延安大學附屬醫(yī)院(延安 716000)馬 鵬 談曉紅 馮義朝

張力蛋白同源、第 10染色體丟失的磷酸酶基因(Phosphatase and tension homology deletedon chromosome ten,PTEN),是目前發(fā)現(xiàn)的第一個具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,參與細胞凋亡調(diào)控[1]。幽門螺桿菌(HP)是胃癌重要的致癌因素已受到越來越多的資料的證實,但其確切的致癌機制尚不明確。我們應用免疫組化技術探討胃癌組織中PTEN的表達與幽門螺旋桿菌感染的關系。

材料和方法

1 材 料 2003～ 2005年我院普外科術后胃癌大體標本 80例,其中男 56例,女 24例,年齡 23～ 72歲 (平均54歲 )。均經(jīng) HE染色,病理確診并分型,其中高-中分化腺癌為32例,低分化腺癌48例。癌旁組織為與癌組織最遠處,也經(jīng)病理確診并分型,其中腸化生26例,胃炎 54例,所有患者受檢前均未經(jīng)放化療等治療。所有患者術前均禁食 10h后于胃鏡直視下取標本,取胃組織 3塊,并經(jīng)快速尿素酶實驗檢查,以確定有無 HP感染,之后再用于組織學檢查。所有標本經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片厚 4mm.常規(guī) HE染色及甲苯胺藍染色,根據(jù)組織結(jié)構和細胞形態(tài)診斷胃炎組織、腸化生組織、胃癌組織和有無 HP感染。PTEN單克隆抗體(濃縮液)、(S-P)試劑盒及(DAB)購自北京中杉生物技術有限公司。

2 方 法 標本經(jīng) 10%甲醛固定,石蠟包埋,4 μ m厚的石蠟切片 65℃烘烤,脫蠟,3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶,微波修復抗原,10%正常山羊血清封閉,PTEN單克隆兔抗體(1∶50)4℃過夜孵育,磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗,加生物素標記鼠抗人 IgG藥置于室溫下 30min,沖洗,辣根酶標記鏈霉卵白素室溫下孵育30min,沖洗后DAB顯色,蘇木素染色,封片。光鏡觀察。用已知陽性胃癌切片作陽性對照,用 PBS代替一抗作陰性對照。采用快速尿素酶試驗、甲苯胺藍染色組織病理學檢查兩種方法檢測 HP感染情況。

3 結(jié)果判斷 PTEN染色定位在細胞質(zhì)內(nèi),以細胞質(zhì)呈棕黃色顆粒為陽性。由兩位病理科醫(yī)師隨機選擇5個有代表性的視野計數(shù)200個細胞,按陽性細胞占同類記數(shù)細胞的百分比將免疫組化結(jié)果分為陰性,即百分比＜10%;陽性即百分比＞10%。 HP感染情況采取快速尿素酶試驗和甲苯胺藍染色組織病理學檢查兩種方法檢測,以結(jié)果一致者作為研究樣本,實驗結(jié)果拍攝成像。

4 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS10.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析,采用χ2檢驗對免疫組化結(jié)果進行分析處理,以P＜0.05為差異具有顯著意義。

結(jié) 果

1 PTEN在胃癌及癌旁組織中PT EN的表達:胃癌組織 PTEN的表達在 80例胃癌組織中有 37例PTEN陽性,陽性率46.3%。80例癌旁組織中有69例PTEN陽性,陽性率為86.3%,二者之間有顯著性差異(P＜0.01)。

2 胃癌中 HP感染和 PT EN表達的關系:在 HP陽性和 HP陰性胃癌中,PTEN表達陽性率分別為 38.9%和52.3%,HP陽性者PTEN蛋白表達雖然低于HP陰性者,但二者之間無顯著差異(P＞0.05)

討 論

PTEN作為一種抑癌基因,參與細胞凋亡調(diào)控[1]。近年研究發(fā)現(xiàn),其表達與一些惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展、生物學行為和預后有密切的關系[2,3],但對PT EN在胃癌中的表達卻有不一致的報道[4,5]。本研究顯示:PTEN在癌組織中的表達明顯低于癌旁組織,二者之間有顯著性差異,提示:在胃癌組織中 PT EN表達下調(diào),在由胃炎組織或腸化生組織向癌組織進化演變中,抑癌基因PTEN的缺失會導致其對腫瘤的抑制作用的減弱,說明 PTEN基因與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關。

幽門螺桿菌(HP)是重要的致癌因素已受到越來越多的資料的證實[6,7]。當幽門螺桿菌感染后,宿主細胞對 HP產(chǎn)生的反應分為速發(fā)性和遲發(fā)性兩類,遲發(fā)性反應多數(shù)涉及到基因表達的變化[8]。近期一些研究者應用cDNA array分析了HP誘導的胃上皮細胞基因表達譜的變化。Chiou等報道,在HP的刺激下,胃癌細胞株有21個基因上調(diào)和17個基因下調(diào)[9]。所以對基因表達變化的進一步研究,將有助于了解宿主細胞的抵抗策略和適應性變化的根本機制,從而為干預有關環(huán)節(jié),減輕宿主細胞對H.pylori的易感性提供新的思路。本研究顯示:PT EN的陽性表達在 HP陽性的組織中與 HP陰性組織中分別為38.9%及52.3%,HP陽性者PTEN蛋白表達雖然低于 HP陰性者,但二者尚無統(tǒng)計學差異。提示:PTEN在胃癌中的表達變化可能與HP感染無明顯相關性,HP的致癌機制中可能沒有抑癌基因PT EN的參與。其結(jié)果與周慶華[10]等研究不同,可能與樣本量的大小、檢測前是否服用過抗 HP的藥物等因素有關。關于PTEN與 HP感染的關系,文獻報道甚少,其他抑癌基因和癌基因與 HP在胃癌的關系研究亦鮮有報道,因此,HP感染導致胃癌的途徑有很多種[11,12],能否通過對抑癌基因 PTEN的影響而致癌,還需進一步研究。

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