于 永 洲

(廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東省廣州市荔灣區(qū)西村西增路 23號(hào)，510160)

通便寧片是由番瀉葉干膏粉、牽牛子、砂仁、豆蔻組成的復(fù)方制劑，具有寬中理氣，瀉下通便的功效，用于實(shí)熱便秘，其中番瀉葉為君藥。原標(biāo)準(zhǔn)采用分光光度法測(cè)定番瀉葉中番瀉苷 B的含量，其測(cè)定操作復(fù)雜且所測(cè)成分易見光分解，故本文中采用蘆薈大黃素和大黃酸作為番瀉葉的指標(biāo)成分進(jìn)行 HPLC法測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津 LC-20AT高效液相色譜儀;SPDM20A檢測(cè)器;SHIMADZU LC solution工作站。

1.2 試藥 蘆薈大黃素(0795-200806)，大黃酸(110757-200206)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;通便寧片及相關(guān)陰性對(duì)照藥由某藥廠提供;甲醇為色譜純;水為超純水，其他均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:島津 shim pack VP-DOS C18(150mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 -0.2%磷酸溶液(70:30);檢測(cè)波長(zhǎng)為 254nm;流速為 1.0mL/min;柱溫:30°C。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取蘆薈大黃素對(duì)照品、大黃酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 1mL含 30μg蘆薈大黃素和 100μg大黃酸的混合溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品 10片，稱定重量，研細(xì)，取 1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇 25mL，稱定重量，超聲處理 30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液 15mL，置錐形瓶中，水浴蒸干，殘?jiān)?8%鹽酸溶液 15mL，水浴加熱回流30min，放冷，加二氯甲烷 20mL，繼續(xù)加熱回流 1h，立即冷卻，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，用二氯甲烷少量多次的洗滌容器，溶液并入分液漏斗中，分取下層溶液，酸水層再用二氯甲烷振搖提取 3次，每次 20mL，合并二氯甲烷提取液，80℃水浴蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得 。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 依照“2.3”項(xiàng)下的方法制備陰性對(duì)照溶液。試驗(yàn)結(jié)果表明陰性對(duì)照溶液無蘆薈大黃素和大黃酸的吸收峰，故認(rèn)為陰性無干擾。

2.5 線性關(guān)系考察 取蘆薈大黃素、大黃酸對(duì)照品，用甲醇溶解稀釋配成含蘆薈大黃素 30.23μg/mL和大黃酸 117.4μg/mL的混合對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 1μL、3μL、5μL、10μL、20μL、30μL。以進(jìn)樣量 (m)為橫坐標(biāo)(x)，峰面積積分為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程:蘆薈大黃素 y=4863.3x-11477，γ=1;大黃酸 y=4321.5x-37631，γ=1，結(jié)果表明在 30.23～906.9ng范圍內(nèi)蘆薈大黃素線性關(guān)系良好，在 117.4～3522ng范圍內(nèi)大黃酸線性關(guān)系良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批通便寧片樣品 6份，每份約 1g，精密稱定，研細(xì)，按“2.3”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液并測(cè)定，結(jié)果蘆薈大黃素平均含量為 0.202mg/片，RSD為 2.0%。大黃酸平均含量為 0.673mg/片，RSD為 1.1%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

表1 蘆薈大黃素回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 大黃酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于 0、2、4、8、12、24、48h依法測(cè)定樣品，結(jié)果蘆薈大黃素含量的RSD為 1.0%，大黃酸含量的 RSD為 0.6%，表明供試品溶液在 48h以內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的(含蘆薈大黃素為 0.202mg/片，大黃酸 0.673mg/片)粉末約0.5g，精密稱定，共 6份，置錐形瓶中，精密加入混合對(duì)照品溶液 (含蘆薈大黃素 8.48μg/mL，大黃酸28.12μg/mL)25mL，繼續(xù)“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液 ，

按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表 1和表 2。2.9 3批樣品測(cè)定結(jié)果 取收集到的通便寧片樣品 3批，照“2.3”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液，分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各 10μL，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算，測(cè)定結(jié)果見表 3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

參考《中國(guó)藥典》2005年版一部中“大黃”含量測(cè)定項(xiàng)下的提取方法并進(jìn)行修改，由于三氯甲烷毒性較大，改為二氯甲烷作為提取溶劑，并對(duì)比了直接酸水解提取與先酸水解再提取的差異，結(jié)果表明先酸水解再提取所得含量明顯高于直接酸水解提取的含量，故作為本文選擇的提取方法。曾對(duì) 4%鹽酸溶液、8%鹽酸溶液、16%鹽酸溶液進(jìn)行考察，結(jié)果表明當(dāng)鹽酸溶液濃度為 8%時(shí)，其提取的蘆薈大黃素和大黃酸含量最高，故選擇 8%的鹽酸溶液進(jìn)行酸水解。考察不同酸水解時(shí)間對(duì)蘆薈大黃素和大黃酸測(cè)定結(jié)果的影響。分別將水浴加熱回流 30min、1h、2h，結(jié)果表明，酸水解 30min就可以水解完全，因此選擇酸水解時(shí)間為 30min。