宋衛(wèi)青，李 麗

（山西省活血化瘀研究所，山西 太原 030001）

婦得樂顆粒由丹參、赤芍、金銀花等多味藥物組成，具有活血化瘀、清熱散結(jié)、理氣止痛之功效，用于治療氣滯血瘀型盆腔炎及炎性包塊。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效，本文建立了用薄層色譜法（TLC）鑒別婦得樂顆粒中丹參、赤芍的方法，并采用高效液相色譜法對丹參酮ⅡA的含量進行測定。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

HP1100高效液相色譜儀（美國），HP Chemstation system化學(xué)工作站，939薄層自動鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠），SB3200超聲處理器（上海必能信儀器廠），LD4-2離心機（北京醫(yī)用離心機廠），微量進樣器（上海醫(yī)用激光儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

婦得樂顆粒由山西省活血化瘀研究所研制，丹參酮ⅡA對照品由中國生物制品檢定所提供，硅膠G為青島海洋化工廠生產(chǎn)，化學(xué)試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參的鑒別

取本品內(nèi)容物4 g，研細，加水10 mL攪拌使溶解。用稀鹽酸調(diào)至PH為2，加醋酸乙酯20 mL提取1次，醋酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材1 g，加水煎煮2次，每次0.5 h。合并煎液，濾過，取濾液，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005版一部附錄 VIB）［1］試驗，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液各2 μL，點于同一含羧甲基纖維素鈉的硅膠G板上，以氯仿-丙酮-甲酸（20∶5∶2.5）為展開劑展開，取出，晾干。置氨氣中熏，放置15 min～20 min后，置紫外燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點。結(jié)果見圖1。

2.2 赤芍的鑒別

取本品10 g，研細，加入飽和的正丁醇充分攪拌，超聲處理30 min，傾出上清液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次10 mL，正丁醇層蒸干。殘渣加甲醇適量溶解，加于已處理好的中性氧化鋁柱（100目～200 目，2 g，內(nèi)徑 1.5 cm）上，用甲醇洗脫，收集洗脫液，回收甲醇，殘渣加無水乙醇使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加無水乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液、對照品溶液各5 μL，點于同一含羧甲基纖維素鈉的硅膠G板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干。 噴以 2%香草醛硫酸溶液，105℃烘至顯色清晰。日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。結(jié)果見圖2。

圖1 丹參的TLC色譜圖

圖2 赤芍的TLC色譜圖

2.3 丹參酮ⅡA含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：DiamonsiL C18；柱溫：室溫；流動相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：270 nm。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品10.00 mg，置100 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品1.0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，精密加甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理20 min，放冷；加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得。

2.3.4 陰性對照溶液的制備 取陰性樣品 （缺丹參），按2.3.3項方法制備，即得陰性對照溶液。

2.3.5 線性關(guān)系考察 精密吸取丹參酮ⅡA對照品溶液 5 μL、10 μL、15 μL、20 μL 進樣，依法測定，以丹參酮ⅡA含量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為Y=3499.881X＋3.898，r=0.9993，結(jié)果表明，丹參酮ⅡA 在 0.039 μg ～0.401 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10μL，重復(fù)進樣5次，結(jié)果峰面積值的RSD為1.87%。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一份供試品溶液10 μL，每間隔0.5 h進樣一次，3 h內(nèi)共進樣7次。測定結(jié)果表明，丹參酮ⅡA峰面積值基本不變，RSD為0.89%。

2.3.8 重現(xiàn)性試驗 取本品內(nèi)容物1.0 g，精密稱定，共取5份，分別按供試品溶液制備方法進行提取，含量測定，結(jié)果為RSD為1.55%。

2.3.9 加樣回收率試驗 分別取已知含量的樣品6份各1.0 g，精密稱定，分別精密添加一定量的對照品，按供試品溶液制備方法進行提取，含量測定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果 （n=6）

2.3.10 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL按上述色譜條件測定。結(jié)果三個批號 20070121、20070401、20070630婦得樂顆粒中丹參酮ⅡA含量分別為9.12 mg、9.02 mg和10.01 mg。

2.3.11 空白試驗 取陰性對照品溶液，依法測定，結(jié)果在丹參酮ⅡA峰相應(yīng)的保留時間無干擾。

3 討 論

丹參的鑒別中，丹參的對應(yīng)成分為水溶性成分，方法簡便，斑點明晰，靈敏度高，重現(xiàn)性良好，陰性對照無干擾，噴以10%氫氧化鉀溶液，熒光斑點更加明亮。其余藥味的薄層鑒別及丹參酮ⅡA含量測定也取得了滿意的效果，可作為婦得樂顆粒的質(zhì)量控制方法。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄VIB.