陳文娟， 文永新， 陳月圓， 黃永林， 李典鵬*

（1.廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所，廣西 桂林 541006;2.廣西師范大學生命科學學院，廣西桂林 541004）

全世界苦苣苔科（Gesneriaceae）植物約有140屬，近3 000種，我國有56屬（其中28屬特產(chǎn)我國），約413種［1］。據(jù)中國中藥資源志要記載，苦苣苔科植物多供藥用，具有清熱解毒、解表、祛風、利濕、消腫止痛、止咳、祛痰、溫補養(yǎng)血等功效;對于諸多炎癥、咳喘、疔瘡、風濕、跌打、燙傷、蛇蟲咬傷及婦科疾病有較好療效［2］。

牛耳朵（Chirita eburneaHance）又名石三七、石虎耳，為苦苣苔科唇柱苣苔屬植物，根莖或全草入藥，多年生草本，根粗壯;生于石山，丘陵或山地溪邊，分布于廣西、廣東、湖南、湖北、四川及貴州等地。牛耳朵性味甘、平，有補虛、止咳、止血、除濕的功效［1］。牛耳朵根莖具有清肺、止血、解毒、治肺結核等功用，在廣西民間廣泛用來治療肺結核、高血壓等?。?］。國內外對牛耳朵的化學成分研究較少，僅蔡祥海等［4－6］從牛耳朵乙酸乙酯部位中分離鑒定了5個蒽醌類化合物，7個甾體類化合物，1個具萘醌母核的含氮新化合物和1個三萜化合物;陳文娟等［7］采用GC－MS方法鑒定了牛耳朵乙醇浸膏中的24種脂溶性成分。尚未見有文獻報道牛耳朵正丁醇部位的化學成分，本研究從牛耳朵正丁醇部位分離鑒定了5個苯乙醇苷類化合物并對它們的細胞毒活性進行研究，發(fā)現(xiàn)化合物4、5對人肺癌SPC－A1細胞株具有一定的細胞毒作用，化合物1～5對肝癌HepG2細胞株、胃癌SGC－7901細胞株、人肺大細胞癌NCIH460細胞株都不具有細胞毒性。

1 儀器與材料

核磁共振波譜儀:ΑMX－500 MHz（德國 BRUKER公司），以 TMS為內標;質譜儀:ESQUIRE HCT（美國Bruker.Daltonics公司）;薄層層析硅膠、柱層析硅膠（200～300目）均為青島海洋化工廠產(chǎn)品;常用溶劑均為分析純;肺癌 SPC－A1細胞株、肝癌HepG2細胞株、胃癌SGC－7901細胞株、人肺大細胞癌NCI－H460細胞株均引自中國科學院上海藥物研究所。RPMI－1640（Lot#1120708）GIBCO 公司;MTT（Lot#0793）Amresco公司;小牛血清（Lot#050623）杭州四季青生物工程有限責任公司;樣品于2008年7月采自廣西桂林市雁山鎮(zhèn)，經(jīng)廣西植物研究所韋發(fā)南研究員鑒定為苦苣苔科唇柱苣苔屬植物牛耳朵Chirita eburneaHance。

2 實驗方法

2.1 提取和分離 新鮮牛耳朵10 kg，室內陰干，用75%乙醇加熱回流提取兩次（每次3 h），減壓濃縮，得浸膏700 g。用適量的水溶解浸膏，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮正丁醇萃取液得浸膏200 g。正丁醇部位40 g經(jīng)硅膠，MCI，Diaion HP－20，sephadex LH－20及ODS柱層析反復分離得到化合物1（81.8 mg），化合物2（65.9 mg），化合物3（90.4 mg），化合物 4（88.2 mg），化合物5（95.8 mg）。

2.2 細胞毒活性試驗 MTT法［8］檢測化合物1～5對人肺癌SPC－A1細胞株、肝癌HepG2細胞株、胃癌SGC－7901細胞株、人肺大細胞癌 NCI－H460細胞株的細胞毒性。

3 結構鑒定

化合物1:黃白色無定形粉末，具吸濕性，易溶于甲醇。遇 FeCl3－K3［Fe（CN）6］試劑顯藍色，示為酚性物質。ESI－MSm/z:479［M+H］+。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ:7.59（1H，d，J=16 Hz，H－β″），7.07（1H，d，J=2 Hz，H－2″），6.96（1H，dd，J=2 和 8 Hz，H－6″），6.79（1H，d，J=8 Hz，H－5″），6.69（1H，d，J=2 Hz，H－2），6.67（1H，d，J=8 Hz，H－5），6.56（1H，dd，J=2 和8 Hz，H－6），6.34（1H，d，J=16 Hz，H－α″），5.06（1H，t，J=9 Hz，H－3′），4.42（1H，d，J=8 Hz，H－1′），4.05（1H，m，H－α），3.89（1H，dd，J=2 和 12 Hz，H－6′），3.73（2H，m，H－α 和 H－6′），3.55（1H，t，J=9 Hz，H－4′），3.41（2H，m，H－2′和 H－5′），2.78（2H，m，H2－β）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)和文獻［9］報道的plantainoside Α數(shù)據(jù)一致。故鑒定該化合物為:3，4－二羥基苯乙醇－3－O－咖啡酰基－β－D－葡萄糖苷（plantainoside ?。；衔?的結構圖見圖1。

化合物2:黃白色無定形粉末，具吸濕性，易溶于甲醇。遇 FeCl3－K3［Fe（CN）6］試劑顯藍色，示為酚性物質。ESI－MSm/z:641 ［M+H］+。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ:7.56（1 H，d，J=16 Hz，H－β″），7.17（1H，d，J=8.5 Hz，H－5″），7.09（1 H，d，J=2 Hz，H－2″），6.90（1 H，dd，J=2 和 8.5 Hz，H－6″），6.68（1 H，d，J=2 Hz，H－2），6.65（1 H，d，J=8 Hz，H－5），6.53（1 H，dd，J=2 和 8 Hz，H－6），6.36（1 H，d，J=16 Hz，H－α″），4.89（1 H，d，J=7 Hz，H－1?），4.52（1 H，dd，J=2 和 12 Hz，H－6′），4.34（1 H，d，J=8 Hz，H－1′），4.32（1 H，dd，J=6 和 12 Hz，H－6′），2.79（1 H，t，J=7.5 Hz，H2－β）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)和文獻［10］報道的chiritoside C數(shù)據(jù)一致。故鑒定該化合物為:3，4－二羥基苯乙醇－6－O－葡萄糖咖啡?；拢璂－葡萄糖苷（chiritoside C）?；衔?的結構圖見圖1。

化合物3:黃白色無定形粉末，具吸濕性，易溶于甲醇。遇 FeCl3－K3［Fe（CN）6］試劑顯藍色，示為酚性物質。ESI－MSm/z:479 ［M+H］+。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ:7.58（1 H，d，J=16 Hz，H－β″），7.09（1 H，d，J=2 Hz，H－2″），6.98（1 H，dd，J=2 和8 Hz，H－6″），6.81（1 H，d，J=8.5 Hz，H－5″），6.63（1 H，d，J=2 Hz，H－2），6.60（1 H，d，J=8 Hz，H－5），6.49（1 H，dd，J=2 和 8 Hz，H－6），6.30（1 H，d，J=16 Hz，H－α″），4.81（1 H，dd，J=9 和 8 Hz，H－2′），4.52（1 H，d，J=8 Hz，H－1′），3.99（1 H，m，H－α），3.89（1 H，dd，J=2 和 12 Hz，H－6′），3.72（1 H，dd，J=6 和 12 Hz，H－6′），3.64（1 H，m，H－α），3.59（1H，t，J=9 Hz，H－3′），3.42（1 H，t，J=9 Hz，H－4′），3.32（1H，m，H－5′），2.67（2 H，m，H2－β）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）數(shù)據(jù)見表 1。以上數(shù)據(jù)和文獻［9］報道的plantaninoside B數(shù)據(jù)一致。故鑒定該化合物為:3，4－二羥基苯乙醇－2－O－咖啡?；拢璂－葡萄糖苷（plantaninoside B）?；衔? 的結構圖見圖1。

化合物4:黃白色無定形粉末，具吸濕性，易溶于甲醇。遇 FeCl3－K3［Fe（CN）6］試劑顯藍色，示為酚性物質。ESI－MSm/z:641［M+H］+。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ:7.54（1 H，d，J=16 Hz，H－β″），7.03（1 H，d，J=2 Hz，H－2″），6.94（1 H，dd，J=2 和 8 Hz，H－6″），6.75（1 H，d，J=8 Hz，H－5″），6.70（1 H，d，J=2 Hz，H－2），6.66（1 H，d，J=8 Hz，H－5），6.52（1 H，dd，J=2 和 8 Hz，H－6），4.90（1 H，t，J=9 Hz，H－4′），3.90（1 H，t，J=9 Hz，H－3′），2.75（2 H，m，H2－β）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)和文獻［11］報道的plantamajoside數(shù)據(jù)一致，故鑒定該化合物為:3，4－二羥基苯乙醇－β－D－葡萄糖（1→3）－4－O－咖啡?；拢璂－葡萄糖苷（plantamajoside）。化合物4的結構圖見圖1。

化合物5:黃白色無定形粉末，具吸濕性，易溶于甲醇。遇 FeCl3－K3［Fe（CN）6］試劑顯藍色，示為酚性物質。ESI－MSm/z:479［M+H］+。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ:7.56（1 H，d，J=16 Hz，H－β″），7.04（1 H，d，J=2 Hz，H－2″），6.96（1 H，dd，J=2 和 8 Hz，H－6″），6.79（1 H，d，J=8 Hz，H－5″），6.69（1 H，d，J=2 Hz，H－2），6.68（1 H，d，J=8 Hz，H－5），6.56（1 H，dd，J=2 和 8 Hz，H－6），6.30（1 H，d，J=16 Hz，H－α″），4.84（1 H，t，J=9 Hz，H－4′），4.37（1 H，d，J=8 Hz，H－1′），4.05（1 H，m，H－α），3.71（1 H，m，H－α），2.76（2 H，m，H2－β）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)和文獻［12］報道的（desrhamnosyiverbascoside）數(shù)據(jù)一致。故鑒定該化合物為:3，4－二羥基苯乙醇－4－O－咖啡酰基－β－D－葡萄糖苷（desrhamnosylverbascoside）。化合物5的結構圖見圖1。

圖1 化合物1～5結構圖

表1化合物1～5的13C-NMR數(shù)據(jù)（CD3OD，125 MHz）

（續(xù)表1）

4 細胞毒活性評價

化合物1～5對人肺癌SPC－A1細胞株具有不同程度的抑制作用，化合物4、5對人肺癌SPC－A1細胞株具有弱的細胞毒作用，半抑制濃度（IC50）為207.23、180.34 μmol/L，化合物1 ～3 未顯示細胞毒性（IC50＞300 μmol/L）?；衔?1～5對肝癌HepG2細胞株、胃癌SGC－7901細胞株、人肺大細胞癌NCI－H460細胞株都不具有細胞毒性，其IC50＞300 μmol/L。

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