張 紅 唐志書 王海峰 陜西中醫(yī)學(xué)院(咸陽(yáng) 712046)

補(bǔ)腦丸為部頒標(biāo)準(zhǔn)收載品種,主要由當(dāng)歸、膽南星、枸杞子等十幾味中藥組成,其中當(dāng)歸為方中君藥,當(dāng)歸中主要含多種有機(jī)酸類化合物以及揮發(fā)油等。本試驗(yàn)參考有關(guān)文獻(xiàn),并經(jīng)試驗(yàn)摸索,建立高效液相色譜法測(cè)定本品中阿魏酸的含量,該方法分離效果較好,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥 島津 LC-2010A型高效液相色譜儀 ,UV-VIS紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器,阿魏酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(供含量測(cè)定用,批號(hào):0773-9809);甲醇為色譜純?cè)噭?水為重蒸水,其它試劑均為分析純。

2 色譜條件 色譜柱 Shim-pack VP-ODS柱(250mm× 4.6mm,0.45 μ m),甲醇:1% 醋酸 (20:80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為 320nm;流速 1mL/min;柱溫30℃。在選定色譜條件下,測(cè)得供試品中阿魏酸峰理論塔板數(shù)均大于 3000,與相鄰峰的分離度大于 1.5。

3 方法與結(jié)果

3.1 供試品溶液的制備 取本品 50丸,除糖衣,研碎,取 5g精密稱定,置 50mL具塞錐形瓶中,精密加 50%甲醇 25mL,稱定重量,超聲處理 40min,放冷后,再稱定重量,用 50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取適當(dāng)?shù)睦m(xù)濾液離心 25min,轉(zhuǎn)速為 3000轉(zhuǎn) /min。取離心液 ,微孔濾膜(0.45 μ m)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

3.2 空白試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液及空白對(duì)照溶液各 10 μL,依法測(cè)定,結(jié)果表明,空白樣品中無(wú)干擾。

3.3 線性范圍的考察 精密稱取阿魏酸對(duì)照品適量,用流動(dòng)相配成濃度為 1.2mg/mL的溶液,然后用流動(dòng)相分別稀 釋成 12 μ g/mL、 10 μ g/mL、 8 μ g/mL、6 μ g/mL、4 μ g/mL的系列對(duì)照品溶液 ,進(jìn)樣 10 μL記錄色譜圖,測(cè)定峰面積,以所得的峰面積為橫坐標(biāo),以進(jìn)樣量為縱坐標(biāo),在濃度為 40～ 120ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程 C=0.0046A+9.023,r=0.9999。

3.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μL,重復(fù)進(jìn)樣 5次,依法測(cè)定,計(jì)算,阿魏酸峰面積RSD=1.30%。

3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別精密稱取同一批號(hào)樣品5份,按供試品溶液的制備方法配制,依法測(cè)定,阿魏酸含量 RSD=1.58%。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)樣品 4.9352g,按供試品溶液的制備方法配制,分別在放置 0,1,2,4,8h,精密吸取 10 μL,注入液相色譜儀,依法測(cè)定,阿魏酸峰面積 RSD=0.95%,試驗(yàn)結(jié)果表明,供試品溶液在 8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品(0.0404mg/g)的供試品共 6份,分別加入不同量的對(duì)照品溶液(0.1mg/mL)1.1mL、 1.1mL,0.9mL、0.9mL,1.3mL、1.3mL,依法測(cè)定,結(jié)果:阿魏酸回收率分別為:102.37,101.53,98.34,100.09,99.99和 99.27%,平均回收率為 100.26%,RSD為 1.29%.

3.8 樣品測(cè)定 按擬定的含量測(cè)定方法,對(duì)三批樣品中的阿魏酸依法測(cè)定,結(jié)果 3批樣品阿魏酸含量分別為 6.13,6.06,6.24 μ g/丸。

4 討 論 4.1本試驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道方法測(cè)定本品中阿魏酸的含量,但結(jié)果均不理想,后經(jīng)反復(fù)試驗(yàn),以甲醇∶1%醋酸(20∶80)為流動(dòng)相;采用 ODS柱;檢測(cè)波長(zhǎng)為 320nm;流速 1ml/min;柱溫 30℃。結(jié)果樣品中阿魏酸峰獲得良好的分離,峰形對(duì)稱,重現(xiàn)性較好。

4.2 樣品處理方法簡(jiǎn)單可行,陰性對(duì)照未見(jiàn)干擾,可用于控制補(bǔ)腦丸中阿魏酸的含量。

[1] 王 蘭.柏子養(yǎng)心丸中阿魏酸的含量測(cè)定.陜西中醫(yī),2004,25(7)11:58.

[2] 蔣心惠.RP-HPLC測(cè)定普藏紅膠囊中阿魏酸的含量.華西藥學(xué)雜志,2001,16(4):374-375.