東北農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院 徐基利 王文梅 郭奇苑 許麗＊

初生雛雞消化道內(nèi)通常是無菌的，出殼后通過與空氣、環(huán)境和飼料等接觸逐步建立起自身的腸道微生態(tài)系統(tǒng)，由于此時腸道微生態(tài)系統(tǒng)剛開始建立，正常菌群未完全定植于上皮細胞，腸道缺乏有效菌群的保護，很容易受到外界病原菌的侵害而感染發(fā)病。通過添加外源性乳酸菌可增強畜禽免疫力和抗病力。乳酸菌在消化道黏附和定植后，使消化道內(nèi)的有益菌群得到有效補充或增殖，優(yōu)勢菌群在數(shù)量上和作用強度上占絕對優(yōu)勢，同時有效抑制病原菌的增殖（郝生宏，2004），達到增強免疫功能、調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)、促進畜禽生長的作用。優(yōu)勢菌群通常是微生物生態(tài)平衡的核心因素，一旦優(yōu)勢菌群數(shù)量下降或消失，就會導致菌群失衡（馬治宇，2008）。研究表明，來源于宿主本身的菌種制劑比外源宿主菌種制劑對機體健康更有益（Timmerman等，2006）。本試驗通過在日糧中添加不同水平的同源乳酸菌固體發(fā)酵制劑，研究其對肉仔雞生長性能和盲腸菌群的影響，并確定該菌種的適宜添加量，進而揭示同源乳酸菌與家禽腸道菌群之間的關(guān)系，為乳酸菌制劑在肉雞生產(chǎn)中的推廣應用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 乳酸菌制劑由本實驗室制備，其中草乳桿菌分離自健康雞腸道，該制劑有效活菌數(shù)為5×108CFU/g；微生物檢測培養(yǎng)基有MRS固體培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基。

1.2 試驗動物和日糧 選取1日齡健康肉仔公雛300只隨機分成5組，每組5個重復，每個重復12只雞。Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧＋0.01%黃霉素；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組為乳酸菌制劑組，分別飼喂基礎(chǔ)日糧＋0.05%草乳桿菌制劑、基礎(chǔ)日糧＋0.2%草乳桿菌制劑、基礎(chǔ)日糧＋1.0%草乳桿菌制劑，試驗期為4周。試驗基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理 肉仔雞按常規(guī)飼養(yǎng)程序進行飼養(yǎng)管理，試驗肉雞分層飼養(yǎng)，自由采食、飲水。7日齡時對試驗雞進行新城疫滴鼻點眼免疫首免，14日齡時對試驗雞進行法氏囊滴鼻點眼免疫。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能 分別在第14、28天早晨以重復為單位空腹稱重，計算各組平均日增重。每周統(tǒng)計一次采食量和剩料量，以重復為單位，計算各組平均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化率。同時每天觀察雞的發(fā)病和死亡情況，記錄雞死亡數(shù)量。

1.4.2 盲腸菌群 分別在第14、28天早晨，每組隨機抽取5只體重適中的健康肉雞進行屠宰采樣，取盲腸冰凍保存，迅速帶到實驗室進行盲腸菌群檢測。采用平板涂布法測定盲腸內(nèi)乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量，取0.5 g盲腸內(nèi)容物于裝有4.5 mL生理鹽水的無菌EP管中，振蕩混合均勻，連續(xù)進行倍比稀釋，得到 10-5、10-6、10-7濃度的菌液，用微量移液器吸取各梯度稀釋液100 μL滴入相應培養(yǎng)基上，用曲玻棒涂勻后培養(yǎng)。乳酸菌置于37℃含5%CO2的厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，大腸桿菌置于有氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48 h后取出進行菌落計數(shù)，乳酸菌的培養(yǎng)用MRS瓊脂培養(yǎng)基，大腸桿菌的培養(yǎng)采用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，用LSD進行多重比較，結(jié)果用平均數(shù)±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同水平草乳桿菌制劑對肉仔雞生長性能的影響 見表2。由表2可知，1～14 d和15～28 d，試驗Ⅴ組平均日增重顯著高于對照組（P＜0.05），Ⅲ組和Ⅳ組與對照組差異不顯著 （P＞0.05），Ⅲ、Ⅳ組和Ⅴ組之間差異不顯著 （P＞0.05）；1～14 d，Ⅱ組與其他各處理間無顯著差異（P＞0.05），15～28 d，Ⅱ組顯著高于對照組和Ⅲ組（P＜0.05），但與Ⅳ和Ⅴ組相比，差異均不顯著（P＞0.05）。試驗全期，Ⅳ和Ⅴ組顯著高于對照組和Ⅲ組 （P＜0.05），且Ⅴ組顯著高于Ⅳ組 （P＜0.05）；Ⅱ組顯著高于對照組和Ⅲ組（P ＜ 0.05），但與Ⅳ和Ⅴ組差異不顯著（P＞0.05）。從料肉比方面看，1 ～ 14 d，各處理間無顯著差異（P ＞ 0.05）；15～28 d，Ⅴ組料肉比顯著低于對照組和Ⅲ組（P＜0.05），但與Ⅱ組和Ⅳ組無顯著差異（P＞0.05）。試驗全期，Ⅴ組料肉比顯著低于對照組和Ⅲ、Ⅳ組（P ＜ 0.05），與Ⅱ組差異不顯著（P ＞ 0.05），Ⅱ組顯著低于對照組（P＜0.05），Ⅲ、Ⅳ組和Ⅱ組間差異均不顯著（P＞0.05）。總體而言，乳酸菌制劑和抗生素均能改善肉仔雞的生長性能，但1.0%添加劑量優(yōu)于0.05%、0.2%和抗生素添加組。

2.2 不同水平草乳桿菌制劑對肉仔雞盲腸菌群的影響 見表3。由表3可以看出，2周時，Ⅴ組盲腸內(nèi)乳酸菌菌數(shù)顯著高于對照組和Ⅱ組 （P＜0.05），但與Ⅲ、Ⅳ組相比，差異不顯著（P ＞ 0.05）；Ⅲ、Ⅳ組乳酸菌菌數(shù)均顯著高于Ⅱ組（P＜0.05），與對照組相比無顯著差異 （P＞0.05）；4周時，Ⅳ和Ⅴ組乳酸菌數(shù)顯著高于Ⅱ組（P＜0.05），除Ⅱ組外，其余各組間乳酸菌數(shù)無顯著差異（P＞0.05）。2周時，Ⅴ組大腸桿菌數(shù)顯著低于其他處理組（P＜0.05），Ⅲ、Ⅳ組大腸桿菌數(shù)與對照組相比差異不顯著（P＞0.05），Ⅱ組大腸桿菌數(shù)顯著低于對照組（P＜0.05），Ⅲ、Ⅳ組和Ⅱ組間大腸桿菌數(shù)差異均不顯著（P＞0.05）；4周時，Ⅳ和Ⅴ組大腸桿菌數(shù)顯著低于對照組、Ⅱ和Ⅳ組（P＜0.05），Ⅳ和Ⅴ組間大腸桿菌數(shù)差異不顯著（P＞0.05），Ⅱ組大腸桿菌數(shù)顯著低于對照組（P＜0.05）。隨著乳酸菌制劑添加量的增加，盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)增加，大腸桿菌數(shù)減少，這表明，乳酸菌能夠優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)。

表2 對肉仔雞日增重和料肉比的影響

表3 對肉仔雞盲腸菌群的影響lg CFU/g

3 討論

3.1 乳酸菌對生長性能的影響 益生菌可通過調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡、產(chǎn)酸、合成維生素、改善動物胃腸道功能和提高肉仔雞的健康狀況而發(fā)揮促生長作用，而且可通過產(chǎn)生淀粉酶和蛋白酶，促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化來改善生長性能。Kalavathy等（2008）研究表明，飼喂0.1%乳酸菌混合物可顯著降低雛雞1～21 d的料肉比和提高日增重。王晶等（2009）研究表明，飼喂同源乳酸菌能顯著提高1～3周齡肉仔雞的平均日增重和降低料肉比（P＜0.05）。本試驗結(jié)果表明，飼喂1.0%乳酸桿菌制劑能顯著提高雛雞平均日增重和降低料肉比（P＜0.05）。與上述研究結(jié)果基本一致。乳酸桿菌對生長性能的改善與乳酸菌制劑的添加量成正相關(guān)，這可能與足夠多的乳酸菌能夠占據(jù)更多的黏附位點，通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡發(fā)揮促生長作用有關(guān)，也可能與乳酸菌產(chǎn)酸和合成維生素等營養(yǎng)物質(zhì)促進腸黏膜組織的發(fā)育有關(guān)。

3.2 乳酸菌對盲腸菌群的影響 馬治宇（2008）研究表明，乳酸菌菌粉能夠顯著抑制大腸埃希菌的繁殖，提高乳酸菌的數(shù)量。Jin等（1998）研究發(fā)現(xiàn)，添加不同水平乳酸桿菌可顯著降低肉仔雞盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌數(shù)量，提高乳酸桿菌的數(shù)量。本試驗研究結(jié)果亦表明，添加高劑量乳酸菌制劑能顯著增加盲腸內(nèi)乳酸菌的數(shù)量，有效抑制盲腸內(nèi)大腸桿菌的繁殖（P＜0.05），表明乳酸菌制劑的作用效果與添加水平有關(guān)，這可能是因為乳酸菌產(chǎn)生的某些代謝產(chǎn)物能夠增加腸黏液的黏度，從而增加了乳酸菌與腸上皮細胞結(jié)合的機會，而乳酸菌與大腸桿菌又具有相同結(jié)構(gòu)的黏附受體，因此早期補充乳酸菌使其能更多的定植于腸上皮起到占位作用和產(chǎn)生足夠多的乳酸降低腸道pH，有效抑制致病菌及腐敗菌的生長。

4 結(jié)論

日糧中添加乳酸菌制劑能夠提高雛雞的生長性能，且呈劑量效應關(guān)系；添加1.0%乳酸菌制劑能夠有效降低14 d和28 d肉仔雞盲腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量，提高盲腸內(nèi)乳酸菌的數(shù)量，且效果優(yōu)于0.01%黃霉素組。

[1]郝生宏.益生菌制粒后活性及其對肉仔雞生產(chǎn)性能、血液生化指標和腸道微生物的影響：[碩士學位論文][D].山西：山西科技大學，2004.

[2]馬治宇.乳酸菌及其培養(yǎng)液對肉雞生產(chǎn)性能、腸道菌群及腸道結(jié)構(gòu)的影響：[碩士學位論文][D].陜西：西北農(nóng)林科技大學，2008.

[3]王晶，許麗，袁玲，等.同源乳酸菌對雛雞生長性能和盲腸菌群的影響[J].中國飼料，2009，15：24 ～ 26.

[4]Jin L Z，Ho Y W，Abdullah N，et al.Growth performance，intestinal microbial populations，and serum cholesterol of broilers fed diets containing lactobacillus cultures[J].Poultry Science，1998，77（9）：1259 ～ 1265.

[5]Kalavathy R，Abdullah N，Jalaludin S，et al.Effects of lactobacillus cultures and oxyteracyline on the growth performance and serum lipids of boiler chickens[J].International Journal of Poultry Science，2008，7（4）：385 ～ 389.

[6]Timmerman H M，Veldman A，Van Den Elsen E，et al.Mortality and Growth Performance of Broilers Given Drinking Water Supplemented with Chicken-Specific Probiotics[J].Poultry Science，2006，85：1383 ～ 1388.