馮維龍,高先彬,葛恒超

腦出血后出現(xiàn)的急性肺損傷 (acute lung injury,ALI)是一個較為的嚴(yán)重并發(fā)癥,可使肺的通氣和換氣功能受損,增加患者的病死率和致殘率。大量研究證實這種損傷與腦出血導(dǎo)致的全身非特異性炎癥反應(yīng)有關(guān),這種炎癥反應(yīng)引發(fā)多種炎性細(xì)胞過度激活及多種炎性介質(zhì)的過度釋放,并產(chǎn)生連鎖反應(yīng),導(dǎo)致肺組織及多個器官功能受損,嚴(yán)重時出現(xiàn)多器官功能衰竭。IFN-γ是一種由 CD和 CD的 T淋巴細(xì)胞生產(chǎn)的炎性細(xì)胞因子,具有多種生物學(xué)活性,本實驗旨在研究 IFN-γ是否在急性肺損傷中起作用。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 正常成年 SD大鼠 (由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供)80只,體質(zhì)量在 250～300g。分為兩組:腦出血組 (A組)與對照組 (B組)。

1.2 用自體血注入法建立動物模型 以 10%的水合醛腹腔注入麻醉動物,大鼠固定在江灣 I型立體定向儀 C上,切開皮膚、顱骨鉆孔,A組大鼠從尾部取自體血 50μl,在 3～5min內(nèi)注入尾狀核 (沿鉆孔垂直進(jìn)針 7mm);B組用 0.9%氯化鈉溶液 50μl注入尾狀核。

1.3 檢測方法 常規(guī)灌注,石蠟包埋,切片,厚度為 5μm,用免疫組化法 (SABC法)檢測 IFN-γ的表達(dá)情況。一抗為多克隆兔抗大鼠 IFN-γ抗體,二抗為山羊抗兔 IgG,過氧化酶標(biāo)記。

1.4 結(jié)果判定 A組大鼠采用 Longa四分法進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分,評分在 1～3分,即術(shù)后出現(xiàn)對側(cè)前爪不能伸展,行走時向偏癱側(cè)轉(zhuǎn)圈或行走時向偏癱側(cè)傾倒者為成功模型。觀察在 400倍光學(xué)顯微鏡下采集免疫組化圖像并輸入 Biomias99圖像分析系統(tǒng) (四川大學(xué)圖像圖形研究所研制),每張切片隨機選取 5個視場,取視場面積為:443268mm2,每個視場進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 實驗動物一般情況 出血組動物術(shù)后出現(xiàn)體質(zhì)量下降毛皮晦澀,并出現(xiàn)不同程度的偏癱,輕度者出現(xiàn)前爪不能伸展,嚴(yán)重時出現(xiàn)行走向偏癱側(cè)傾倒。對照組動物則僅出現(xiàn)術(shù)后一過性懶動倦怠,無偏癱的出現(xiàn)。

2.2 肺組織的大體改變 A組大鼠可見雙側(cè)肺組織腫脹,重量增加,呈淡紅色,嚴(yán)重者實變成暗紅色,雙肺散在大小不一的出血點,切面上可擠出淡紅色漿液。對照組肺組織無腫脹,呈白色,無出血點,切面無漿液滲出。

2.3 IFN-γ表達(dá)陽性細(xì)胞結(jié)果的測定 在出血組大鼠肺組織中可發(fā)現(xiàn) IFN-γ表達(dá)陽性細(xì)胞,胞漿呈棕黃色,胞膜表達(dá)少。

2.4 細(xì)胞計數(shù)及統(tǒng)計學(xué)分析見表1。

表1 各組陽性細(xì)胞計數(shù)Table1 The number of postive macrophages in different group

3 討論

機體在腦出血等嚴(yán)重創(chuàng)傷打擊下,會引發(fā)一種非特異性炎癥反應(yīng),這種炎癥反應(yīng)可以是從局部逐漸發(fā)展致全身,也可以是一開始就是全身性的,人們將這種非特異性的炎癥反應(yīng)定義為全身炎癥反應(yīng)綜合征 (systemic inflammatory response syndrome SIRS)。SIRS通過炎性細(xì)胞的過度激活及炎性遞質(zhì)的過度釋放損傷機體的器官,出現(xiàn)急性肺損傷,嚴(yán)重時出現(xiàn)多器官功能衰竭 (multiple organ failure MOF)。

3.1 炎癥反應(yīng)的發(fā)生與轉(zhuǎn)歸 炎癥反應(yīng)發(fā)生較早,腦出血后24h即可出現(xiàn),但程度較輕,此時肺組織出現(xiàn)輕度的充血,少量炎性細(xì)胞浸潤,炎性細(xì)胞因子 IFN-γ表達(dá)開始增加;出血發(fā)生后 3～7d炎癥反應(yīng)明顯加強,肺泡內(nèi)出現(xiàn)大量的漿液滲出,較多的炎性細(xì)胞浸潤,主要以單核一巨噬細(xì)胞為主,炎性細(xì)胞因子 IFN-γ表達(dá)進(jìn)一步增強。

3.2 炎性細(xì)胞因子 IFN-γ作用及與肺損傷的關(guān)系 IFN-γ是一種重要的炎性細(xì)胞因子,本次實驗發(fā)現(xiàn)在腦出血合并肺損傷時 IFN-γ表達(dá)增強,與肺損傷嚴(yán)重程度有明顯的相關(guān)性。IFN-γ主要是由 CD4和 CD8 T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生,該因子發(fā)揮生物學(xué)作用必須與相應(yīng)的受體結(jié)合,IFN-γ受體存在于單核-巨噬細(xì)胞,NK淋巴細(xì)胞。IFN-γ的生物學(xué)效應(yīng):能廣泛使各種類型的炎性細(xì)胞表達(dá) MHC-II類抗原,放大了免疫應(yīng)答的識別階段,IFN-γ還是一種強有力的單核-巨噬細(xì)胞激活劑。激活的炎性細(xì)胞可直接損傷肺組織,還可釋放炎性遞質(zhì)如過氧化物,蛋白酶破壞肺部細(xì)胞和組織,導(dǎo)致肺臟結(jié)構(gòu)和功能受損。

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