劉 元， 李星宇， 宋志釗， 李友娣， 何 飛

（廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧 530022）

千斤腦康寧膠囊治療脾腎兩虛、腦髓不足之癡呆藥效學(xué)研究

劉 元， 李星宇， 宋志釗， 李友娣， 何 飛

（廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧 530022）

千斤腦康寧膠囊；大鼠、小鼠癡呆模型；抗急性腦缺氧；陽虛、脾虛模型

目的：觀察千斤腦康寧膠囊的治療脾腎兩虛、腦髓不足之癡呆藥效學(xué)作用。方法：采用三氧化鋁致大鼠、小鼠癡呆、30%乙醇致小鼠記憶再現(xiàn)障礙、斷頭致小鼠急性腦缺氧、氫化可的松致小鼠陽虛及利血平致小鼠脾虛等模型，觀察千斤腦康寧膠囊的治療老年癡呆藥效學(xué)作用。結(jié)果：千斤腦康寧膠囊能明顯增強(qiáng)癡呆模型大鼠、小鼠及記憶再現(xiàn)障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力；明顯延長急性腦缺氧小鼠大腦存活時(shí)間；并能明顯增強(qiáng)陽虛、脾虛模型小鼠體質(zhì)。結(jié)論：千斤腦康寧膠囊具有抗癡呆、抗急性腦缺氧、增強(qiáng)陽虛、脾虛模型小鼠體質(zhì)作用。

千斤腦康寧膠囊是我研究院根據(jù)廣西地方民族經(jīng)驗(yàn)方，經(jīng)篩選后進(jìn)行研制的中草藥制劑，主要由千斤拔、扶芳藤、鹿角膠、山萸肉等中藥組成，具有補(bǔ)腎益脾，活血化痰，健腦生髓之功效，對(duì)脾腎兩虛，痰瘀阻絡(luò)，腦髓不足所致之癡呆療效顯著。根據(jù)其作用特點(diǎn)，我們從抗癡呆、抗急性腦缺氧、增強(qiáng)陽虛、脾虛模型小鼠體質(zhì)等方面，觀察千斤腦康寧膠囊的活性作用，為臨床用于治療老年癡呆提供藥效學(xué)資料。

1 材料

1.1 動(dòng)物

昆明種小鼠，清潔級(jí)；Wistar大鼠，SPF級(jí)，均由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（桂）2003-0003。

1.2 藥品

千斤腦康寧膠囊，批號(hào)061008，由南寧市冠峰制藥有限公司提供，0.5 g/粒，每粒膠囊相當(dāng)于1.22 g生藥。腦復(fù)康片，0.4 g/片，批號(hào)：20050203，由廣西南寧市制藥企業(yè)集團(tuán)公司出品。參芪片，0.25 g/片，批號(hào)：20040914，由吉林制藥股份有限公司出品，以上藥品試驗(yàn)時(shí)均用蒸餾水配制成所需濃度藥液供動(dòng)物灌胃給藥。

2 方法與結(jié)果

2.1 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆大鼠、小鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響

2.1.1 三氯化鋁致大、小鼠癡呆模型復(fù)制方法［1-2］：大鼠以戊巴比妥鈉32 mg/kg（小鼠44 mg/kg）腹腔麻醉，剪去皮膚，暴露頭骨，于左側(cè)腦室部位（前囟后1 mm，中線旁開2 mm處）埋置外徑1.38 mm、內(nèi)徑為0.66 mm的外套管，深度為4 mm（小鼠為2.5 mm），以牙托粉和502膠水固定，0號(hào)大頭針制成活套內(nèi)芯封閉管口。造模給藥時(shí)，拔除內(nèi)芯，以注射針頭經(jīng)外套管向腦室內(nèi)注射，深度約5 mm（小鼠約3.5 mm）。從手術(shù)日起，連續(xù)8 d im青霉素鈉2萬u/只/d（小鼠0.8萬u/只/d），以防感染。手術(shù)后第4天起，每鼠每天腦室注射0.5%三氯化鋁10 μL（小鼠2 μL），連續(xù)5 d。手術(shù)對(duì)照組腦室折射等容量人工腦脊液。

2.1.2 對(duì)癡呆大鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響（Y型電迷路法）：選用240～280 g的♀性大鼠56只，隨機(jī)分為7組，每組8只。分組后給藥或給等體積蒸餾水，給藥劑量見表1。每天灌胃1次，連續(xù)19 d。第15天至19天，每天給藥后1 h，用Y型電迷路法測試大鼠的空加學(xué)習(xí)記憶能力。

電迷路法［3］：大鼠在迷路儀內(nèi)的一臂（起步區(qū)）靜置2 min，按兩臂交替法給予燈光條件刺激5 s，繼而施以電擊（控制電壓60 V）至其逃避至安全區(qū)，燈光繼續(xù)作用15 s，然后熄燈15 s，接著給予第2次測驗(yàn)。每天依次重復(fù)訓(xùn)練15次，記錄正確反應(yīng)次數(shù)。實(shí)驗(yàn)規(guī)定，大鼠受電擊后，20s內(nèi)從起步區(qū)直接逃至安全區(qū)視為“正確反應(yīng)”，其余均屬“錯(cuò)誤反應(yīng)”（包括電擊前自動(dòng)逃離安全區(qū)，5 s內(nèi)不知返回等情況）。連續(xù)測試5 d，每天數(shù)值換算成正確反應(yīng)百分率并組內(nèi)平均，組間比較，結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，千斤腦康寧膠囊可明顯提高訓(xùn)練正確反應(yīng)百分率。

2.1.3 對(duì)癡呆小鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響：選用27～37 g的♂性小鼠70只，隨機(jī)分為7組，每組10只。分組后給藥或給等體積蒸餾水，給藥劑量見表2～4。每天灌胃1次，連續(xù)26 d。第16，18天及26天給藥后1 h，用避暗法、跳臺(tái)法及Y型水迷路法測定千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆小鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響。

避暗法［4］：將小鼠背對(duì)洞口放入明室，小鼠通過洞口進(jìn)入暗室，受電擊后（電壓36v）又逃回明室，訓(xùn)練5 min，24 h（給藥后1 h），再將小鼠放入明室，記錄自放入至第1次進(jìn)入暗室的時(shí)間為潛伏期及5min內(nèi)進(jìn)入暗室受電擊的次數(shù)。5 min內(nèi)未鉆洞者，潛伏期按300 s計(jì)算，結(jié)果見表2。

表1 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響（Y型電迷路法n=8）

跳臺(tái)法［4］：將小鼠置入跳臺(tái)儀中平臺(tái)上，先適應(yīng)環(huán)境3 min，然后通電（電壓36v），當(dāng)小鼠跳下平臺(tái)受電擊后會(huì)重新跳上平臺(tái)，逃避電擊。跳下時(shí)以小鼠雙足同時(shí)接觸銅柵為觸電，視為錯(cuò)誤反應(yīng)，訓(xùn)練5 min，并記錄5 min內(nèi)觸電次數(shù)（錯(cuò)誤次數(shù)），24 h后（給藥后1 h）再將小鼠置于平臺(tái)上，記錄自放入至第一次跳下平臺(tái)受電擊的時(shí)間為潛伏期及5 min內(nèi)跳下平臺(tái)受電擊的次數(shù)（錯(cuò)誤次數(shù)）。5 min內(nèi)未跳下平臺(tái)者，潛伏期按300 s計(jì)算。結(jié)果見表3。

表2 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響（避暗法）（x ± s，n=10）

表3 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響（跳臺(tái)法）（x ± s，n=10）

Y型水迷路法［3］：將小鼠置于Y型迷路儀中訓(xùn)練（水深10 cm），水溫（25±0.5）℃，將小鼠尾對(duì)Y型迷路儀叉口，以其在15 s內(nèi)從入水區(qū)直接抵達(dá)平臺(tái)為正確反應(yīng)，否則作為錯(cuò)誤，小鼠抵達(dá)平臺(tái)后休息15 s再重復(fù)訓(xùn)練，每只小鼠學(xué)習(xí)（訓(xùn)練）10次，記錄正確反應(yīng)次數(shù)并換算成正確反應(yīng)百分率。24 h（給藥后1 h）再次同法測試記憶情況。結(jié)果見表4。

結(jié)果表明，千斤腦康寧膠囊能使小鼠記憶潛伏期明顯延長，錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少，學(xué)習(xí)和記憶正確反應(yīng)百分率明顯提高。

2.2 千斤腦康寧膠囊對(duì)30%乙醇致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響（避暗法）

選用體重18～22 g的♂性小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每

組10只。訓(xùn)練前小鼠灌胃給藥，給藥劑量見表5。每天灌胃給藥1次，連續(xù)11 d。末次藥后1h開始訓(xùn)練（避暗法），訓(xùn)練時(shí)小鼠鉆洞1次后即取出。24 h后測試。測試前30 min灌胃給30%乙醇15 mL/kg，正常對(duì)照組給等容量蒸餾水，記錄鉆洞潛伏期及5 min內(nèi)鉆洞次數(shù)（錯(cuò)誤次數(shù)）。實(shí)驗(yàn)電壓為36v，結(jié)果見表5。

表4 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響（Y型水迷路法）（x ± s，n=10）

表5 千斤腦康寧膠囊對(duì)乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響（避暗法x ± s，n=10）

結(jié)果表明，千斤腦康寧膠囊能使記憶再現(xiàn)障礙小鼠鉆洞潛伏期明顯延長，錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少。

2.3 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆小鼠急性腦缺氧的影響［4］

小鼠癡呆模型造模方法同2.1項(xiàng)，然后選用18～22 g的♂性小鼠70只，隨機(jī)分為7組，每組10只。給藥劑量見表6。每天灌胃給藥1次，連續(xù)30 d。第30天給藥后1 h，用斷頭臺(tái)沿耳根部快速切斷，以張口呼吸停止為指標(biāo)記錄小鼠大腦存活時(shí)間。結(jié)果見表6。

表6 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆小鼠急性腦缺氧的影響（±s，n=10）

表6 千斤腦康寧膠囊對(duì)癡呆小鼠急性腦缺氧的影響（±s，n=10）

t檢驗(yàn)，與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 劑量/（粒/kg）大腦存活時(shí)間/s正常對(duì)照組20.5±2.42手術(shù)對(duì)照組 21.1±1.67模型組 20.6±2.32腦復(fù)康片 0.3 23.6±2.72*千斤腦康寧膠囊 3.0 24.0±1.70**1.5 22.6±1.35*0.75 21.3±1.89

結(jié)果表明，千斤腦康寧膠囊能明顯延長小鼠大腦存活時(shí)間，對(duì)小鼠急性腦缺氧有一定的保護(hù)作用。

2.4 千斤腦康寧膠囊對(duì)陽虛小鼠游泳時(shí)間的影響（抗疲勞實(shí)驗(yàn)）［3］

選用18～22 g♂性小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。給藥劑量見表7。每天灌胃給藥1次，連續(xù)9 d。在給藥同時(shí)，小鼠皮下注射氰化可的松30 mg/kg（正常對(duì)照組除外），第10天ig給藥后1 h（不再皮下注射氰化可的松），進(jìn)行抗疲勞實(shí)驗(yàn)，將每一組的動(dòng)物放入一游泳箱內(nèi)（體積52 cm×40 cm×22 cm，水深20 cm，水溫23℃ ±0.5℃），6組動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。小鼠不負(fù)重，當(dāng)小鼠頭部沉入水中15 s不能浮出水面者即為體力耗竭，記錄小鼠入水起至體力耗竭時(shí)止所需的時(shí)間為小鼠游泳時(shí)間。結(jié)果見表7。

表7 千斤腦康寧膠囊對(duì)陽虛小鼠游泳時(shí)間的影響（x ± s，n=10）

結(jié)果表明，千斤腦康寧膠囊能使陽虛小鼠游泳時(shí)間明顯延長。

2.5 千斤腦康寧膠囊對(duì)脾虛小鼠游泳時(shí)間的影響（抗疲勞實(shí)驗(yàn)）［3］

選用18～22 g♂性小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。給藥劑量見前實(shí)驗(yàn)。每天灌胃給藥1次，連續(xù)9 d。在給藥同時(shí)，小鼠皮下注射利血平0.2 mg/kg（正常對(duì)照組除外），末次藥后4.5 h進(jìn)行抗疲勞實(shí)驗(yàn)，將每一組的動(dòng)物放入一游泳箱內(nèi)（體積52 cm×40 cm×22 cm，水深20 cm，水溫23℃ ±0.5℃），6組動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。小鼠不負(fù)重，當(dāng)小鼠頭部沉入水中15 s不能浮出水面者即為體力耗竭，記錄小鼠入水起至體力耗竭時(shí)止所需的時(shí)間為小鼠游泳時(shí)間。結(jié)果見表8。

表8 千斤腦康寧膠囊對(duì)脾虛小鼠游泳時(shí)間的影響（x ± s，n=10）

結(jié)果表明，千斤腦康寧膠囊能使脾虛小鼠游泳時(shí)間明顯延長。

3 討論

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’Disease，AD）亦稱老年性癡呆癥。是老年人中最常見的神經(jīng)退行性疾病之一［5］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為癡呆為神態(tài)病，其病倦在腦：但靈機(jī)、記性，與腦髓不足有十分密切關(guān)系，亦與心脾腎等臟腑功能失調(diào)有關(guān)。蓋“腎為先天之本”，腎主骨生髓而通于腦，年老之人，腎精虧虛，腦髓失沖，神機(jī)失控而迷惑愚鈍，動(dòng)作笨拙，反應(yīng)遲緩；“脾為后天之本，氣血生化之源”，脾胃虛弱，健運(yùn)失司，氣血生化之源不足，氣血虧虛，精虧血少，少以養(yǎng)心，亦無以上充于腦，致使髓海不足，心腦失所滋養(yǎng)，故神不守舍，產(chǎn)生癡呆諸癥。病因病機(jī)多因人至老年，體力漸衰，脾腎虧虛，精血虛少，腦髓不足所致。千斤腦康寧膠囊是為脾腎兩虛，痰瘀阻絡(luò)，腦髓不足之癡呆癥而設(shè)，以補(bǔ)腎益脾，活血化痰，健腦生髓為法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，千斤腦康寧膠囊能明顯增強(qiáng)癡呆模型大鼠、小鼠及記憶再現(xiàn)障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力；明顯延長急性腦缺氧小鼠大腦存活時(shí)間；而且對(duì)陽虛、脾虛模型小鼠體質(zhì)有明顯增強(qiáng)作用，體現(xiàn)了中醫(yī)整體治療的特色。

［1］徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：613.

［2］李 玲，陳汝筑.腦室注射氯化鋁對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響［J］.貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998：23（3）272.

［3］李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1991：176，174，331，149.

［4］陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.上海：人民衛(wèi)生出版社，1993：892，894，783.

［5］肖 飛.Alzheimer Disease病因研究現(xiàn)狀［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2008：25（4）510-512.

R285.5

B

1001-1528（2010）07-1220-04

2009-06-12

廣西壯族自治區(qū)科技攻關(guān)項(xiàng)目（桂科攻0537018-13）

劉 元（1965－），女，副研究員，研究方向：中藥藥理學(xué)研究及新藥開發(fā)。Tel：（0771）5877473 E-mail：liuyuan0821@vip.163.com