劉 意， 龍曉英， 何 琳， 曾桂先， 林 雁， 李 婷， 胡宗科

（廣東藥學院，廣東 廣州 510006）

穿心蓮內(nèi)酯微乳的制備及含量測定

劉 意， 龍曉英*， 何 琳， 曾桂先， 林 雁， 李 婷， 胡宗科

（廣東藥學院，廣東 廣州 510006）

穿心蓮內(nèi)酯；微乳；HPLC；含量測定

目的：制備穿心蓮內(nèi)酯微乳并建立其含量的測定方法。方法：采用正交設計法及偽三元相圖結(jié)果制備穿心蓮內(nèi)酯微乳，含量測定采用HPLC法，以C18柱為色譜柱，以甲醇-水（55∶45）為流動相，穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為225 nm。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯微乳粒徑為160 nm，穿心蓮內(nèi)酯在10.46～83.68 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 7），平均回收率為99.6%，RSD為1.6%。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯微乳處方組成和制備工藝簡單，HPLC測定穿心蓮內(nèi)酯微乳方法簡便，可用于穿心蓮內(nèi)酯微乳的含量測定。

穿心蓮內(nèi)酯為爵床科植物穿心蓮的主要有效成分，具有祛熱解毒，消炎止痛之功效，對細菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效。穿心蓮內(nèi)酯化學結(jié)構(gòu)為二萜類內(nèi)酯化合物，難溶于水，通常僅能口服給藥。若制成微乳制劑可提高溶解度，促進藥物在體內(nèi)的吸收，目前尚未見穿心蓮內(nèi)酯微乳制備的相關(guān)文獻。本研究以正交設計法結(jié)合偽三元相圖結(jié)果優(yōu)化處方，并建立HPLC法測定穿心蓮內(nèi)酯微乳含量，根據(jù)藥物與空白微乳的溶解特性，采用甲醇為破乳溶劑，直接以流動相稀釋進樣，方法簡便。

1 儀器與試劑、試藥

大連依利特P230型液相色譜儀，P230+型紫外檢測器，色譜工作站，激光散射粒度分析儀（Mastersizer 2000，英國Malvern公司）。

穿心蓮內(nèi)酯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110797-200307）；空白微乳（自制，批號20080722）；穿心蓮內(nèi)酯微乳（自制，規(guī)格 40 mg/0.5 g，批號 20080722，20080723，20080724）。

單亞油酸甘油酯，椰子油甘油酯，GTCC，Cremophor-RH40（德國 BASF），Transcutor P，吐溫 － 20、OP-10、PEG400進口分裝。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方研究

按表1選擇不同的油相（A）、乳化劑（B）及助乳化劑（C），比例分別為（1∶1∶1），按正交試驗表進行試驗，試驗設計及觀察指標見表2。觀察指標的選擇中，根據(jù)參考文獻［1］設計評價考察指標，分別以藥物及其油、乳化劑、助乳化劑在體系中的互溶狀況、乳化速度、乳化程度（透光率）、乳化后液面是否有漂浮油層、靜置超過24 h后是否有藥物析出及程度作為五個評價指標。將五個指標進行綜合評分，分數(shù)越高微乳質(zhì)量越好，滿分為100分。藥物與油、乳化劑、助乳化劑的互溶解狀態(tài)占25分完全互溶25分，分層10分；透光率占30分：透光率100% ～95%，30～28分；94% ～80%，27～25分；79% ～50%，25～20分，其余斟情打分。乳化速度占15分：透光率達平衡的時間<1 min，15分；1～2 min，12分；2～3 min，8分，其余5分。乳化結(jié)束后液面出現(xiàn)漂浮油層占15分：沒有油層15分，有油層－10分。靜置>24 h后穩(wěn)定情況占15分：沒有油水分層和藥物沉淀15分，有分層或藥物沉淀－10分。表2結(jié)果看出，8號處方總分最高，其組成為單亞油酸甘油酯、吐溫－20與Transcutor P。極差結(jié)果表明，3種因素中油相的影響最大，助乳化劑次之，乳化劑最小。最佳的微乳組成為A3B1（B2）C1，即油相為單亞油酸甘油酯，助乳化劑為Transcutor P，而乳化劑則有兩種選擇：Cremophor-RH40和吐溫 －20。A3B2C1為試驗號 8，而A3B1C1不在9個正交試驗中，遂進行試驗驗證。其總分為98.5，與試驗號8相接近，而且吐溫－20原料方便易購，故選擇A3B2C1進行以下實驗。

表1 因素水平表

表2 穿心蓮微乳正交表試驗設計及試驗結(jié)果

2.2 偽三元相圖法確定微乳處方

根據(jù)正交設計的結(jié)果，以油相（單亞油酸甘油酯）、乳化劑（吐溫20）和助乳化劑（Transcutor P）各為一相，各成分選擇不同的比例（其中乳化劑：助乳化劑的比例分別為Km=1∶9～9∶1）充分混合，加入穿心蓮內(nèi)酯（40 mg/0.5 g），超聲溶解，靜置24 h。將形成均一、透明不分層的處方，在37℃、120 r/min攪拌下滴加到100 mL蒸餾水中，觀察是否形成澄清透明溶液，在相圖中標出可以形成微乳的區(qū)域。如圖1陰影部分都可形成微乳，選擇乳化劑用量較低得為最佳處方，其組成為：穿心蓮內(nèi)酯（藥物）、單亞油酸甘油酯、吐溫20、Transcutor P質(zhì)量比為0.4∶3∶0.8∶0.2，單劑量總重量為0.50 g。

圖1 偽三元相圖

2.3 微乳的制備

根據(jù)正交設計及偽三元相圖篩選出的處方制備微乳，以藥物-油-乳化劑-助乳化劑=0.4∶3∶0.8∶0.2（質(zhì)量比）稱取，攪拌混勻超聲溶解，靜置24 h，即可得到穿心蓮內(nèi)酯微乳，同法制得不含穿心蓮內(nèi)酯藥物的空白微乳。

2.4 粒度測定

將最佳處方按照“2.3”項下操作，乳化完全后采用激光粒度儀測定粒徑，其粒徑分布圖見圖2。平均粒徑160 nm，粒度分布范圍窄，粒徑均勻。

圖2 穿心蓮內(nèi)酯微乳粒徑分布圖

2.5 微乳的含量測定

2.5.1 溶液的制備 對照品溶液：精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品10.46 mg，加甲醇溶解定容，制得的對照品貯備液104.6 μg/mL。

供試品溶液：將穿心蓮內(nèi)酯微乳用甲醇溶解至100 mL量瓶中，超聲破乳，再用甲醇定容。精密移取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，加流動相定容。

空白溶液：將不含穿心蓮內(nèi)酯的空白微乳用甲醇溶解至10 mL量瓶中，超聲破乳，再用甲醇定容。精密量取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，加流動相定容。

2.5.2 色譜條件［2］色譜柱C18柱（4.6 mm×50 mm）；流動相：甲醇-水（55∶45）；檢測波長為225 nm；柱溫為室溫；流速為1.0 mL/min。

2.5.3 線性試驗 精密移取對照品貯備液 1，2，3，4，5，6，8 mL至10 mL量瓶中，用流動相稀釋，定容，搖勻制得的一系列標準溶液，進樣，記錄色譜峰面積。穿心蓮內(nèi)酯在10.46～83.68 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以峰面積（A）對進樣量（C）進行回歸，得回歸方程 A=42.692C－180.28，r=0.999 7。

2.5.4 專屬性試驗 分別取穿心蓮內(nèi)酯微乳及空白微乳，照“2.5.6”項下方法操作后進樣測定，考察輔料對穿心蓮內(nèi)酯含量測定的干擾。結(jié)果表明空白微乳對測定無干擾（圖3A、B、C）。

2.5.5 精密度、重復性和穩(wěn)定性試驗 取41.84 μg/mL的對照品溶液，按上述色譜條件測定，連續(xù)進樣5次，記錄穿心蓮內(nèi)酯的峰面積，計算得RSD為2.0%。取同一批穿心蓮內(nèi)酯微乳（批號20080722），按上述供試品溶液制備方法制備6份溶液，在上述色譜條件下測定穿心蓮內(nèi)酯含量，計算得穿心蓮內(nèi)酯含量RSD為1.4%。取同一批穿心蓮內(nèi)酯微乳（批號 20080722）分別在0、2、4、6、8 和 12 h 進樣，測定穿心蓮內(nèi)酯含量，計算得穿心蓮內(nèi)酯含量RSD為2.4%。

圖3 穿心蓮內(nèi)酯對照品、穿心蓮內(nèi)酯微乳、空白微乳HPLC色譜圖

2.5.6 回收率試驗 分別精密移取穿心蓮對照品貯備液2，4，6 mL，至10 mL量瓶中，加入處方量的空白微乳，在上述色譜條件下，進行含量測定，平均回收率為99.6%，RSD為1.6%（n=9）結(jié)果見表3。

表3 樣品回收率

2.5.7 樣品的測定 按上述色譜條件對3批樣品進行含量測定（n=3），結(jié)果見表4。

表4 穿心蓮微乳含量測定結(jié)果

3 討論

本實驗研制自微乳給藥系統(tǒng)，目的在于增加穿心蓮內(nèi)酯的溶解度，從而提高藥物的生物利用度。以正交設計來篩選油相，乳化劑，助乳化劑方法簡便快速。從偽三元相圖可看到，可形成微乳區(qū)有9個，其中選擇乳化劑用量較低得為最佳處方，其組成穿心蓮內(nèi)酯、單亞油酸甘油酯、吐溫20、Transcutor P質(zhì)量比為0.4∶3∶0.8∶0.2，單劑量總重量為0.50 g。

本實驗采用高效液相色譜法測定穿心蓮內(nèi)酯，回收率符合分析方法要求，用其作為穿心蓮內(nèi)酯自微乳制劑定量控制是可行的。

［1］丁沐淦，龍曉英，林丹榮.莪術(shù)油自微乳化給藥系統(tǒng)處方設計和體外評價［J］.廣東藥學院學報，2007，23（6）：610-614.

［2］張 藝，孟憲麗，賴光榮，等.RP-HPLC測定穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯含量［J］.中草藥，1995，26（4）：191-192.

R944

B

1001-1528（2010）08-1424-03

2009-12-16

劉 意（1973－），男，博士生，講師，主要從事高分子化學領(lǐng)域微乳液聚合研究。Tel：13533243599 E-mail：liuyi915@126.com

*通訊作者：龍曉英（1960－），女，博士，教授，碩士生導師，主要從事藥物新劑型與新技術(shù)研究。Tel：020-39352559 E-mail：longxy3156@163.com