原發(fā)性高血壓(essential hypertension, EH)是臨床常見(jiàn)的心血管疾病之一，高血壓是多種心腦血管疾病的重要病因和危險(xiǎn)因素。炎癥在高血壓病中的作用和地位已愈加受到重視。炎癥與高血壓互為因果、相互影響，是一個(gè)惡性循環(huán)的關(guān)系[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)黃連解毒湯具有良好的抗菌、消炎、提高免疫功能等作用，目前自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneity hypertension rat，SHR)為國(guó)際公認(rèn)的最接近于人類原發(fā)性高血壓的動(dòng)物模型，研究幼齡SHR可以更好的了解內(nèi)皮功能和炎性情況，因此我們本研究以幼齡SHR為研究對(duì)象，以黃連解毒湯為施加因素，觀察幼齡SHR血漿中與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)和單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)水平，內(nèi)皮功能變化，并觀察黃連解毒湯治療對(duì)幼齡SHR hs-CRP、MCP-1和vWF的水平的影響，探討黃連解毒湯對(duì)炎性因子的影響和內(nèi)皮的作用。

1 材料與方法

1.1 藥物制備

黃連解毒湯由黃連、黃芩、黃柏、梔子按3∶2∶2∶3 比例組成。其藥材均購(gòu)于廣西中醫(yī)學(xué)院附屬瑞康醫(yī)院藥劑科，專人負(fù)責(zé)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，煎煮取汁，濃縮成清膏，1 g清膏相當(dāng)于1.5 g 黃連解毒湯生藥。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用雄性6周自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)16只、雄性6周正常血壓Wistar-Kyoto 大鼠(WKY)8只，體重80～130 g。SHR購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK(京) 2006-0009。WKY購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào)：SCXK(桂)2006-0003。

1.3 試劑及儀器

hs-CRP、CMP-1和vWF試劑盒，武漢中美科技有限公司生產(chǎn)；BP-6大鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)試儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)；MK3酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo生產(chǎn)；1575洗板機(jī)，美國(guó)BIO-RAD生產(chǎn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組

SHR隨機(jī)分為黃連解毒湯組、模型組，每組8只。WKY大鼠為空白對(duì)照組。黃連解毒湯組：黃連解毒湯清膏蒸餾水稀釋1倍，每日上午9時(shí)按10ml/(kg·d)灌胃。模型組和對(duì)照組：每日同時(shí)按10 ml/(kg·d)蒸餾水灌胃。每日1次，連續(xù)給藥6周。

1.5 數(shù)據(jù)采集

1.5.1 血壓測(cè)量 分別于給藥前及給藥后1、2、4、6周，測(cè)量大鼠安靜清醒狀態(tài)下尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)。每只鼠連續(xù)測(cè)量SBP 3次，間隔60 秒，取其平均值。

1.5.2 樣品采集與測(cè)定 大鼠給藥6周后，用2%戊巴比妥鈉(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血6ml，按3000r/min離心10 分鐘，用于hs-CRP、CMP-1和vWF水平檢測(cè)。標(biāo)本均置于-20℃冰箱保存待測(cè)。測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)， hs-CRP產(chǎn)品編號(hào)為E0821r，CMP-1產(chǎn)品編號(hào)為E0087r， vWF產(chǎn)品編號(hào)為E0833r，操作步驟均嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)，兩組數(shù)據(jù)間的比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，組內(nèi)為配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)幼齡SHR血壓的影響

正常情況下6周幼齡大鼠的血壓仍然處于自發(fā)性初始升高的階段。我們觀察結(jié)果如表1所示：與對(duì)照組比較，治療前模型組和黃連解毒湯組SHR與對(duì)照組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；隨著鼠齡的增長(zhǎng)模型組呈現(xiàn)血壓進(jìn)行性增高，第2周時(shí)表現(xiàn)出血壓顯著升高(P<0.05)，第6周時(shí)血壓及其顯著升高(P<0.01)；而黃連解毒湯組能降低大鼠進(jìn)行性血壓增高的趨勢(shì)，第2周血壓升高(P<0.05)，第4周時(shí)血壓恢復(fù)至對(duì)照組同等水平(P>0.05)。與同時(shí)間段模型組比，黃連解毒湯組在給藥第4周后對(duì)SHR產(chǎn)生了顯著的降壓作用(P<0.05)。與本組治療前比較，黃連解毒湯組血壓前后變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.2 黃連解毒湯對(duì)幼齡SHR大鼠hs-CRP、MCP-1、vWF的影響

由表2結(jié)果所示，與空白組比，模型組hs-CRP，vWF顯著升高(P<0.01)，CMP-1無(wú)顯著變化，表明SHR存在炎性反應(yīng)和內(nèi)皮功能不全。與模型組比，黃連解毒能夠顯著降低血漿hs-CRP、vWF(P<0.05)含量。

表1 實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠血壓比較

注：與同時(shí)間段空白對(duì)照組比,aP<0.05，bP<0.01；與同時(shí)間段模型組比,cP<0.05

表2 實(shí)驗(yàn)后各組大鼠血漿hs-CRP、MCP-1、vWF的變化

注：與空白對(duì)照組比：aP<0.01；與模型對(duì)照組比：bP<0.05；取標(biāo)本時(shí)，模型組損失1只。

3 討論

自發(fā)性高血壓大鼠心血管疾病發(fā)生率高，其心血管疾病發(fā)病機(jī)制、高血壓心血管并發(fā)癥、外周血管阻力變化、對(duì)鹽的敏感性等多方面都與人類高血壓患者相似。該種大鼠出生后3～4周血壓開(kāi)始升高，12～24周時(shí)達(dá)到高峰，因此出生后4～12周是血壓持續(xù)升高的重要階段。黃連解毒湯由黃連、黃芩、黃柏、梔子4味中藥按比例配伍組成，其中以黃連瀉心火、兼瀉中焦之火為君；黃芩清肺熱、瀉上焦之火為臣；黃柏瀉下焦之火，梔子通瀉三焦之火，導(dǎo)熱下行，合為佐使，共以收瀉火解毒之功，無(wú)論內(nèi)服、外服，均有良好的治療作用。黃連解毒湯及其配伍成分在心血管疾病的防治中起著越來(lái)越重要的作用，在臨床上已用于高血壓等心血管疾病的治療[2]。本研究以6周齡SHR為研究對(duì)象，目的在于考察黃連解毒湯對(duì)自發(fā)性高血壓的預(yù)防作用，從而體現(xiàn)中醫(yī)“治未病”的優(yōu)勢(shì)。

本研究表明SHR從第6 周到第12周與同齡WKY大鼠比，血壓呈進(jìn)行性增高，與模型組比較，黃連解毒湯組能抑制幼齡SHR血壓進(jìn)行性增高，表明該方能控制幼齡SHR血壓的上升，對(duì)自發(fā)性高血有一定的預(yù)防作用。

近年研究發(fā)現(xiàn)，EH的炎性反應(yīng)性主要表現(xiàn)在炎性因子對(duì)血管內(nèi)皮功能的影響。血管內(nèi)皮可分泌多種血管活性物質(zhì)如內(nèi)皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)和vWF。其中vWF主要由上皮細(xì)胞合成且儲(chǔ)存于weibel-palade小體中[3]。當(dāng)血管內(nèi)皮受損時(shí)，Weibel-Palade小體發(fā)生變形性損害，vWF被釋放，血漿中vWF水平升高，因此，血漿vWF是反映血管內(nèi)皮細(xì)胞受損的重要指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，vWF在12周齡SHR血漿中含量較空白對(duì)照組明顯增加(P<0.05)，說(shuō)明在SHR在血壓達(dá)到高峰前已發(fā)生內(nèi)皮損傷，應(yīng)用黃連解毒湯之后，vWF較模型組顯著降低(P<0.05)，說(shuō)明黃連解毒湯有可能能夠預(yù)防SHR內(nèi)皮受損從而降低了vWF。

內(nèi)皮受損所致的高血壓與C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)參與的炎性反應(yīng)密切相關(guān)[4]。CRP對(duì)炎癥的反應(yīng)，實(shí)際上是炎癥反應(yīng)過(guò)程中各種細(xì)胞因子信號(hào)的一種放大。Bautista等[5]2001年首次明確血清CRP是高血壓的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。高濃度CRP可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、遷移、動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成、發(fā)展，導(dǎo)致血管重構(gòu)、循環(huán)阻力增加。多項(xiàng)大型研究顯示超敏C反應(yīng)蛋白作為一種炎性生物標(biāo)志是心血管事件的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，同時(shí)能預(yù)測(cè)高血壓和心血管事件發(fā)生[6]。本研究中，hs-CRP在12周齡SHR中明顯高于空白對(duì)照組，有顯著的差異(P<0.05)，與其有高血壓預(yù)測(cè)作用相一致。應(yīng)用黃連解毒湯能降低hs-CRP，與模型組比較有顯著差異(P<0.05)。

MCP-1是炎癥的始動(dòng)因子及標(biāo)志[7]。在MCP-1誘導(dǎo)下，單核細(xì)胞粘附于內(nèi)皮表面，表達(dá)細(xì)胞因子參與并擴(kuò)大炎癥反應(yīng)，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加使血液中的脂質(zhì)易于沉積在內(nèi)膜，此亦為As發(fā)生的早期關(guān)鍵環(huán)節(jié)。然而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組相比，12周齡地SHR血漿中MCP-1水平有升高趨勢(shì)，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)意義。應(yīng)用黃連解毒湯對(duì)幼齡SHR血漿的MCP-1也無(wú)明顯影響。推測(cè)是否與治療的時(shí)間等有關(guān)，是否改變局部組織的炎性反應(yīng)亦有待研究。

總之，本研究表明SHR在血壓達(dá)到高峰前已存在內(nèi)皮功能不全，部分炎性反應(yīng)，早期應(yīng)用黃連解毒湯能預(yù)防內(nèi)皮損傷，減輕炎性反應(yīng)。通過(guò)早期抗炎和保護(hù)內(nèi)皮干預(yù)，不僅僅有利于血壓自身的好轉(zhuǎn)，更有利于控制其并發(fā)癥，本研究考察黃連解毒湯對(duì)大鼠自發(fā)性高血壓的預(yù)防作用，與中醫(yī)“治未病”相符，對(duì)有明顯高血壓家族史的人群提前預(yù)防高血壓有重要意義，這也為中醫(yī)藥抗高血壓治療策略提供了新的思路。關(guān)于黃連解毒湯具體的保護(hù)內(nèi)皮功能、抗炎作用機(jī)制尚待今后深入的研究。

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