劉 意， 龍曉英， 何 琳， 曾桂先， 林 雁， 李 婷， 胡宗科

（廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

穿心蓮內(nèi)酯微乳的制備及含量測(cè)定

劉 意， 龍曉英*， 何 琳， 曾桂先， 林 雁， 李 婷， 胡宗科

（廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

穿心蓮內(nèi)酯；微乳；HPLC；含量測(cè)定

目的：制備穿心蓮內(nèi)酯微乳并建立其含量的測(cè)定方法。方法：采用正交設(shè)計(jì)法及偽三元相圖結(jié)果制備穿心蓮內(nèi)酯微乳，含量測(cè)定采用HPLC法，以C18柱為色譜柱，以甲醇-水（55∶45）為流動(dòng)相，穿心蓮內(nèi)酯檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯微乳粒徑為160 nm，穿心蓮內(nèi)酯在10.46～83.68 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 7），平均回收率為99.6%，RSD為1.6%。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯微乳處方組成和制備工藝簡(jiǎn)單，HPLC測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯微乳方法簡(jiǎn)便，可用于穿心蓮內(nèi)酯微乳的含量測(cè)定。

穿心蓮內(nèi)酯為爵床科植物穿心蓮的主要有效成分，具有祛熱解毒，消炎止痛之功效，對(duì)細(xì)菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效。穿心蓮內(nèi)酯化學(xué)結(jié)構(gòu)為二萜類內(nèi)酯化合物，難溶于水，通常僅能口服給藥。若制成微乳制劑可提高溶解度，促進(jìn)藥物在體內(nèi)的吸收，目前尚未見(jiàn)穿心蓮內(nèi)酯微乳制備的相關(guān)文獻(xiàn)。本研究以正交設(shè)計(jì)法結(jié)合偽三元相圖結(jié)果優(yōu)化處方，并建立HPLC法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯微乳含量，根據(jù)藥物與空白微乳的溶解特性，采用甲醇為破乳溶劑，直接以流動(dòng)相稀釋進(jìn)樣，方法簡(jiǎn)便。

1 儀器與試劑、試藥

大連依利特P230型液相色譜儀，P230+型紫外檢測(cè)器，色譜工作站，激光散射粒度分析儀（Mastersizer 2000，英國(guó)Malvern公司）。

穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110797-200307）；空白微乳（自制，批號(hào)20080722）；穿心蓮內(nèi)酯微乳（自制，規(guī)格 40 mg/0.5 g，批號(hào) 20080722，20080723，20080724）。

單亞油酸甘油酯，椰子油甘油酯，GTCC，Cremophor-RH40（德國(guó) BASF），Transcutor P，吐溫 － 20、OP-10、PEG400進(jìn)口分裝。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方研究

按表1選擇不同的油相（A）、乳化劑（B）及助乳化劑（C），比例分別為（1∶1∶1），按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及觀察指標(biāo)見(jiàn)表2。觀察指標(biāo)的選擇中，根據(jù)參考文獻(xiàn)［1］設(shè)計(jì)評(píng)價(jià)考察指標(biāo)，分別以藥物及其油、乳化劑、助乳化劑在體系中的互溶狀況、乳化速度、乳化程度（透光率）、乳化后液面是否有漂浮油層、靜置超過(guò)24 h后是否有藥物析出及程度作為五個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)。將五個(gè)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，分?jǐn)?shù)越高微乳質(zhì)量越好，滿分為100分。藥物與油、乳化劑、助乳化劑的互溶解狀態(tài)占25分完全互溶25分，分層10分；透光率占30分：透光率100% ～95%，30～28分；94% ～80%，27～25分；79% ～50%，25～20分，其余斟情打分。乳化速度占15分：透光率達(dá)平衡的時(shí)間<1 min，15分；1～2 min，12分；2～3 min，8分，其余5分。乳化結(jié)束后液面出現(xiàn)漂浮油層占15分：沒(méi)有油層15分，有油層－10分。靜置>24 h后穩(wěn)定情況占15分：沒(méi)有油水分層和藥物沉淀15分，有分層或藥物沉淀－10分。表2結(jié)果看出，8號(hào)處方總分最高，其組成為單亞油酸甘油酯、吐溫－20與Transcutor P。極差結(jié)果表明，3種因素中油相的影響最大，助乳化劑次之，乳化劑最小。最佳的微乳組成為A3B1（B2）C1，即油相為單亞油酸甘油酯，助乳化劑為T(mén)ranscutor P，而乳化劑則有兩種選擇：Cremophor-RH40和吐溫 －20。A3B2C1為試驗(yàn)號(hào) 8，而A3B1C1不在9個(gè)正交試驗(yàn)中，遂進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。其總分為98.5，與試驗(yàn)號(hào)8相接近，而且吐溫－20原料方便易購(gòu)，故選擇A3B2C1進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

表1 因素水平表

表2 穿心蓮微乳正交表試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果

2.2 偽三元相圖法確定微乳處方

根據(jù)正交設(shè)計(jì)的結(jié)果，以油相（單亞油酸甘油酯）、乳化劑（吐溫20）和助乳化劑（Transcutor P）各為一相，各成分選擇不同的比例（其中乳化劑：助乳化劑的比例分別為Km=1∶9～9∶1）充分混合，加入穿心蓮內(nèi)酯（40 mg/0.5 g），超聲溶解，靜置24 h。將形成均一、透明不分層的處方，在37℃、120 r/min攪拌下滴加到100 mL蒸餾水中，觀察是否形成澄清透明溶液，在相圖中標(biāo)出可以形成微乳的區(qū)域。如圖1陰影部分都可形成微乳，選擇乳化劑用量較低得為最佳處方，其組成為：穿心蓮內(nèi)酯（藥物）、單亞油酸甘油酯、吐溫20、Transcutor P質(zhì)量比為0.4∶3∶0.8∶0.2，單劑量總重量為0.50 g。

圖1 偽三元相圖

2.3 微乳的制備

根據(jù)正交設(shè)計(jì)及偽三元相圖篩選出的處方制備微乳，以藥物-油-乳化劑-助乳化劑=0.4∶3∶0.8∶0.2（質(zhì)量比）稱取，攪拌混勻超聲溶解，靜置24 h，即可得到穿心蓮內(nèi)酯微乳，同法制得不含穿心蓮內(nèi)酯藥物的空白微乳。

2.4 粒度測(cè)定

將最佳處方按照“2.3”項(xiàng)下操作，乳化完全后采用激光粒度儀測(cè)定粒徑，其粒徑分布圖見(jiàn)圖2。平均粒徑160 nm，粒度分布范圍窄，粒徑均勻。

圖2 穿心蓮內(nèi)酯微乳粒徑分布圖

2.5 微乳的含量測(cè)定

2.5.1 溶液的制備 對(duì)照品溶液：精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品10.46 mg，加甲醇溶解定容，制得的對(duì)照品貯備液104.6 μg/mL。

供試品溶液：將穿心蓮內(nèi)酯微乳用甲醇溶解至100 mL量瓶中，超聲破乳，再用甲醇定容。精密移取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容。

空白溶液：將不含穿心蓮內(nèi)酯的空白微乳用甲醇溶解至10 mL量瓶中，超聲破乳，再用甲醇定容。精密量取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容。

2.5.2 色譜條件［2］色譜柱C18柱（4.6 mm×50 mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（55∶45）；檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm；柱溫為室溫；流速為1.0 mL/min。

2.5.3 線性試驗(yàn) 精密移取對(duì)照品貯備液 1，2，3，4，5，6，8 mL至10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋，定容，搖勻制得的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣，記錄色譜峰面積。穿心蓮內(nèi)酯在10.46～83.68 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以峰面積（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）進(jìn)行回歸，得回歸方程 A=42.692C－180.28，r=0.999 7。

2.5.4 專屬性試驗(yàn) 分別取穿心蓮內(nèi)酯微乳及空白微乳，照“2.5.6”項(xiàng)下方法操作后進(jìn)樣測(cè)定，考察輔料對(duì)穿心蓮內(nèi)酯含量測(cè)定的干擾。結(jié)果表明空白微乳對(duì)測(cè)定無(wú)干擾（圖3A、B、C）。

2.5.5 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn) 取41.84 μg/mL的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄穿心蓮內(nèi)酯的峰面積，計(jì)算得RSD為2.0%。取同一批穿心蓮內(nèi)酯微乳（批號(hào)20080722），按上述供試品溶液制備方法制備6份溶液，在上述色譜條件下測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯含量，計(jì)算得穿心蓮內(nèi)酯含量RSD為1.4%。取同一批穿心蓮內(nèi)酯微乳（批號(hào) 20080722）分別在0、2、4、6、8 和 12 h 進(jìn)樣，測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯含量，計(jì)算得穿心蓮內(nèi)酯含量RSD為2.4%。

圖3 穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品、穿心蓮內(nèi)酯微乳、空白微乳HPLC色譜圖

2.5.6 回收率試驗(yàn) 分別精密移取穿心蓮對(duì)照品貯備液2，4，6 mL，至10 mL量瓶中，加入處方量的空白微乳，在上述色譜條件下，進(jìn)行含量測(cè)定，平均回收率為99.6%，RSD為1.6%（n=9）結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品回收率

2.5.7 樣品的測(cè)定 按上述色譜條件對(duì)3批樣品進(jìn)行含量測(cè)定（n=3），結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 穿心蓮微乳含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研制自微乳給藥系統(tǒng)，目的在于增加穿心蓮內(nèi)酯的溶解度，從而提高藥物的生物利用度。以正交設(shè)計(jì)來(lái)篩選油相，乳化劑，助乳化劑方法簡(jiǎn)便快速。從偽三元相圖可看到，可形成微乳區(qū)有9個(gè)，其中選擇乳化劑用量較低得為最佳處方，其組成穿心蓮內(nèi)酯、單亞油酸甘油酯、吐溫20、Transcutor P質(zhì)量比為0.4∶3∶0.8∶0.2，單劑量總重量為0.50 g。

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯，回收率符合分析方法要求，用其作為穿心蓮內(nèi)酯自微乳制劑定量控制是可行的。

［1］丁沐淦，龍曉英，林丹榮.莪術(shù)油自微乳化給藥系統(tǒng)處方設(shè)計(jì)和體外評(píng)價(jià)［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，23（6）：610-614.

［2］張 藝，孟憲麗，賴光榮，等.RP-HPLC測(cè)定穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯含量［J］.中草藥，1995，26（4）：191-192.

R944

B

1001-1528（2010）08-1424-03

2009-12-16

劉 意（1973－），男，博士生，講師，主要從事高分子化學(xué)領(lǐng)域微乳液聚合研究。Tel：13533243599 E-mail：liuyi915@126.com

*通訊作者：龍曉英（1960－），女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事藥物新劑型與新技術(shù)研究。Tel：020-39352559 E-mail：longxy3156@163.com