胡慧香，張智敏

（1.山西職工醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030012； 2.山西大學(xué)，山西 太原 030006）

復(fù)方苦豆子栓劑是在我院中醫(yī)臨床洗劑處方基礎(chǔ)上研制而成的一種新劑型，由苦豆子、蛇床子、黃柏及土茯苓等多味藥材組成。與傳統(tǒng)洗劑相比，該制劑可以深入陰道皺褶內(nèi)病灶處，作用時(shí)間長(zhǎng)，不易流失，可用于慢性宮頸炎、宮頸糜爛、陰道炎等婦科病癥的治療［1］。為了進(jìn)一步對(duì)制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，我們建立了以下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

美國(guó) Waters高效液相色譜儀（Waters1525），Waters-2487紫外檢測(cè)器，KQ-2000型超聲波清洗器 （鞏義市予華儀器廠），PHSJ-3F型實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海精密科學(xué)有限公司），SY-1型融變時(shí)限測(cè)定儀（天津大學(xué)精密儀器廠），溶出度測(cè)定儀（天津光學(xué)精密儀器廠）。

1.2 藥物與試劑

復(fù)方苦豆子栓劑（自制），苦參堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110805-200306）；乙腈為色譜純，乙醇、三乙胺為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒 別

2.1.1 性狀 本品為深棕色，半透明，有彈性的鴨嘴形固體，外形完整光滑，色澤均勻，微有腥味，每粒重約3.5 g。

2.1.2 鑒別方法 取本栓劑1粒，切碎，溫?zé)崛廴?，?.1 mol/L的鹽酸溶液20 mL，水浴回流提取30min，冷藏，濾過(guò)，作為供試液。取供試液1 mL，滴加碘化鉍鉀試液，出現(xiàn)橙紅色沉淀；另取供試液1 mL，滴加硅鎢酸試劑，產(chǎn)生灰白色沉淀。

2.2 質(zhì)量檢查

2.2.1 重量差異 取栓劑10粒，精密稱定總重量，求得平均粒重后，再分別精密稱定各粒重量，計(jì)算重量差異限度，符合2005版附錄《中國(guó)藥典》［2］附錄規(guī)定。

2.2.2 pH值的測(cè)定 取復(fù)方苦豆子栓劑1粒，加水5 mL，水浴加熱溶解后，用酸度計(jì)測(cè)其pH值為5.85，接近陰道pH值，有利于治療。

2.2.3 融變時(shí)限 按照《中國(guó)藥典》［2］2005版附錄要求進(jìn)行融變時(shí)限檢查，融變時(shí)限為25 min，符合規(guī)定。

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：依利特C18柱 （250 nm×4.5 nm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-無(wú)水乙醇-水-三乙胺（15∶22.5∶62.5∶0.01）；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min。定量方法：外標(biāo)法。

2.3.2 試液的配制 ①對(duì)照品溶液：精密稱取經(jīng)減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量，加乙腈制成每1 mL含苦參堿0.37 mg的溶液，搖勻，即得。②供試品溶液：取栓劑10粒，溫?zé)崛廴?，混勻，冷卻。精密稱取3.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入0.1 mol/L的鹽酸溶液50 mL，水浴回流提取30 min，冷藏，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液20 mL，置分液漏斗中，用濃氨試液調(diào)整pH值至9～10，用氯仿振搖提取5次，合并氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)右译嫒芙猓?0 mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。③陰性對(duì)照液：取缺苦豆子的空白栓劑10粒，按供試品溶液的制備方法處理，同法制成陰性對(duì)照液。

2.3.3 線性關(guān)系考察 精密量取苦參堿對(duì)照品溶液1.0 mL，1.5 mL，2.0 mL，3.0 mL，5.0 mL，7.0 mL 置于10 mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，得濃度為 0.0370 mg/mL，0.0555 mg/mL，0.0740 mg/mL，0.1110 mg/mL，0.1850 mg/mL，0.2590 mg/mL 的溶液。分別吸取20 μL注入色譜儀，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，苦參堿對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（μg）作圖，回歸方程為 Y=0.1017＋0.5550X，r=0.9991，結(jié)果表明苦參堿在 0.74 μg～5.18 μg 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.3.4 精密度試驗(yàn) 按上述色譜條件，用濃度均為0.111 mg/mL的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣5次，每次20 μL，以峰面積計(jì)算RSD為1.15%。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)20090324樣品6份，按供試品溶液的制備項(xiàng)下方法處理，分別精密吸取20 μL進(jìn)樣，測(cè)得各次的峰面積，并計(jì)算其平均值為1.3856，RSD為3.75%。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)20090324樣品，按供試品溶液的制備項(xiàng)下方法處理，分別于不同時(shí)間（0 h，1 h，2 h，3 h，4 h，5 h，6 h，7 h，8 h） 精密吸取 20 μL進(jìn)樣，測(cè)得苦參堿峰面積，計(jì)算RSD為0.98%（n=9）。表明樣品制備后8 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取己知含量的同一批樣品（批號(hào)：20090324）1 g，共 5 份，置 5 個(gè)具塞錐形瓶中，分別精密加入苦參堿對(duì)照品溶液適量，按供試品溶液的制備項(xiàng)下方法處理，測(cè)定苦參堿含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn) （n=5）

2.3.8 樣品測(cè)定 取本品3批不同批號(hào)的樣品各3.5 g，精密稱定，按上述供試品溶液方法處理后，測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果批號(hào)為20090129、20090324、20090513的樣品含量分別為 2.058 mg/粒，2.063 mg/粒，2.243 mg/粒。

2.4 體外溶出度考察

2.4.1 溶出度測(cè)定 取批號(hào)為20090129的樣品栓劑 6 枚，按《中國(guó)藥典》［2］2005 年版二部附錄“溶出度測(cè)定法”項(xiàng)下第二法（槳法）測(cè)定，以 0.1 mol/L HCl 900 mL 為溶出介質(zhì)，溫度（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為 100 r/min，依法操作。采用RP-HPLC法，用外標(biāo)法計(jì)算一定時(shí)間溶出樣品中苦參堿的濃度及累計(jì)溶出百分率。測(cè)得6枚復(fù)方苦豆子栓劑的平均累計(jì)溶出百分率［F（t）］ 分別為：5 min 為 32.45%，10 min 為46.14%，20min為67.78%，30 min為78.67%，45 min為89.10%，60 min為93.62%。

2.4.2 溶出參數(shù)提取 根據(jù)威布爾（Weibull）分布模型，以 lnln［1/（1－F（t））］對(duì) ln（t－τ）（τ為位置參數(shù)）回歸作圖，可得一條直線，回歸方程為Y=－2.262+0.7975X，r=0.9990。取三批樣品進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，結(jié)果用電子表格Excel計(jì)算藥物溶出度Weibull分布參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。將3個(gè)批號(hào)栓劑的溶出參數(shù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果Td（溶出63%經(jīng)歷的時(shí)間）的F值為 1.263，P 值為 0.389，m（形狀參數(shù)）的 F 值為3.146，P值為0.0672（P＞0.05），表明3批栓劑的溶出度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，本處方工藝的重現(xiàn)性較好。

表2 復(fù)方苦豆子栓劑Weibull分布模型溶出參數(shù) （±s，n=6）

表2 復(fù)方苦豆子栓劑Weibull分布模型溶出參數(shù) （±s，n=6）

樣品批號(hào) Td（min） m t0 r 20090129 16.98±2.63 0.7813±4.17 9.140 0.999020090324 16.65±0.32 0.7928±0.52 9.276 0.998520090413 17.09±1.25 0.7957±5.87 9.573 0.9981

2.5 穩(wěn)定性考察

取3批樣品，進(jìn)行強(qiáng)光照射試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)，考察光線對(duì)該栓劑穩(wěn)定性的影響以及室溫條件下放置3個(gè)月后穩(wěn)定性的變化。結(jié)果表明不包裝的栓劑光照10 d后含量下降為原始含量的86.24%，表明光照10 d后含量已不合格，該栓劑應(yīng)該鋁塑包裝并避光貯存。留樣觀察的結(jié)果表明，3批樣品3個(gè)月后的含量均在合格范圍內(nèi)，平均相當(dāng)于原始含量的98.34%。

3 討 論

取苦參堿對(duì)照品溶液適量，在200 nm～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果苦參堿在215 nm處有最大吸收，故選擇215 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

苦參堿的含量測(cè)定方法有酸堿滴定法、紫外分光光度法、酸性染料比色法、高效液相色譜法等，由于前幾種方法不能使樣品中含有的生物堿得到很好的分離，故采用高效液相色譜法測(cè)定苦參堿的含量。在測(cè)定過(guò)程中，曾參照有關(guān)文獻(xiàn)，考察過(guò)乙腈-磷酸（4∶96）［3］、乙腈-磷酸二氫鉀緩沖液（4∶96）［4］等溶劑系統(tǒng)，結(jié)果不能使主峰得到很好的分離。而選用乙腈-無(wú)水乙醇-水-三乙胺（15∶22.5∶62.5∶0.01）為流動(dòng)相，苦參堿色譜峰與其他成分的色譜峰能達(dá)到較好的基線分離，分離度大于1.5，陰性樣品無(wú)干擾。該方法用于苦參堿制劑的含量測(cè)定，具有靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，可作為復(fù)方苦豆子栓劑的質(zhì)量控制方法。

溶出度在一定程度上反映了有效成分從制劑中溶出的速度和程度。在體外溶出度實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)累計(jì)溶出百分率結(jié)果可以看出，在30 min時(shí)，苦參堿的平均累計(jì)溶出百分率達(dá)到了78.67%，而45 min時(shí)已經(jīng)溶出89.10%（＞80%），說(shuō)明本處方設(shè)計(jì)合理，甘油明膠基質(zhì)的體外溶出不會(huì)影響該栓劑中藥物的釋放。

《中國(guó)藥典》尚未對(duì)外用制劑的溶出度檢查作出明確規(guī)定，但對(duì)于陰道特殊環(huán)境下的固體制劑，比如栓劑，由于陰道內(nèi)分泌液較少，會(huì)直接影響藥物的溶出速度。因此對(duì)栓劑進(jìn)行溶出速度的研究尤為必要，它可以作為一定條件下的基質(zhì)中藥物溶出速度的參考指標(biāo)。

［1］胡慧香，張智敏.復(fù)方苦豆子栓劑的制備及臨床應(yīng)用［J］.山西中醫(yī)，2009，25（5）：50-51.

［2］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（二部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄.

［3］蘇靜洲，劉明言，董海榮.HPLC法測(cè)定復(fù)方石韋片中苦參堿和氧化苦參堿的含量［J］.中草藥，2005，36（3）：383-384.

［4］張義生，劉亞麗.高效液相色譜法測(cè)定婦科洗劑中苦參堿的含量［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2004，24（9）：580.