段秀俊，裴妙榮，段曉軍

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030024）

強(qiáng)脈膠囊由丹參、當(dāng)歸、川芎等18味中藥組成，具有溫經(jīng)通脈、活血化瘀的功效，用于治療經(jīng)脈阻塞及血栓閉塞性脈管炎等并發(fā)癥。為了更好地控制其質(zhì)量，本文建立了丹參酮ⅡA的含量測定方法對其質(zhì)量進(jìn)行控制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Alltech 426型高效液相色譜儀，Linear 201型紫外檢測器，Allchrom Plus色譜工作站。

1.2 藥品與試劑

強(qiáng)脈膠囊（自制，三批批號為080424，080425，080426），丹參酮ⅡA對照品（購自中國生物制品檢定所，批號110766-200314）；甲醇為色譜純，水為二次重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性［1-11］

色譜柱為Hypersil ODS C18色譜柱（4.6 nm×200 nm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（75∶25）；檢測波長為270 nm（見圖 1），流速為 1.0 mL/min；理論塔板數(shù)以丹參酮ⅡA計(jì)，不少于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取本品粉末約3.0 g，精密稱定，取100 mL具塞三角瓶，精密加入甲醇50 mL，稱重，超聲提取20 min，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，濾液再用微孔濾膜（0.45 nm）濾過，即得。

2.2.2 對照品溶液 精密稱定丹參酮ⅡA 1.22 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作為儲備液。取1mL儲備液于10 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，制成每1 mL含丹參酮ⅡA 12.2 μg的對照品溶液。

2.2.3 陰性溶液 按強(qiáng)脈膠囊的處方組成和比例，制備缺丹參的陰性空白膠囊，按2.2.1項(xiàng)方法制備陰性樣品溶液。

2.3 空白實(shí)驗(yàn)

按上述色譜條件，取丹參酮ⅡA對照品溶液、批號為080424的供試品溶液、陰性溶液各10 μL分別注入液相色譜儀，測定。結(jié)果供試品溶液與對照品溶液在相同的保留時(shí)間處均出現(xiàn)色譜峰，且基線平穩(wěn)，分離度好，而陰性樣品無干擾（見圖2-4）。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取丹參酮ⅡA對照品0.90 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備液（0.09 mg/mL）。精密吸取上述對照品母液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL 分別置6個(gè)10 mL容量瓶中，各加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別吸取上述對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定丹參酮ⅡA的峰面積值。以對照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=939210X-1947.7，r=0.9997，丹參酮ⅡA 在進(jìn)樣量 0.036 μg～0.216 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取對照品溶液（12.2 μg/mL）重復(fù)進(jìn)樣 6 次，每次10 μL，依法測定丹參酮ⅡA峰面積值，結(jié)果RSD值為1.33%，說明儀器的精密度好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液（080424），分別于 0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，進(jìn)樣10 μL，依法測定丹參酮ⅡA峰面積值，結(jié)果RSD值為1.84%，說明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號樣品（080424）6 份，每份 3.0 g，按2.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定其丹參酮ⅡA含量，6份樣品的含量平均值為0.0475 mg/粒，RSD值為 2.03%（n＝6），說明本法重復(fù)性好。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

分別取已測知含量的樣品（080424）6份，每份1.5 g，精密稱定，每份分別精密加入丹參酮ⅡA對照品0.122 mg，按2.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.92%，RSD值為 1.91%（n＝6），說明本法準(zhǔn)確度高。

2.9 樣品測定

按上述測定方法，測定 3批樣品（080424、080425、080426）中丹參酮ⅡA的含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品中丹參酮IIA的含量 （n＝2）

3 討 論

丹參酮ⅡA對光熱敏感，不穩(wěn)定，在供試品溶液的制備過程中應(yīng)加以注意，供試品溶液與對照品溶液均應(yīng)低溫避光保存。

在樣品處理中，考察了加熱回流提取及超聲提取，結(jié)果超聲提取20 min與加熱回流提取1 h，測得的藥材含量無顯著差異，為盡可能避免丹參酮ⅡA破壞，故選用超聲波提取20 min。

在丹參酮ⅡA的含量測定中，曾試用不同比例的甲醇-水作為流動(dòng)相考察其分離情況，由于丹參酮ⅡA的脂溶性較大，結(jié)果以75∶25分離效果較好，并且處方中其他藥味對測定無影響。

丹參酮ⅡA是醌式結(jié)構(gòu)，實(shí)際名稱應(yīng)該是丹參醌ⅡA，國家十五規(guī)劃教材《中藥化學(xué)》中其名稱就是丹參醌ⅡA。但是包括2005年版中國藥典在內(nèi)，一般均稱之為丹參酮ⅡA，筆者認(rèn)為還是按照其實(shí)際結(jié)構(gòu)規(guī)范命名，稱之為丹參醌ⅡA合理。

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