呂麗娟，劉淑聰，龔寧波，馬林，呂揚(yáng)

（北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院/中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京市 100050）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)從其建立、發(fā)展到今天，在各個(gè)行業(yè)、領(lǐng)域的應(yīng)用中扮演著越來(lái)越重要的角色。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用不僅是確保產(chǎn)品質(zhì)量的基本要求，而且為材料試驗(yàn)和化學(xué)分析等提供了測(cè)量基準(zhǔn)，并確保了測(cè)量方法的溯源性以及可比較性。然而，目前我國(guó)尚缺少賦予不確定度的中藥材有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本論文為該項(xiàng)研究中的部分內(nèi)容，以中藥材為對(duì)象，選擇了絕對(duì)分析方法-重量法-雙人定值，評(píng)定其總灰分測(cè)定結(jié)果的不確定度。

總灰分系指藥材或制劑經(jīng)加熱熾灼灰化后殘留的無(wú)機(jī)物?？偦曳殖幬锉旧硭瑹o(wú)機(jī)鹽（稱(chēng)為生理灰分）外，還包括泥土、砂石等藥材外表黏附的無(wú)機(jī)雜質(zhì)（稱(chēng)為外來(lái)雜質(zhì)）。因此，測(cè)定總灰分的目的主要是控制藥材中泥土、砂土的量，同時(shí)還可以反映藥材生理灰分的量[1]。各國(guó)藥典均收載藥材總灰分的檢查方法，并不得超過(guò)一定的限量，可見(jiàn)總灰分測(cè)定的意義重大。

1 材料

1.1 儀器

SX2.5-10型箱式電阻爐（上海樹(shù)立儀器儀表有限公司）；XS105型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；坩堝（常規(guī)）；干燥器（常規(guī)）。

1.2 試藥

穿山龍（產(chǎn)地河北）、梔子（產(chǎn)地江西）、夏枯草（產(chǎn)地山西），經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所馬林教授鑒定，分別為薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Makino的干燥根莖、茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí)、唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。

中藥材樣品均經(jīng)凈制、粉碎、過(guò)篩處理，其中穿山龍樣品過(guò)65目篩，梔子樣品過(guò)65目篩，夏枯草樣品過(guò)24目篩。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

雙人（甲、乙）獨(dú)立操作。分別精密稱(chēng)取供試中藥材標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.3 g，共10份，置熾灼至恒重的坩鍋中，稱(chēng)定質(zhì)量，緩慢熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)|(zhì)量，計(jì)算供試品中總灰分的含量（%）。如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2 mL，使殘?jiān)鼭駶?rùn)，然后置水浴上蒸干，殘?jiān)涨胺胱?，至坩堝?nèi)容物完全灰化[2，3]。

2.2 測(cè)量數(shù)據(jù)的檢驗(yàn)（以穿山龍為例計(jì)算說(shuō)明）

各中藥材標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的總灰分測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)灰分含量測(cè)定得到的甲、乙2組各10個(gè)值，經(jīng)格拉布斯（Grubbs）法檢驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)可疑值。然后進(jìn)行2次獨(dú)立檢測(cè)數(shù)據(jù)的t檢驗(yàn)。

表1 3種中藥材總灰分測(cè)定結(jié)果Tab 1 Results of total ash value of 3 kinds of Chinese herbal medicines

查t分布雙側(cè)分位數(shù)表知：當(dāng)f＝18、α＝0.05時(shí)，t＝2.101。說(shuō)明2次獨(dú)立檢測(cè)數(shù)據(jù)的t值均小于臨界值，表明2次獨(dú)立檢測(cè)數(shù)據(jù)無(wú)顯著性差異。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)值確定（以穿山龍為例計(jì)算說(shuō)明）

將20個(gè)值求得的總平均值作為該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的總灰分標(biāo)準(zhǔn)值，則穿山龍標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的總灰分標(biāo)準(zhǔn)值為1.7167%。

2.4 不確定度評(píng)定的數(shù)學(xué)模型[4～7]

不確定度的來(lái)源涉及測(cè)量的人員、環(huán)境、方法及器具等，總灰分的測(cè)定采用重量法，在標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的條件下，溫度、濕度等影響可忽略；測(cè)試過(guò)程（包括人員操作等）的隨機(jī)效應(yīng)、被檢樣品的非均勻性和稱(chēng)量的變動(dòng)性等均體現(xiàn)在測(cè)量的重復(fù)性中；天平校準(zhǔn)的不確定度可以從檢定證書(shū)中獲得；恒重主要影響灰分的質(zhì)量，即m1，可加入到相應(yīng)的質(zhì)量分量中。m1、m2、m3均稱(chēng)量一次而得，因此，考慮中藥材的總灰分測(cè)定中不同因素的影響和重復(fù)性的影響，建立數(shù)學(xué)模型為：

式中，x為中藥材總灰分含量（g·g-1）；m1為恒重坩堝和灰分的質(zhì)量（g）；m2為恒重坩堝的質(zhì)量（g）；m3為恒重坩堝和中藥材樣品的質(zhì)量（g）。

2.5 不確定度計(jì)算（以穿山龍為例計(jì)算說(shuō)明）

2.5.2 均勻性產(chǎn)生的不確定度 隨機(jī)抽取裝有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的安瓿15支（每支1 g），以0.3 g為取樣量，每支取樣3份，同法測(cè)定總灰分，利用單因素方差分析進(jìn)行樣品均勻性檢驗(yàn)，3種中藥材均勻性檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3種中藥材均勻性檢驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of uniformity test of 3 kinds of Chinese herbal medicines

其中，MS組間為組間均方；MS組內(nèi)為組內(nèi)均方；SS組間為組間離差平方和；SS組內(nèi)為組內(nèi)離差平方和；ν組間為組間自由度；ν組內(nèi)為組內(nèi)自由度。

因此，由均勻性產(chǎn)生的不確定度（SH）按照《國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織指南35》規(guī)定，按照公式：

2.5.3 穩(wěn)定性產(chǎn)生的不確定度 由長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察可知，斜率的不確定度S（b1）用下式計(jì)算：

3種中藥材的穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 3種中藥材穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果Tab 3 Results of stability test of 3 kinds of Chinese herbal medicines

2.5.4 相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc（x）

2.5.5 擴(kuò)展不確定度U（x）U（x）＝kuc（x），k取2，U（x）＝2×0.07048%＝0.1410%，P＝95%。

2.5.6 結(jié)果表示 穿山龍標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的灰分值為：（1.72±0.15）%，k＝2，P＝0.95。同理，梔子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及夏枯草標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的灰分值分別為：（4.82±0.21）%和（9.39±0.39）%。3種中藥材總灰分測(cè)定不確定度分量匯總見(jiàn)表4。

表4 3種中藥材總灰分測(cè)定不確定度分量匯總Tab 4 Uncertainty of total ash of 3 kinds of Chinese herbal medicines

3 討論

灰分測(cè)定是對(duì)中藥材的雜質(zhì)進(jìn)行檢查的一種方法，對(duì)于中藥材及以藥材粉末直接入藥或?yàn)樵系闹兴幹苿┻M(jìn)行灰分檢測(cè)，對(duì)控制中藥及其制劑質(zhì)量、確保用藥安全有效都有積極意義。

有些中藥材生理灰分差異較大，特別是組織中含草酸鈣較多的藥材，需要測(cè)定酸不溶性灰分，從而更準(zhǔn)確地反映出外來(lái)雜質(zhì)的量。

由表4可見(jiàn)，測(cè)量不確定度分量對(duì)評(píng)定結(jié)果的總不確定度影響較大，樣品均勻性次之，樣品穩(wěn)定性最小。故而，應(yīng)從減少稱(chēng)量誤差方面著手以提高測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究方法簡(jiǎn)便、可行，在中藥材整體質(zhì)量控制方面具有參考價(jià)值，同時(shí)也為中藥材有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制提供了基礎(chǔ)研究結(jié)果。

[1]劉文英主編.藥物分析[M].第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：422.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄48.

[3]楊 輝.關(guān)于2005年版《中國(guó)藥典》（一部）附錄灰分測(cè)定法中操作方法的探討[J].中國(guó)藥房，2007，18（7）：547.

[4]全國(guó)法制計(jì)量技術(shù)委員會(huì)編.JJF1059-1999測(cè)量不確定度評(píng)定與表示[S].1999：1566.

[5]中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)編.CNAS-GL06化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[S].2006：7.

[6]Leung KSY，Chan CL，Lau ACK，et al.Measurement uncertainty for total ash and acid-insoluble ash determination of Chinese materia medica[J].Accred Qual Assur，2005，10（6）：289.

[7]朱 嵐，魯 波，劉廣輝.重量分析測(cè)量不確定度評(píng)定的探討[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2005，21（6）：761.