聶 陽， 李苑新， 劉 燕， 甘柯林

（1.肇慶醫(yī)學高等專科學校藥劑教研室，廣東 肇慶 526020;2.廣東藥學院中藥開發(fā)研究所，廣東 廣州 510006）

丹參酮（Tanshinone，TAN）是丹參藥材的脂溶性成分，難溶于水，口服吸收差。乳劑作為一種藥物傳遞系統(tǒng)，口服可以改善難溶性藥物的吸收，提高藥物生物利用度。作為一種熱力學不穩(wěn)定體系，乳劑易發(fā)生分層、絮凝甚至破乳等物理不穩(wěn)定現(xiàn)象，極大的限制了乳劑的生產(chǎn)和應用，國外學者將液態(tài)乳劑轉變?yōu)楦扇閯┏蔀楦纳七@一問題的有效途徑。

丹參酮干乳劑由丹參酮原料制成的O/W型乳劑與支撐劑制備而成，試驗表明，丹參酮干乳化后其溶解度提高53倍，120 min累計溶出74.16%［1］。難溶性藥物制成干乳劑，可直接或經(jīng)過處理后灌制膠囊或壓片［2］，為適應丹參酮干乳劑在制劑開發(fā)中應用，作者對其穩(wěn)定性進行探討。本文采用HPLC測定干乳劑中丹參酮IIA的含量，據(jù)質(zhì)量檢查項目考察TAN干乳劑的穩(wěn)定性，通過初勻速法預測其有效期。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 HPLC（美國安捷倫公司）;LHS-100CL恒溫恒濕箱、LHH-150GP藥品強光穩(wěn)定性試驗箱（上海一恒科技有限公司）;BP211D電子分析天平（德國賽多利斯公司）;丹參酮干乳劑（廣東藥學院中藥開發(fā)研究所提供，批號:20070621）;丹參酮原料（廣州美晨藥業(yè)有限公司提供）;丹參酮ⅡA對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號:0766-200011）;甲醇（美國費希爾公司，色譜純）;水（自制三重蒸餾水）;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 丹參酮干乳劑中丹參酮IIA的含量測定

2.1.1 色譜條件 Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相甲醇-水（80 ∶20），流速 1.0 mL/min，柱溫 30℃，檢測波長268 nm。

2.1.2 溶液的制備

對照品溶液 精密稱取丹參酮IIA對照品適量，加甲醇配制成0.085 3 mg/mL的溶液，冰箱4℃保存，即得丹參酮IIA對照品溶液。

供試品溶液 準確稱取干乳劑0.1 g置50 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，超聲處理15 min，靜置冷卻，以甲醇補足損失體積，離心（3 000 r/min）15 min。取上清液以0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

陰性對照品溶液 按處方工藝制備不含丹參酮的干乳劑，同供試品溶液的制備處理，即得陰性對照品溶液。

2.1.3 專屬性考察 分別取陰性對照品、丹參酮IIA對照品、供試品溶液置自動進樣器進樣測定，記錄色譜圖，見圖1。結果表明，陰性對照品在與對照品丹參酮IIA相同保留時間的位置上，無相應的色譜峰出現(xiàn)，說明干乳劑中其他成分不干擾丹參酮IIA的測定。

2.1.4 線性關系考察 以微量自動進樣器吸取丹參酮IIA對照品溶液 1、3、5、7、10、15、20 μL，按上述色譜條件測定。以峰面積（Y）對進樣量（X）進行回歸，得回歸方程:Y=4.67×104X－104.89，r=0.999 6。結果表明，丹參酮IIA對照品進樣量在0.085 3 μg～1.706 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

2.1.5 精密度試驗 吸取供試品溶液5 μL進樣測定，重復進樣6次，記錄每次進樣的峰面積。結果丹參酮IIA峰面積的RSD=2.72%，表明精密度良好。

2.1.6 重復性試驗 取同一批的丹參酮干乳劑6份，按上述供試品溶液的制備方法處理。分別吸取供試品溶液5 μL進樣測定，記錄峰面積。結果丹參酮IIA峰面積的RSD=1.63%，表明重復性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，室溫下放置0、4、8、12、16、24 h，分別吸取5 μL進樣，記錄峰面積。結果丹參酮IIA峰面積的RSD=1.37%，表明供試品溶液室溫放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.1.8 回收率試驗 精密稱取已知含量丹參酮干乳劑供試品，每份0.1 g，精密稱定，分別加入丹參酮IIA對照品溶液（C=0.853 mg/mL）1、5、10 mL，按供試品制備方法處理并測定，結果測得丹參酮IIA的平均回收率=99.83%，RSD=2.79%（n=6）。

圖1HPLC色譜圖

2.2 穩(wěn)定性考察 取丹參酮干乳劑進行穩(wěn)定性試驗，重點考察外觀質(zhì)量、復溶效果、丹參酮的溶解度，并對前兩個考察指標進行評分。根據(jù)干乳劑的外觀質(zhì)量的干爽程度、分散性、滲油性，按5分制進行外觀評分。取丹參酮干乳劑適量，加相當于原丹參酮乳劑10倍量的水，振搖使干乳劑復溶，根據(jù)干乳劑復溶的快慢、顯微觀察復溶乳劑乳滴的均勻度，按5分制進行復溶評分。在10 mL水中加入過量丹參酮干乳劑，25℃恒溫水浴磁力攪拌48 h，3 000 r/min離心15 min，上清液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液以無水乙醇稀釋，268 nm波長測定，計算干乳劑中丹參酮的溶解度。

2.2.1 影響因素試驗 高溫試驗:精密稱取丹參酮干乳劑每份約2.0 g，置恒溫恒濕箱中，設定為溫度60℃，放置10 d，于第 0、1、3、5、10 天取樣檢測，同時準確稱量樣品實驗前后的重量，結果見表1。樣品為桔紅色粉末，高溫實驗過程中，干乳劑的重量、外觀、復溶、丹參酮溶解度較放置前未見明顯變化，丹參酮IIA含量變化不明顯。

高濕試驗:精密稱取丹參酮干乳劑每份約2.0 g，置恒溫恒濕箱中，設定為溫度25℃、相對濕度90%，放置10 d，于第0、1、3、5、10 天取樣檢測，同時準確稱量樣品實驗前后的重量，結果見表2。樣品各考察項目與放置前比較無明顯變化，干乳劑保持干爽，計算吸濕率為0.79%，吸濕增重不明顯。

強光照射試驗:精密稱取丹參酮干乳劑每份約2.0 g，置強光穩(wěn)定實驗箱中，設定為照度4500 lx，放置10 d，于第0、1、3、5、10天取樣檢測，同時記錄樣品的外觀變化，結果見表3。強光照射下，樣品桔紅色逐漸變深，但保持干爽、未見滲油;丹參酮的溶解度略有變化，減小3.32%;丹參酮IIA含量下降12.47%。實驗結果說明，光照對干乳劑的穩(wěn)定性影響顯著，應該避光貯存。

表1 高溫試驗結果

表2 高濕試驗結果

表3 強光照射試驗結果

2.2.2 有效期考察［3，4］采用初勻速法考察丹參酮干乳劑的有效期，按供試品溶液制備方法處理樣品，分別置60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃恒溫水浴中，各加熱10、9、8、7、6、5、4 h，取出并迅速冷卻，吸取溶液進 HPLC 測定。根據(jù)公式Vo=（100－Ci%）/ti求得初勻速，其中Co為藥物初始濃度，Ci為ti時段加熱后的藥物濃度，ti為加熱時間，結果見表4。

表4 有效期考察實驗結果

以lgVo對1/T進行線性回歸，得回歸方程為:lgVo=13.952－5 070.6×1/T，r=0.997 7，計算活化能 E= －2.303×1.987×（－5 070.6）=23.203 Kcal/mol，推算室溫（25℃）貯存期t0.9≈2年。

2.2.3 留樣觀察 精密稱取丹參酮干乳劑每份約2.0 g，以棕色玻璃瓶密封，室溫放置1年，每隔3個月取樣檢測。同時以丹參酮原料作對照，同法操作，考察丹參酮溶解度和丹參酮IIA的含量，實驗結果見表5。

表5留樣觀察結果

3 討論

3.1 丹參酮IIA是丹參藥材脂溶性成分中含量最高的成分，也是《中國藥典》收載的丹參制劑中大多數(shù)品種含量測定的指標成分，因此確定為丹參酮干乳劑含量控制的成分。

影響因素試驗的3個試驗結果，表明丹參酮干乳劑在高溫、高濕條件下穩(wěn)定，在強光照射下不穩(wěn)定。有研究認為:丹參酮IIA在空氣及光照條件下，發(fā)生光化降解反應［5］。因此，丹參酮干乳劑需要避光密封貯存。

3.2 初勻速法熱穩(wěn)定性試驗是不同于經(jīng)典恒溫法的一種熱穩(wěn)定性試驗方法，與后者相比具有取樣點少，在每個溫度段只需測定一次含量，大大減輕分析工作量的優(yōu)點。測定丹參酮干乳劑溶液在不同溫度的7個時間點的樣品，可求得有效期。本方法操作簡便、耗時短，預測的丹參酮干乳劑有效期約為2年。

3.3 丹參酮干乳劑留樣觀察1年后，顏色為桔紅色，外觀為干爽、無滲油的粉末，全部能夠通過200目篩;加水后振搖約1 min得到復溶乳劑，顯微鏡觀察到的乳劑乳滴大小均勻;水中丹參酮的溶解度為1.291 mg/mL;丹參酮IIA的含量為98.95%。

與試驗初始的丹參酮干乳劑相比，外觀質(zhì)量、復溶效果和TAN溶解度無顯著變化，丹參酮IIA的含量減少1.05%。說明以棕色玻璃瓶密封，室溫條件下，丹參酮干乳劑的穩(wěn)定性較好。

與丹參酮原料相比，干乳劑中丹參酮的溶解度提高55倍，丹參酮IIA降解的百分率明顯小于原料的4.77%。說明將丹參酮制備成干乳劑，在有效期內(nèi)，能夠保持對丹參酮的增溶效果。干乳劑中丹參酮IIA降解的百分率比原料中丹參酮IIA降解百分率要小，是因為HPMC、乳糖、乳酸鈣等輔料對丹參酮的包埋作用，從而減弱了丹參酮與光、空氣、熱等外界因素的作用。這個原理與儲茂泉等［6］制備丹參酮的PVP固體分散物，PVP對丹參酮包埋使丹參酮降解速度降低一致。

丹參酮干乳劑的研制，提高了丹參酮的溶解度，并改善了丹參酮IIA的穩(wěn)定性。在丹參酮干乳劑的有效期內(nèi)，作者將繼續(xù)觀察，為丹參酮干乳劑的貯存與制劑開發(fā)提供依據(jù)。

［1］聶 陽，李苑新，劉 波，等.丹參酮干乳劑的制備及體外溶出度的研究［J］.中成藥，2008，30（6）:831-835.

［2］Hansen T，Holm P，Rohde M，et al.In vivo evaluation of tablets and capsules containing spray-dried o/w-emulsions for oral delivery of poorly soluble drugs［J］.Int J Pharm，2005，293（1-2）:203-211.

［3］楊 征，陳 雅，舒凌玲，等.初勻速法預測霧靈鼻通噴霧劑有效期［J］.中國藥業(yè)，2006，15（11）:35.

［4］李枝端.介紹一種初勻速法熱穩(wěn)定性試驗的估算方法［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2002，22（5）:318.

［5］盧文彪，曾元兒，鐘鏡金，等.丹參制劑中丹參酮IIA的穩(wěn)定性影響因素考察［J］.時珍國醫(yī)國藥，2002，13（1）:7-9.

［6］儲茂泉，古宏晨，劉國杰.丹參酮固體分散物的穩(wěn)定性［J］.華東理工大學學報，2002，28（1）:107-109.