張?zhí)毂?趙 瀅,關(guān)一夫*

(1中國醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院,沈陽 110001；2中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院)

腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是一種主要由單核巨噬細胞產(chǎn)生的多肽細胞因子,其主要生物學活性就是對某些腫瘤細胞的細胞毒作用[1]；表皮生長因子受體(EGFR)是腫瘤細胞增殖、分化和抗凋亡過程中的重要調(diào)節(jié)因子,其高表達可以促進腫瘤細胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移,誘導腫瘤新生血管形成[2]。2009年 1～12月,我們應(yīng)用免疫組織化學方法檢測68例胃癌、癌旁組織及 30例正常胃黏膜組織中兩者的表達情況,探討其與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 胃癌標本均取自中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院胃腸營養(yǎng)外科,其中男 35例、女 33例,年齡 33～72歲,平均 56歲。所有患者術(shù)前均未接受放化療,以全國胃癌病理研究協(xié)作組規(guī)定作為病理診斷和分級標準。癌旁組織為距腫瘤≤1 cm；另取 30例正常胃黏膜組織作為對照組,標本用 4%多聚甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)石蠟切片,厚度 4 μm,常規(guī) HE染色。

1.2 主要試劑 鼠抗人 TNF-α和 EGFR的單克隆抗體購于 Santa Cruz公司；免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 免疫組織化學 采用免疫組織化學 SABC法,第一抗體稀釋倍數(shù):TNF-α為 1∶200,EGFR為1∶100,以 PBS替代第一抗體作為陰性對照。TNF-α和 EGFR陽性細胞表現(xiàn)為呈棕黃色顆粒的陽性反應(yīng)產(chǎn)物,連續(xù)觀察 10個高倍視野,計數(shù)每高倍視野100個細胞中的陽性細胞數(shù),計算其平均值。陽性細胞數(shù) ＜10%為組織表達陰性(-),陽性細胞數(shù)10%～25%為低度表達(+),陽性細胞數(shù) 26% ～50%為中等度表達(++),陽性細胞數(shù) ＞50%為強陽性表達(+++)。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS 13.0軟件處理系統(tǒng)分別進行分析,每組實驗重復(fù) 3～4次,以 P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 TNF-α和 EGFR蛋白的表達情況 TNF-α陽性染色定位于細胞質(zhì),呈棕黃色顆粒,表達較強時為深棕黃色,部分胞膜有著色,陽性細胞由遠癌區(qū)向中心區(qū)呈逐漸增多趨勢。正常胃黏膜、癌旁組織和胃癌組織中 TNF-α的陽性表達率分別為 16.7%(5/30)、33.8%(23/68)及 54.4%(37/68)。 EGFR表達主要分布于細胞膜和細胞質(zhì)。正常胃黏膜、癌旁組織和胃癌組織中 EGFR的陽性表達率分別為6.67%(2/30)、14.7%(10/68)及 51.5%(35/68)。三組 TNF-α、EGFR表達差異顯著(P＜0.05)。

2.2 TNF-α和 EGFR蛋白的表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

2.3 相關(guān)性分析 68例胃癌組織中 TNF-α和 EGFR表達之間呈正相關(guān)(r=0.479,P=0.026)。

3 討論

表1 TNF-α和EGFR的表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

TNF-α是一種多肽激素,對腫瘤細胞具有一定的殺傷作用,并可使腫瘤發(fā)生壞死,具有明顯的抗腫瘤作用 。 TNF主要包括 TNF-α和 TNF-β。 TNF-α與 TNF-β的細胞來源及其蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)雖有差別,但其一級結(jié)構(gòu)有 30%同源,生物學活性也極為相似。TNF-α除介導腫瘤出血壞死,殺傷腫瘤細胞外,還具有誘發(fā)炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和抗病毒等作用[3]。本研究顯示,胃癌組織中較癌旁組織和正常胃黏膜具有較高水平 TNF-α表達,且隨胃癌組織分化程度不同而遞增。原因首先是腫瘤的發(fā)生可誘導體內(nèi)淋巴細胞過度釋放 TNF-α,其次腫瘤細胞自分泌也導致患者的 TNF-α升高[4]。由此推測 TNF-α可通過自分泌和旁分泌過程參與并促進胃癌的發(fā)生發(fā)展,對其監(jiān)測可間接反應(yīng)胃癌的嚴重程度及預(yù)后。胃癌伴遠處轉(zhuǎn)移者 TNF-α顯著提高,提示其在腫瘤轉(zhuǎn)移中參與了一定機制。

EGFR與配體結(jié)合,可以激活酪氨酸激酶信號通路和 PI3K/Akt信號通路,并上調(diào) VEGF和 FGF表達,所以在此通路的過度激活將促進腫瘤的增殖、侵襲性及轉(zhuǎn)移能力[5]。本研究結(jié)果中,胃癌患者EGFR水平顯著高于癌旁組織和正常胃黏膜組織；且胃癌伴遠處轉(zhuǎn)移者 EGFR升高明顯；胃癌 EGFR表達和浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),但和組織學分化無關(guān)。侵至漿膜層并伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中,EGFR表達明顯提高,提示隨著 EGFR表達的進一步增加,可不斷刺激細胞的增殖,從而促進腫瘤的進展及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。上述現(xiàn)象均說明 EGFR參與了胃癌的發(fā)展,EGFR在侵襲漿膜組及具淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達率較高,顯示侵襲力強者 EGFR顯著增加。胃癌的預(yù)后雖然受到多種因素影響,腫瘤的浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無疑對預(yù)后起決定作用[6],EGFR的檢測可作為胃癌發(fā)生發(fā)展和浸潤、轉(zhuǎn)移程度及預(yù)后判斷的一個重要指標。

綜上所述,TNF-α和 EGFR在胃癌中的表達呈正相關(guān),兩者表達水平的聯(lián)合檢測可以作為胃癌診斷、病情分析的一種生物學指標。

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