河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 （石家莊 050091）

李 昌 胡巍巍△ 高 瑋 韓 雪 趙淑明 陳小玉△△ 張一昕

益氣化痰祛瘀方為治療冠心病 （CHD）的效方,經(jīng)多年臨床應(yīng)用療效顯著,為研究其藥理作用機(jī)制,筆者通過(guò)觀察冠心病大鼠心電圖和血清 TC、TG的含量以及心肌和主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)的改變,對(duì)該方進(jìn)行了藥效學(xué)研究。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康雄性 SD大鼠 60只,體重 160～180 g,河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,動(dòng)物合格證號(hào):810054。

1.2 藥物及試劑 益氣化痰祛瘀方的組成與制備:益氣化痰祛瘀方由黃芪、桂枝、瓜蔞、薤白、半夏、川芎、赤芍、三七組成,實(shí)驗(yàn)時(shí)在河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥制劑室水提濃縮成相應(yīng)濃度;復(fù)方丹參滴丸,天津天士力制藥股份有限公司出品,實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配置成所需濃度的混懸液;垂體后葉素注射液,南京新百藥業(yè)有限公司生產(chǎn);膽固醇,天津市博迪化工有限公司生產(chǎn);膽酸鈉,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn);丙硫氧嘧啶,上海朝暉藥業(yè)有限公司生產(chǎn);總膽固醇 （TC）試劑盒和甘油三酯 （TG）試劑盒均購(gòu)自保定長(zhǎng)城臨床試劑有限公司。

1.3 主要儀器 泰盟科技 BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、半自動(dòng)生化分析儀、MSE-25型高速冷凍離心機(jī)、PM-10AD光學(xué)顯微鏡、Nikon尼康光鏡顯微照相機(jī)、LEICA RM2125石蠟切片機(jī)。

1.4 動(dòng)物分組與造模 60只健康雄性 SD大鼠自由飲水進(jìn)食,飼養(yǎng)于 18℃～22℃明暗各 12 h的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi),正常喂養(yǎng) 1周后,按體重分層隨機(jī)分為 5組,每組 12只,即:正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)正常組）、模型對(duì)照組 （簡(jiǎn)稱(chēng)模型組）、益氣化痰祛瘀方高劑量組 （簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量組）、益氣化痰祛瘀方低劑量組 （簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量組）、復(fù)方丹參滴丸對(duì)照組 （簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組）。動(dòng)物造模參考文獻(xiàn)[1-2],除正常組外,其它各組每天均給予高脂飼料,于末次灌胃給藥前 72 h,灌胃給藥 30min后,腹腔注射垂體后葉素 30 u/kg,連續(xù) 3次,每次間隔 24 h,形成冠心病心肌缺血模型。正常組相應(yīng)注射等容量的生理鹽水。

1.5 高脂飼料配方 2%膽固醇、10%豬油、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉、87.3%基礎(chǔ)飼料,由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工。

1.6 給藥方法及標(biāo)本處理 大鼠造模的同時(shí),各組分別給予相應(yīng)的藥物灌胃,給藥劑量按藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)計(jì)算,益氣化痰祛瘀方高、低劑量組分別按 （含生藥量）22.28 g/kg、11.14 g/kg體重的標(biāo)準(zhǔn)灌服,對(duì)照組按 0.17 g/kg體重的標(biāo)準(zhǔn)灌服,正常組和模型組灌服相應(yīng)劑量的蒸餾水。各組 1次/d灌胃,每次用藥體積均按 1mL/100 g計(jì)算。實(shí)驗(yàn) 6周末,最后 1次給藥禁食 12 h麻醉狀態(tài)下取血,分離血清。取血后迅速開(kāi)胸剖取心臟和主動(dòng)脈,在心尖部取適量的左心室心肌組織,將心肌組織和主動(dòng)脈用預(yù)冷 0.9%氯化鈉注射液沖洗,濾紙吸濕后,放入 4%多聚甲醛液中固定。

1.7 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.7.1 心電圖的檢測(cè):于造模前和第 3次腹腔注射垂體后葉素 24 h后,以 20%烏拉坦 4 mL/kg腹腔注射,待動(dòng)物麻醉后連接泰盟科技 BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),將其針狀電極分別插入大鼠左前肢和雙后肢皮下,記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖 ST段第 15min變化 （抬高或降低）的幅度 （mv）。

1.7.2 血清 TC、TG的測(cè)定:采用酶法,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.7.3 心肌和主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)的觀察:將固定的心肌和主動(dòng)脈組織常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色,光鏡下觀察其組織形態(tài)改變。

2 結(jié)果

2.1 益氣化痰祛瘀方對(duì)冠心病大鼠心電圖 ST段的影響 由表 1可見(jiàn),模型組大鼠心電圖 ST段的變化值明顯高于正常組 （P＜0.01）;給藥后,各用藥組大鼠心電圖 ST段的變化值均明顯低于模型組 （P＜0.01）;各治療組之間比較差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。詳見(jiàn)表 1。

表1 各組大鼠血清TG、TC的含量以及心電圖 ST變化值的比較 （±s）

表1 各組大鼠血清TG、TC的含量以及心電圖 ST變化值的比較 （±s）

注:與模型組比較,*P＜0.01;與對(duì)照組比較,△P＜0.01

組別 n TC（mmol/L）TG（mmol/L）ST段變化值 （mv）正 常 組 12 1.68±0.21* 0.53±0.06* 0.14±0.05*模 型 組 12 3.30±0.42 1.14±0.11 0.28±0.04對(duì) 照 組 12 2.39±0.34* 0.82±0.10* 0.20±0.04*高劑量組 12 1.77±0.14*△ 0.57±0.08*△ 0.19±0.03*低劑量組 12 1.80±0.18*△ 0.84±0.11* 0.20±0.05*

2.2 益氣化痰祛瘀方對(duì)冠心病大鼠血清 TC和TG含量的影響 由表 1可見(jiàn),模型組大鼠血清TC和 TG的含量較正常組明顯升高 （P＜0.01）;各用藥組均能明顯降低大鼠血清 TC、TG含量 （P＜0.01）;高、低劑量組大鼠血清 TC含量低于對(duì)照組 （P＜0.01）,而高、低劑量組之間差異無(wú)顯著性 （P＞0.05）;高劑量組大鼠血清 TG含量低于低劑量組和對(duì)照組 （P＜0.01）,而低劑量組和對(duì)照組之間差異無(wú)顯著性 （P＞0.05）。

2.3 心肌和主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變

2.3.1 心肌組織:正常組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊,胞漿著色均勻,細(xì)胞核呈長(zhǎng)橢圓形,位于心肌纖維中央,心肌纖維呈束狀分布,排列有序,無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等。模型組大鼠心肌細(xì)胞肥大、排列紊亂,胞漿著色不均勻,細(xì)胞核腫脹變形,出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),心肌細(xì)胞間隙增寬、結(jié)締組織增多,心肌纖維排列不齊,部分心肌纖維萎縮或變性,局部可見(jiàn)空泡樣改變。各治療組大鼠心肌組織均有不同程度的改善,其中高劑量組心肌細(xì)胞排列較整齊,細(xì)胞核改變較小,心肌纖維結(jié)構(gòu)比較完整,僅見(jiàn)部分心肌細(xì)胞間隙增寬;對(duì)照組和低劑量組有不同程度的心肌細(xì)胞間隙增寬、結(jié)締組織增生和心肌纖維萎縮。

2.3.2 主動(dòng)脈組織:正常組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完整,主動(dòng)脈壁內(nèi)膜光滑無(wú)增生,未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組大鼠主動(dòng)脈壁內(nèi)膜粗糙、增厚,有纖維組織增生,主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。各治療組主動(dòng)脈組織病理?yè)p傷均有改善,其中高劑量組僅見(jiàn)主動(dòng)脈壁內(nèi)膜粗糙;對(duì)照組和低劑量組可見(jiàn)主動(dòng)脈壁內(nèi)膜粗糙、增厚、纖維組織輕度增生。

3 討論

3.1 益氣化痰祛瘀方的組方依據(jù) 冠心病在中醫(yī)學(xué)中無(wú)獨(dú)立的病名,根據(jù)其病因、病機(jī)及臨床表現(xiàn),屬于中醫(yī)學(xué) “胸痹”、 “心痛”范疇。其發(fā)病主要是由于高年體虛,或中年過(guò)勞,損傷正氣,臟腑功能損傷,陰陽(yáng)氣血失調(diào),加上七情內(nèi)傷、飲食不節(jié)、寒冷刺激、勞逸失度等因素的影響,導(dǎo)致氣滯血瘀,胸陽(yáng)不振,痰濁內(nèi)生,痰瘀痹阻于心脈而致病。而且本病的發(fā)展是一個(gè) “本虛標(biāo)實(shí)”、“虛實(shí)夾雜”的動(dòng)態(tài)的復(fù)雜過(guò)程。本虛是指氣、血、陰、陽(yáng)的虧損或不足,標(biāo)實(shí)是指 “陰寒、痰濁、血瘀”而言,特別是以陽(yáng)氣不足,痰瘀互結(jié)最為常見(jiàn)。因此,我們精選益氣溫陽(yáng),化瘀祛痰中藥組成益氣化痰祛瘀方,經(jīng)臨床運(yùn)用療效顯著。方中選用黃芪、桂枝益氣溫陽(yáng),瓜蔞、薤白、半夏化痰寬胸,通陽(yáng)散結(jié);川芎、三七、赤芍活血化瘀,行氣止痛,諸藥合用共奏益氣溫陽(yáng),化痰祛瘀,通脈止痛之功。

3.2 益氣化痰祛瘀方具有良好的治療冠心病作用 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為:冠心病發(fā)病的根本原因是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致血供不能滿(mǎn)足心肌做工和代謝的需要,引起心肌缺血缺氧產(chǎn)生一系列病理生理變化。[3]動(dòng)脈粥樣硬化的確切病因目前尚不清楚,但與血脂異常、吸煙、年齡、性別等危險(xiǎn)因素密切相關(guān)。尤其是脂質(zhì)代謝紊亂和血黏度異常是冠心病發(fā)病的重要因素。[4]由于脂質(zhì)代謝紊亂,或同時(shí)有其他危險(xiǎn)因素存在,導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜發(fā)生某種損傷性變化,使脂質(zhì)易于通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)膜,進(jìn)入內(nèi)膜下間隙并沉積。進(jìn)一步發(fā)展是血管平滑肌受到脂質(zhì)增高的影響而發(fā)生增殖,動(dòng)脈壁變厚,脂質(zhì)沉積,形成纖維斑塊,進(jìn)而導(dǎo)致管腔,引起供血減少,致冠心病心肌缺血的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)合文獻(xiàn)采用喂飼高脂飼料和腹腔注射垂體后葉素的方法復(fù)制冠心病心肌缺血大鼠模型,實(shí)驗(yàn) 6周后顯示:模型組大鼠大鼠血清膽固醇、甘油三脂明顯升高;主動(dòng)脈壁內(nèi)膜粗糙、增厚,有纖維組織增生,管腔狹窄;心肌細(xì)胞肥大、排列紊亂,細(xì)胞核腫脹變形,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),心肌纖維排列不齊;心電圖 ST段異常改變,表明造模成功。

T波改變是心肌缺血的表現(xiàn),ST段移位是冠脈供血障礙心肌損傷的表現(xiàn),較心肌缺血時(shí)更為嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:益氣化痰祛瘀方可以糾正實(shí)驗(yàn)大鼠心電圖 ST段的異常改變,降低血清 TG、TC含量,改善心肌和主動(dòng)脈組織的病理?yè)p害,其總體療效優(yōu)于對(duì)照藥——復(fù)方丹參滴丸。可以推測(cè)益氣化痰祛瘀方抗冠心病的作用機(jī)制與其調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝,改善心肌缺血,減輕心肌和主動(dòng)脈組織的損傷有關(guān)。但其深入的作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究探討。

[1] 張明雪,常艷鵬,曹洪欣 .溫陽(yáng)活血中藥復(fù)方調(diào)控冠心?。ㄐ模╆?yáng)虛血瘀證大鼠血小板內(nèi)受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用機(jī)制研究 [J■.中華中醫(yī)藥雜志,2008,23（6）:494-497

[2] 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué) [M].2版.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006.422-425

[3] 邵念方,駱豐,許榮廷.冠心病中西醫(yī)綜合治療 [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004.11-13

[4] 劉耀平,蓋貴堂,盧海麗,等.冠心通痹煎劑治療胸痹的臨床應(yīng)用研究 [J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2007,22（1）:23-25

（2010-01-05 收稿）