林瑞慶，張 媛，朱興全

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730046；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510642)

食道口線蟲病(Oesophagostomiasis)是由屬于圓形目(Strongyloidea)的食道口屬(Oesophagostomum)的多種線蟲寄生于動物腸道所引起，因有些種的幼蟲在腸壁內(nèi)形成結(jié)節(jié)狀病變，故有“結(jié)節(jié)蟲”之稱。食道口線蟲通常只在反芻動物、豬和猴子中發(fā)現(xiàn)，但也有感染人的報(bào)道，特別是在非洲的某些地區(qū)，有很高的感染率[1-2]。目前，該病在我國各地牛、羊、豬中普遍存在，給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成較大經(jīng)濟(jì)損失。因此，對食道口線蟲的研究，除對畜牧業(yè)生產(chǎn)有重要意義外，也具有重要的公共衛(wèi)生的意義。

1 食道口線蟲的種類

食道口線蟲寄生于多種動物的腸道，已報(bào)道的食道口線蟲有多種[1-4](表1)。此外，還有約氏食道口線蟲(O.yorkei)、辛氏食道口線蟲(O.simpsoni)、奧氏食道口線蟲(O.oldi)等寄生于疣豬、馬羚等其它一些動物或比較少見的蟲種。

2 病毒培養(yǎng)

食道口線蟲的生活史比較簡單和直接，以豬的有齒食道口線蟲為例，成熟雌蟲產(chǎn)出的蟲卵隨糞便排出體外，在合適條件下1 d～2 d孵出幼蟲，發(fā)育成自由生活的第1期幼蟲(L1)和第2期幼蟲(L2)，以糞便中營養(yǎng)物質(zhì)和細(xì)菌為食，發(fā)育成帶鞘的第3期感染性幼蟲(L3)，豬吞食了感染性幼蟲而感染。幼蟲發(fā)育合適的溫度是15℃～20℃，但研究表明，在低至10℃或高至25℃也能成功發(fā)育[5]。感染性幼蟲在小腸蛻鞘，后移行至大腸；在大腸里，幼蟲侵入腸粘膜導(dǎo)致病變。L3幼蟲在腸粘膜里蛻皮發(fā)育至第4期幼蟲(L4)，并刺激宿主產(chǎn)生免疫反應(yīng)，形成結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)中聚集中性粒細(xì)胞和酸性粒細(xì)胞；6 d～17 d后，L4幼蟲返回腸腔，蛻皮成第5期幼蟲，最后發(fā)育成為成蟲。人體感染雙叉食道口線蟲要復(fù)雜一些，雙叉食道口線蟲除了這種直接的生活史方式外，豬作為貯藏宿主起了重要作用，由于豬的食糞習(xí)慣吞入雙叉食道口線蟲幼蟲后又排出體外，在人的食道口線蟲病感染流行中有重要意義[6]。

表1 常見食道口線蟲蟲種及其宿主Table 1 Oesophagostomum species and their hosts

研究表明，有齒食道口線蟲和四棘食道口線蟲的潛伏期在17 d～20 d之間，但早期的一些研究以及許多教科書顯示，食道口線蟲的潛伏期在5周～7周之間。對于這種變化有許多解釋，比如，不同蟲株的差異，不同感染劑量的差異，蟲體的相互作用，豬的日齡不同，宿主的免疫反應(yīng)等以及一些未明的因素影響。雖然沒有專門的實(shí)驗(yàn)研究解釋這種明顯縮短的潛伏期，但有學(xué)者認(rèn)為，在過去幾十年里，由于養(yǎng)豬業(yè)飼養(yǎng)方式的改變，早期斷奶、分欄及成長周期變短以及抗蠕蟲藥的應(yīng)用，這些生存壓力，促使食道口線蟲向縮短的潛伏期進(jìn)化；早期的實(shí)驗(yàn)方法的敏感性以及采樣時(shí)間也可能影響結(jié)果，目前的研究要求感染15 d～16 d后應(yīng)每天采樣檢驗(yàn)[7]。此外，一些研究表明，食料成份的不同也有一定的影響，高纖維食物比低纖維食物更易導(dǎo)致食道口線蟲短的潛伏期及高的蟲卵排出量；由于寄生蟲依賴于宿主的營養(yǎng)物質(zhì)，禁食的豬荷蟲量和蟲卵排出量明顯下降[8]。要清楚潛伏期影響的因素，還需更多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)和分析。

有研究表明，感染蟲體的密度影響食道口線蟲的發(fā)育，與高劑量的感染相比，低劑量感染會有更長的潛伏期和更少的蟲卵排出量，而且蟲體會更小[9-10]。

宿主對食道口線蟲蟲體的免疫反應(yīng)是有限的，雖然可檢測到特異性抗體，但針對寄生蟲抗原的抗體依賴的細(xì)胞毒性作用很弱；對于蟲體的限制生長作用，有學(xué)者認(rèn)為是免疫反應(yīng)，但這也可能是一種非特異的宿主反應(yīng)；包圍住幼蟲形成肉芽腫的細(xì)胞主要是巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及CD4+淋巴細(xì)胞，由于缺乏肥大細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞，因此這些細(xì)胞并不能有效地保護(hù)宿主[7]。不管這些免疫反應(yīng)效果如何，研究顯示，比起有齒食道口線蟲，宿主對四棘食道口線蟲的反應(yīng)要強(qiáng)烈一些[11]。

3 形態(tài)學(xué)鑒定

食道口線蟲在分類上屬夏柏特科(Chabertiidae)，該科的成員雄蟲交合傘發(fā)達(dá)，背肋中部分兩支，每支再分小支，雌蟲具有J形的排卵器；食道口屬線蟲有的種有側(cè)翼膜，使蟲體前端呈彎鉤狀，口囊多呈短圓柱狀，口領(lǐng)上有6個(gè)環(huán)口乳突，有頭泡和頸溝，有頸乳突等特征[12-13]。對于成蟲，可根據(jù)宿主及不同的形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行鑒定，如對于牛、羊常見的幾種食道口線蟲，可根據(jù)其頭泡、頸泡、側(cè)翼膜及頸乳突等指標(biāo)去鑒別；對于寄生于豬的最常見的有齒食道口線蟲和四棘食道口線蟲，可根據(jù)雌蟲的尾長及雄蟲的交合刺長度、口囊和食道球特點(diǎn)等區(qū)分，而對于蟲卵和自由生活的幼蟲時(shí)期，要從形態(tài)學(xué)上區(qū)分很困難，L3和L4期幼蟲雖然形態(tài)上有一定差別，但仍然不易鑒定；有報(bào)道可借助計(jì)算機(jī)對各指標(biāo)進(jìn)行分析從而鑒定這兩種不同的食道口線蟲[14]。

食道口線蟲的分類主要是依靠成蟲的形態(tài)學(xué)特征，但相對簡單的身體形態(tài)以及相互重疊的一些分類指標(biāo)導(dǎo)致了分類學(xué)上的爭議。在20世紀(jì)早期，對于感染人的食道口線蟲的分類仍然不能確定，如1911年鑒定的梨口食道口線蟲(O.apiostomum)，后來被歸為雙叉食道口線蟲或尖尾食道口線蟲；布氏食道口線蟲(O.brumpti)和雙叉食道口線蟲被認(rèn)為是同蟲異名或兩個(gè)種；對于感染北非多哥和加納非人靈長類的食道口線蟲與感染人的食道口線蟲是否代表同一個(gè)種仍存在爭議[15]。

蟲卵檢查是傳統(tǒng)的寄生蟲學(xué)診斷方法，但圓形目中許多種的蟲卵形態(tài)上是難以區(qū)分的，例如，食道口線蟲、鉤蟲、毛圓線蟲、縮小三齒線蟲等的蟲卵形態(tài)學(xué)相同或相近，這限制了疾病的診斷。糞便培養(yǎng)蟲卵發(fā)育成L3期幼蟲可以鑒定蟲種，但這不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且也需要一定的實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)力量。

4 食道口線蟲分子鑒定和分子遺傳學(xué)研究

對寄生蟲進(jìn)行準(zhǔn)確的分類鑒定，是一切寄生蟲學(xué)研究的基礎(chǔ)。傳統(tǒng)方法是以形態(tài)學(xué)特征來鑒別線蟲，其方法簡單易行，對成蟲有一定的準(zhǔn)確性；但對于形態(tài)上相似的或難于區(qū)別的發(fā)育期，特別是對蟲卵和幼蟲階段的蟲體，形態(tài)學(xué)方法有時(shí)顯然具有局限性。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，基于PCR的分子生物學(xué)技術(shù)在寄生蟲的分類鑒定上取得了一定的進(jìn)展。

Gasser等采用PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-SSCP)分析發(fā)現(xiàn)，來自非洲人及Mona猴的雙叉食道口線蟲種群的個(gè)體所具有的ITS-2核糖體DNA列陣在不同的序列變異體已部分或完全均一化[16]。研究表明，以ITS(Internal transcribed spacer(為遺傳標(biāo)記，結(jié)合PCR-SSCP技術(shù)可對有齒食道口線蟲和四棘食道口線蟲進(jìn)行鑒定和序列多態(tài)性研究[17-18]。鑒于PCR-SSCP技術(shù)需要應(yīng)用同位素，具有一定的生物安全性問題，有對PCR-SSCP方法進(jìn)行了改進(jìn)應(yīng)用于有齒食道口線蟲和四棘食道口線蟲的研究，該方法不使用同位素標(biāo)記，而以溴化乙錠染色來觀察結(jié)果，避免了同位素的使用和X光片顯影、定影等繁復(fù)步驟[19]。Cutillas等應(yīng)用同功酶方法，能區(qū)別有齒食道口線蟲和四棘食道口線蟲。以PCR-RFLP方法，擴(kuò)增ITS-2片段后用用13種內(nèi)切酶進(jìn)行酶切反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)切酶Sau3AI可以區(qū)分出這兩種食道口線蟲[20]；Lin等以另一種更常見的內(nèi)切酶PstⅠ建立了有齒食道口線蟲和四棘食道口線蟲的PCR-RFLP方法[18]。由于人的雙叉食道口線蟲與美洲板口線蟲的某些生長期在形態(tài)上難以區(qū)別，Romstad等以ITS-2為基因標(biāo)記，建立了PCR鑒定方法用于這兩種線蟲病的鑒別診斷[21]；Newton等也建立了PCR鑒定方法用于有齒食道口線蟲和四棘食道口線蟲的鑒別診斷[22]。

線粒體基因組(mtDNA)作為一種核外遺傳物質(zhì)，與核DNA相比，具有分子量小、結(jié)構(gòu)簡單、進(jìn)化速度快、母系遺傳等特點(diǎn)，適宜群體遺傳學(xué)和進(jìn)化生物學(xué)研究。研究表明，細(xì)胞色素c氧化酶亞基Ⅰ基因(cox1)可應(yīng)用于來源于人類和非人靈長類動物的雙食道口線蟲遺傳變異的研究[23]。這些研究為食道口線蟲各個(gè)發(fā)育期的分子檢測、遺傳變異、鑒別診斷及流行病學(xué)調(diào)查等奠定了基礎(chǔ)。

食道口線蟲也存在著一些分類學(xué)上的問題，有些國內(nèi)教科書將食道口線蟲歸于夏柏特科、毛線科、盅口科或食道口科；國外的文獻(xiàn)報(bào)道食道口線蟲歸于夏柏特科[13]。基于形態(tài)學(xué)的進(jìn)化關(guān)系分析是值得推敲的；夏柏特科屬以下分類也引起爭議，以ITS序列分析夏柏特線蟲的進(jìn)化關(guān)系表明，綿羊夏柏特線蟲(C.ovina)歸于食道口線蟲一類，這結(jié)果與原來的分類不符，這意味著要么綿羊夏柏特線蟲歸于食道口線蟲，要么食道口線蟲里面的線蟲可能不只代表一個(gè)屬，而食道口屬線蟲傳統(tǒng)上可分為食道口亞屬、布氏亞屬、孔奴微亞屬、呼特亞屬、伊列亞屬和波羅特亞屬等。屬于布氏亞屬的輻射食道口線蟲，分析結(jié)果明顯有別于綿羊夏柏特線蟲和其它食道口線蟲[3,13]。要解決食道口屬的分類和遺傳變異的一些未清楚的問題，需要更多的研究數(shù)據(jù)加以分析。

5 食道口線蟲病的診斷和防治

動物感染食道口線蟲通常病情較輕微，引起食欲下降，生長率降低，飼料轉(zhuǎn)化率低。初次感染時(shí)，很少發(fā)生結(jié)節(jié)，重復(fù)感染或嚴(yán)重感染，才產(chǎn)生大量結(jié)節(jié)，發(fā)生結(jié)節(jié)性腸炎；并發(fā)或繼發(fā)其它疾病，則會引起死亡。人感染食道口線蟲會引起腸道結(jié)節(jié)、腸道膿腫以及皮下囊腫等病變，常有合并或繼發(fā)感染，嚴(yán)重的可致死亡。診斷可結(jié)合臨床癥狀，以傳統(tǒng)方法通過糞檢法檢查蟲卵；蟲卵不易鑒別時(shí)，可培養(yǎng)檢查幼蟲。剖檢動物發(fā)現(xiàn)蟲體和結(jié)節(jié)性病灶即可確診，人的食道口線蟲病也可通過ELISA等免疫學(xué)方法檢測[2]。

藥物防治是控制食道口線蟲的主要手段，食道口線蟲病常用藥物是左旋咪唑、噻嘧啶、苯丙達(dá)唑和氟苯達(dá)唑等。但寄生蟲抗藥性的產(chǎn)生已是一個(gè)全球性問題，一些研究表明，不同的食道口線蟲對藥物的反應(yīng)存在差異，但對這些常用藥物均已不同程度地產(chǎn)生了耐藥性[24-25]。

人食道口線蟲的感染只是在非洲一些地區(qū)呈地方性流行，它的流行和傳播方式目前還不是十分清楚。豬等貯藏宿主可能對該病的傳播起到重要作用，而靈長類則并非作為保蟲宿主起作用。藥物防治、良好的衛(wèi)生習(xí)慣及宣傳教育等綜合措施將會起到明顯控制效果。

6 結(jié)束語

屬于食道口屬的線蟲有多種，有些在家畜中感染率高，給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成較大損失，有些是對人致病，造成地方性流行，對其有效的控制，對保障畜牧業(yè)發(fā)展和人類的健康都有重要意義。寄生蟲的許多研究包括對其預(yù)防控制的基礎(chǔ)是對蟲種的分類鑒定，食道口線蟲種類多，分類地位存在不明確的地方，傳統(tǒng)的分類鑒定方法有局限性，需要借助分子生物學(xué)等方法進(jìn)一步研究和分析。由于全球性寄生線蟲的耐藥性問題，調(diào)控寄生線蟲的生殖發(fā)育，用相應(yīng)的生物分子學(xué)技術(shù)阻斷性別特異基因的表達(dá)，從而達(dá)到控制寄生蟲病的目的這種構(gòu)想引起科學(xué)家越來越多的關(guān)注。有齒食道口線蟲由于具有簡單直接的生活史，能夠體外生長和培養(yǎng)，比起其它圓形目的線蟲，能在體外培養(yǎng)較長的時(shí)間，并且不需手術(shù)而通過直腸移植至宿主，所有這些特點(diǎn)，使其具有可操作性而成為潛在的寄生蟲線蟲功能基因組學(xué)的研究模型。因此，對食道口線蟲的認(rèn)識和研究，有助于我們更好防制該寄生蟲引起的疾病以及應(yīng)用這個(gè)模型研究寄生線蟲的功能基因。

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