付 蓉 李莉娥 覃 琨 程延軍

(1.武漢大學藥學院,武漢 430072;2.宜昌人福藥業(yè)有限責任公司,湖北 宜昌 443005)

鹽酸瑞芬太尼為芬太尼族中的最新成員,是純粹的μ受體激動藥.臨床上其效價與芬太尼相似,為阿芬太尼的15～30倍.與阿芬太尼相比,起效更快,半衰期和作用時間更短、恢復迅速、無蓄積作用、鎮(zhèn)痛效價更強及副作用更輕,被譽為21世紀的阿片類藥[1].瑞芬太尼的鎮(zhèn)痛作用及其副作用呈劑量依賴性,與催眠藥、吸入性麻醉藥和苯二氮卓類合用有協(xié)同作用.目前各國藥典尚未收載鹽酸瑞芬太尼原料及其制劑的質(zhì)量標準.本試驗參照《中國藥典》2005年版[2]“細菌內(nèi)毒素檢查法”中干擾試驗的原理,對鹽酸瑞芬太尼中細菌內(nèi)毒素進行了檢查,發(fā)現(xiàn)鹽酸瑞芬太尼對鱟試劑有干擾作用,經(jīng)稀釋處理后可消除干擾.

1 實驗材料

1.1 儀器

VORTEX-2漩渦混合器(SCIENTIFIC INDUSTRIES,INC.);HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司).

1.2 藥品

鹽酸瑞芬太尼原料(批號090701、090702、090703,宜昌人福藥業(yè)有限責任公司).

1.3 試劑

鱟試劑 1(TAL1):批號 0909041,λ=0.5 IU?mL-1,湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn);鱟試劑 2(TAL2):批號 1001050,λ=0.5IU ?mL-1,湛江博康海洋生物有限公司生產(chǎn);細菌內(nèi)毒素檢查用水:批號1001180,規(guī)格5mL/支,湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn);細菌內(nèi)毒素工作標準品:批號150601-200861,規(guī)格150IU/支,中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn).

2 方法與結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度復核試驗

按照《中國藥典》2005年版二部附錄“鱟試劑靈敏度復核試驗”規(guī)定的方法復核試驗用鱟試劑靈敏度.結(jié)果見表1.

表1 鱟試劑靈敏度復核試驗

2.2 供試品細菌內(nèi)毒素限值(L)的確定

鹽酸瑞芬太尼為麻醉鎮(zhèn)痛藥,臨床每小時每公斤最大用量M=2.0μ g?kg-1?min-1[3]=0.12mg?kg-1?h-1,按L=K ?M-1(K=5 IU ?kg-1),加安全系數(shù)2,確定本品內(nèi)毒素限值為20IU?mg-1.

2.3 供試品最小稀釋濃度

MVC=λ?L-1;L:20 IU ?mg-1;λ:鱟試劑靈敏度標示值,0.5 IU?mL-1;MVC=λ/L=(0.5 IU/mg)?(20 IU/mL)-1=0.025mg?mL-1;按干品含量99%、水分0.5%,濕品:0.025mg/mL÷99%÷(1-0.5%)=0.0254mg?mL-1.

2.4 干擾預試驗

取鹽酸瑞芬太尼供試品,用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成 5.08、2.54、1.27、0.635 mg ?mL-1,混合均勻,取0.1mL加入0.5 IU?mL-1細菌內(nèi)毒素的鱟試劑中,混勻,置(37±1)℃水浴中 60min觀察,找出其不干擾樣品最大稀釋質(zhì)量濃度.

質(zhì)量濃度為5.08 mg?mL-1的供試品陽性不凝固,濃度為2.54mg?mL-1和低于此質(zhì)量濃度供試品陽性凝固.結(jié)果表明:供試品溶液質(zhì)量濃度為5.08 mg?mL-1時對鱟試劑有干擾;供試品溶液質(zhì)量濃度為2.54mg?mL-1時對鱟試劑無干擾,因此干擾試驗使用質(zhì)量濃度為2.54mg?mL-1.

表2 干擾預試驗結(jié)果

2.5 干擾試驗

取供試品用檢查用水稀釋至2.54mg?mL-1,用此稀釋液將內(nèi)毒素工作品稀釋成 1.0、0.5、0.25、0.125 IU?mL-1系列內(nèi)毒素溶液,混合均勻,取0.1 mL,加入0.1 mL鱟試劑中,混勻,置(37±1)℃水浴中60min觀察,測試2.54 mg?mL-1試驗濃度下對鱟試劑的干擾情況.結(jié)果見表3.

表3 樣品干擾試驗結(jié)果

2.6 樣品內(nèi)毒素檢測

將3批樣品用檢查用水稀釋至0.0254 mg?mL-1,按照《中國藥典》2005年版二部附錄規(guī)定進行細菌內(nèi)毒素檢測.結(jié)果3批樣品均為合格.結(jié)果見表4.

表4 樣品細菌內(nèi)毒素檢測結(jié)果

3 討 論

本試驗用兩個廠家的兩種鱟試劑對鹽酸瑞芬太尼原料3個批號的樣品進行干擾試驗和確證試驗,結(jié)果表明樣品溶液質(zhì)量濃度為2.54 mg?mL-1時對鱟試劑無干擾作用.

藥品采用細菌內(nèi)毒素檢查的先決條件是證明藥品在滿足限量檢查要求的濃度下對細菌內(nèi)毒素不產(chǎn)生干擾作用.如藥品在高濃度時對細菌內(nèi)毒素試驗不產(chǎn)生干擾作用,則低濃度時也不會產(chǎn)生干擾[4].鹽酸瑞芬太尼的最小稀釋濃度(MVC)為0.0254mg?mL-1.

表4試驗結(jié)果表明,3個批號鹽酸瑞芬太尼采用2個廠家鱟試劑作細菌內(nèi)毒素檢查,結(jié)果均符合規(guī)定,說明用此限值進行該樣品細菌內(nèi)毒素檢查是可行的.綜合臨床用藥、生產(chǎn)和檢驗的實際情況,本品的細菌內(nèi)毒素限值可定為20IU?mg-1.

[1］Saniay S.Patel,Caroline M.Spencer.Remifentanil[J].Drugs,1996,52(3):417-427.

[2］國家藥典委員會.《中國藥典》2005年版.二部[S].附錄XIE.

[3］國家藥典委員會.《臨床用藥須知》化學藥和生物制品卷[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:105-106.

[4］黃清泉,夏振民.藥品細菌內(nèi)毒素檢查的實驗設計[J].中國藥學雜志,1997,32(2):72.