李雪晴 王 超 文愛東 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科 (西安 710032)

益胃顆粒由黃芪、白芍、當(dāng)歸、麥冬、五味子、枸杞子、延胡索、莪術(shù)、黃連、黨參十味中藥組成,是我院由傳統(tǒng)中藥湯劑改變劑型制得的臨床治療慢性萎縮性胃炎的藥物。本品補(bǔ)中益氣,健脾和胃,滋養(yǎng)胃陰,理氣活血,消炎止痛,主治慢性胃炎,尤其適于慢性萎縮性胃炎,芍藥苷為該藥的主藥白芍的主要成分。本實(shí)驗(yàn)利用高效液相色譜法對芍藥苷進(jìn)行了含量測定,為益胃顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)[1,2,3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津 Lc-10A高效液相色譜儀(LC-10A輸液泵,聯(lián)用 SPD-10AV可調(diào)波長紫外檢測器),n2000色譜化學(xué)工作站。

1.2 試藥 益胃顆粒(由第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥品制劑科制備,批號 071102,080201,080602);陰性對照品(本院自制);芍藥苷對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供,批號:110625-200514);甲醇為色譜醇,水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 分析柱:KromasilC18(150mm× 4.6mm,5 μ m);流動相∶甲醇 -水 (45∶ 75);檢測波長 230nm;流速:1m L/min;室溫 ;進(jìn)樣量:10 μ l。在上述色譜條件下,分離度與柱效均良好,見圖 1。

圖1 HPLC色譜圖

2.2 溶液配制 2.2.1 對照品溶液的制備: 精密稱取芍藥苷對照品 4.10mg,用少量甲醇溶解后,以甲醇定容成每 1mL各含 41 μ g的對照品溶液,閉光保存。

2.2.2 樣品溶液的制備:取本品 1袋內(nèi)容物,研細(xì),精密稱取 2.0 g,置 50 mL容量瓶中,加 75%乙醇約 40mL,超聲波振蕩提取 40min,放冷,加 75%乙醇置至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 陰性對照品溶液:精密稱取陰性樣品顆粒 2.0g,照供試品溶液的制備方法制備。

2.3 本方法專一性考察 分別將對照品溶液,陰性對照品溶液和樣品溶液 10 μL注入高效液相色譜儀,在 230nm處測定吸收峰面積,其對照品、陰性溶液及樣品的 HPLC圖譜見圖 1

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液4 μL,6 μL,8 μL,10 μ L,12 μL,在上述色譜條件下分別進(jìn)樣,測定峰面積,以峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo),以進(jìn)樣量(μ g)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,計(jì)算芍藥苷回歸方程:Y=151 369X+ 2980,r=0.999 8,在 0.164 μ g-0.656 μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取對照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣 5次,每次 20 μ l,測定峰面積,結(jié)果 RSD值為 1.18%(n=5),表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取攪勻的同批號樣品5份,照樣品測試方法進(jìn)行測定,結(jié)果 RSD值分別為1.25%,結(jié)果表明本測定方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別在配制后 0,2,4,8,12,24h各進(jìn)樣 20 μ l,記錄色譜圖。 計(jì)算RSD為 1.21%(n=6),說明該供試品溶液在 24h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取益胃顆粒樣品 2.0g,置 50 mL容量瓶中,加 75%乙醇約 40mL,超聲波振蕩提取 40min,放冷,加 75%乙醇置刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過,取續(xù)濾液。在相同色譜條件下,進(jìn)樣 10 μ l測定峰面積,計(jì)算含量取已知含量的樣品溶液分別精密加入對照品溶液適量,攪勻后,按樣品測定方法測定含量 ,計(jì)算回收率,見表 1。

表1 回收率測定結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測定 精密稱取 3批益胃顆粒樣品 2.0g,置 50 mL容量瓶中,加 75%乙醇約 40m L,超聲波振蕩提取 40min,放冷,加 75%乙醇置刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得。在相同色譜條件下各進(jìn)樣 10 μL測定峰面積,計(jì)算含量,結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討 論

3.1 本試驗(yàn)建立了測定益胃顆粒中芍藥苷的HPLC法,在提取條件考察過程中,我們先后考察了多種溶劑和提取手段對本品的提取效果,經(jīng)實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)不同的提取方法和不同的提取溶媒對芍藥苷的提取效率均不相同。本次實(shí)驗(yàn)所采用的方法簡便,快速,專屬性好,結(jié)果準(zhǔn)確。應(yīng)用此發(fā)法測得 3批樣品結(jié)果表明該方法可用于該制劑的質(zhì)量控制。

3.2 選擇檢測波長時(shí),以流動相為溶劑稀釋對照品,采用紫外分光光度法在 200～ 400掃描吸收光譜,結(jié)果表明芍藥苷在 230nm處有最大吸收,與文獻(xiàn)一致,故選定 230nm為檢測波長。

3.3 選擇提取方法及提取溶劑時(shí),先后對比了超聲波提取法以及加熱回流提取法結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用 75%乙醇超聲波提取法對芍藥苷的提取效率比較高,而回流法由于采用的溫度比較高易使芍藥苷在提取過程中有部分損失。故針對本制劑最終選擇 75%乙醇超聲波提取的方法。

3.4 本次實(shí)驗(yàn)過程當(dāng)中筆者多次比較了∶乙腈-0.1%磷酸 (14∶ 86)、甲醇-水 (30∶ 70)等多種流動相 ,反復(fù)對比各項(xiàng)系統(tǒng)參數(shù),結(jié)果發(fā)現(xiàn):甲醇-水(46∶72)對于樣品中芍藥苷和其它雜質(zhì)的分離度最好,故此選擇此流動相。

[1] 中華人民共和國藥典委員會編.中國藥典(2005版第一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:109.

[2] 王玉安,李豫秦.HPLC法測定尿塞通片中芍藥苷的含量 [J].陜西中醫(yī),2005,26(8):839-840.

[3] 王新立,張?jiān)饺A.HPLC法測定精制冠心顆粒中芍藥苷的含量 [J].陜西中醫(yī),2007,13(7),55-56.