楊 柯， 曾春暉， 黎文智， 李志翔

（廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西南寧 530001）

五眼果是漆樹科植物南酸棗（Choerospondias axillaris（Roxb.）Burtt et Hill）的干燥果核。據(jù)《中華本草》記載:其味甘、酸，性平，具有行氣活血、養(yǎng)心安神、消積解毒功效，主治氣泄血瘀，胸痛，心悸氣短，神經(jīng)衰弱，失眠，支氣管炎，食滯腹?jié)M，腹瀉，疝氣，燙火傷等。民間使用五眼果入藥治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石具有良好臨床效果，但關(guān)于其治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的藥理作用研究目前尚無報道。本文復(fù)制泌尿系統(tǒng)結(jié)石動物模型，通過檢測小鼠的尿液及腎臟中草酸和鈣的含量，初步研究五眼果對泌尿系統(tǒng)結(jié)石的作用。

1 實驗材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，體重18～22 g，由廣西中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物合格證號桂醫(yī)動字第11004號。

1.1.2 實驗儀器和試劑 722型可見分光光度計（上海醫(yī)用儀表廠）;QL－901震蕩儀（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）;

蕩石片（吉林省大峻藥業(yè)股份有限公司，批號20080102）;阿法骨化醇軟膠囊（1α（OH）VitD3，南通華山藥業(yè)有限公司，批號070528）;其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.1.3 藥物制備及主要實驗試劑的配制:五眼果水提物制備:取500 g藥材粗粉，加入5 L蒸餾水，加熱提取1 h，過濾，藥渣加入4 L蒸餾水，加熱提取0.5 h，過濾，合并濾液，濃縮至500 mL，為褐色溶液，4℃冰箱保存?zhèn)溆?五眼果高、中、低劑量:用蒸餾水配成100%、50%、25%的濃度。

溴麝香草酚藍(lán)指示劑:0.1 g麝香溴酚蘭溶于20 mL 100%乙醇中徐徐加入蒸餾水80 mL不斷振蕩直至完全溶解。

1.2 實驗方法

1.2.1 藥物對泌尿系統(tǒng)結(jié)石動物模型的影響

1.2.1.1 實驗方法 取78只健康小白鼠，♀♂各半，18～22 g，隨機分成6組，每組13只，即空白對照組（蒸餾水），模型對照組（蒸餾水），陽性對照組（蕩石片，2 g/kg），五眼果高、中、低劑量組（20 g生藥/kg、10 g 生藥/kg、5 g 生藥/kg），除空白對照組外，其余各組小鼠上、下午分別i.g給予1%乙二醇0.5 mL/只，間隔1 h后，再分別給予飲用水1 mL/只，于每天下午固定時間i.g給予1α（OH）VitD30.5 μg/只1次，每周給予處理6 d。于每天下午固定時間i.g給予相應(yīng)藥物和蒸餾水，給藥容量20 mL/kg。連續(xù)進(jìn)行4周，每周第7天給予相應(yīng)藥物或蒸餾水后，收集24 h尿液測定尿草酸和尿鈣含量。末次收集24 h尿液后，處死小鼠，取右側(cè)腎臟，勻漿，測定腎草酸、腎鈣含量。

1.2.1.2 尿草酸、腎草酸、尿鈣、腎鈣含量測定方法

尿草酸測定:應(yīng)用鉻酸鉀氧化甲基紅催化光度法測定尿草酸排泄量［1］:以超純水作參比，在515 nm處測吸光度。按下列公式計算尿草酸含量［2］:

C（mmol/L）=（空白管－樣品管）/（空白管－標(biāo)準(zhǔn)管）×0.01

腎草酸測定:用變色酸比色法測定草酸含量［3］，以空白管作參比，在570 nm處測其余管吸光度［4］，按下列公式計算。

C（mmol/L）=樣品管/標(biāo)準(zhǔn)管×0.57。

尿鈣、腎鈣檢測［5］:應(yīng)用 EDTA絡(luò)合滴定法測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS11.0軟件進(jìn)行處理，實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 五眼果水提物對尿草酸的影響

結(jié)果表明模型對照組與空白對照組比較，造模期間尿草酸明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，高、中、劑量組的尿草酸在實驗期間均有明顯降低（P＜0.05），低劑量組的尿草酸在給藥后第3、4周有明顯降低（P＜0.05），結(jié)果見表1。

表1 五眼果水提物對尿草酸的影響 （±s，n=13）

表1 五眼果水提物對尿草酸的影響 （±s，n=13）

注:與模型對照組比較，*P＜0.05（下同）。

組別 劑量/（g生藥/kg）尿草酸濃度/（μmol/mL）第1周 第2周 第3周 第4周空白組 － 0.084±0.014* 0.096±0.018* 0.100±0.019* 0.103±0.016*模型組 － 0.131±0.019 0.132±0.021 0.131±0.021 0.128±0.024陽性組 2 0.111±0.013* 0.100±0.009* 0.113±0.014* 0.113±0.013*高劑量組 20 0.110±0.011* 0.106±0.013* 0.109±0.010* 0.113±0.010*中劑量組 10 0.107±0.022* 0.110±0.012* 0.115±0.012* 0.113±0.011*低劑量組 5 0.119±0.017 0.119±0.009 0.116±0.016* 0.113±0.012*

2.2 五眼果水提物對尿鈣的影響

結(jié)果表明模型對照組與空白對照組比較，造模期間尿鈣明顯升高（P＜0.05）。高、中、低劑量組與模型組比較，在實驗期間均明顯降低（P＜0.05），低劑量組的尿鈣在給藥后第3、4周有明顯降低（P＜0.05），結(jié)果見表2。

表2 五眼果水提物對尿鈣的影響（±s，n=13）

表2 五眼果水提物對尿鈣的影響（±s，n=13）

組別 劑量/（g生藥/kg）尿鈣濃度/（μmol/mL）第1周 第2周 第3周 第4周空白組 － 0.616±0.147* 0.618±0.176* 0.650±0.146* 0.615±0.185*模型組 － 1.743±0.188 1.693±0.294 1.560±0.241 1.599±0.263陽性組 2 1.319±0.178* 1.438±0.224* 1.356±0.256* 1.369±0.296*高劑量組 20 1.201±0.259* 1.274±0.300* 1.296±0.173* 1.371±0.286*中劑量組 10 1.516±0.303* 1.406±0.384* 1.306±0.330* 1.347±0.334*低劑量組 5 1.583±0.320 1.532±0.379 1.344±0.285* 1.398±0.228*

2.3 五眼果水提物對腎鈣，腎草酸的影響

結(jié)果表明模型對照組與空白對照組比較，造模期間腎鈣，腎草酸明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，高、中、低劑量組的腎鈣、腎草酸在實驗期間均明顯降低（P＜0.05），各劑量對腎鈣，腎草酸均有明顯降低作用（P＜0.05），結(jié)果見表3。

表3 五眼果水提物對腎鈣、腎草酸的影響 （±s，n=13）

表3 五眼果水提物對腎鈣、腎草酸的影響 （±s，n=13）

組別 劑量/（g生藥/kg）腎草酸濃度/（μmol/mL）腎鈣濃度/（μmol/mL）空白組 － 0.481±0.110* 0.502±0.151*模型組 － 1.171±0.222 0.776±0.144陽性組 2 0.944±0.219* 0.174±0.003*高劑量組 20 0.954±0.171* 0.144±0.002*中劑量組 10 0.971±0.269* 0.200±0.408*低劑量組 5 0.968±0.273* 0.193±0.035*

3 討論

誘石劑乙二醇是草酸的前體，進(jìn)入體內(nèi)代謝最終轉(zhuǎn)變?yōu)椴菟?，從腎分泌排泄。1α（OH）VitD3可促進(jìn)小腸黏膜上皮和小管上皮細(xì)胞對鈣的吸收，促進(jìn)骨鈣的釋放。長期用1α（OH）VitD3可使小鼠的尿鈣濃度升高，尿鈣草酸結(jié)合成為草酸鈣，在腎組織內(nèi)形成晶體，晶體漸生長、聚集形成結(jié)石。臨床上許多結(jié)石患者對鈣吸收主要是通過對維生素D3依賴機制，故1α（OH）VitD3是草酸鈣結(jié)石形成的重要危險因素。本實驗采用乙二醇和1α（OH）VitD3等作為誘石液進(jìn)行動物模型的條件研究。與空白組比較，尿草酸明顯升高（P＜0.05），而且造模后無小鼠死亡，表明造模成功。

五眼果高、中劑量在實驗期間明顯降低尿草酸，尿鈣水平（P＜0.05），低劑量則在給藥后第3、4周有明顯降低（P＜0.05），各劑量對腎草酸，腎鈣均有明顯降低作用（P＜0.05），表明五眼果對小鼠泌尿系統(tǒng)結(jié)石具有顯著的作用。深入地對其進(jìn)行研究開發(fā)，勢必能研發(fā)出一個對泌尿系統(tǒng)結(jié)石具有良好臨床效果的新藥。

［1］麻全生，楊文初.鉻酸鉀氧化甲基紅催化光度法測定微量草酸［J］.理化檢驗·化學(xué)分冊，1998，34（7）:309.

［2］李文峰，張士青，顧 欣.微量尿草酸測量的3種比色法比較［J］.中國實驗診斷學(xué)，2006，10（08）:909－911.

［3］吳階平，馬永江.實用泌尿外科學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，1991:200.

［4］Urist MR.Bone formation by auto induction［J］.Science，1965，150:893－899.

［5］殷延林，金 杰，張 蓓，等.米糠降低尿鈣作用的研究［J］.中華泌尿外科雜志，1998，19（9）:563－565.

［6］王沙燕，石之斟，張阮章，等.豬苓湯對腎結(jié)石大鼠Osteopotin mRNA 表達(dá)的影響［J］.中國優(yōu)生遺傳雜志，2005，13（10）:39－42.

［7］Lane J M，Sandhu H S.Current approches to experimental bone grafting［J］.Orthop Clin Nort Am，1987，18（2）:213－225.

［8］Nillson O S，Urist M R，Daw son E G.Bone repair induced by bone morphogenetic proetein in ulnar defects in dogs［J］.J Bone Joint Surg，1986，68:635－642.