,繪制偽三元相圖。結果,以樣品外觀、流動性、成乳難易程度及微乳區(qū)域大小為綜合指標,選擇了乙醇、EL、IPM為本實驗的助乳化劑、乳化劑和油相。

        [1]羅學婭,李明輝,呂莉,等.紫草的藥理作用與應用研究進展[J].大連大學學報,2004,25(2):80-84.

        [2]黃 河,劉宗潮.紫草素及其衍生物的抗腫瘤作用[J].腫瘤防治雜志,2005,12(1):75-79.

        [3]石宗豐,王利勝.微乳在中藥制劑中的應用研究進展[J].中藥新藥與臨床藥理,2008,19(5):414-416.

        [4]潘國梁,賈曉斌,魏惠華,等.藥用微乳偽三元相圖的幾種制備方法比較研究[J].中國藥房,2006,7(1):21-23.

        [5]范芳芳,劉澤蒲,陳 文,等.紫外分光光度法測定新疆紫草中總萘醌的含量[J].石河子大學學報(自然科學版),2004,22,(5):1577-1578.

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