王存連,徐明舉,崔紅玉,徐 彤

(河北北方學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院,河北張家口075000)

牛傳染性鼻氣管炎 (IBR)又稱“壞死性鼻炎”,是由牛傳染性鼻氣管炎病毒 (IBRV)引起的牛的一種急性、熱性、接觸性傳染病,表現(xiàn)為上呼吸道及氣管粘膜發(fā)炎、呼吸困難、流鼻汁等癥狀,也可引起膿皰性外陰陰道炎、龜頭炎、結(jié)膜炎、幼牛腦膜腦炎、乳房炎、流產(chǎn)等.自20世紀(jì)50年代首次在美國(guó)發(fā)現(xiàn)該病,至今已蔓延至全世界五大洲[1,2].中國(guó)于20世紀(jì)80年代初周泰沖等在進(jìn)口種牛中發(fā)現(xiàn)本病,并分離和鑒定了該病毒[3].通過(guò)血清學(xué)普查表明,中國(guó)多個(gè)省區(qū)均有存在,給養(yǎng)牛業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[4].本課題組在調(diào)查冀西北地區(qū)奶牛主要疾病的過(guò)程中于2008年11月發(fā)現(xiàn)了疑似牛傳染性鼻氣管炎病例,通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、尸體剖檢、細(xì)菌培養(yǎng)、病毒分離及康復(fù)犢牛及其母牛IBR抗體檢測(cè)[5],最后確診為傳染性鼻氣管炎感染,現(xiàn)報(bào)道如下.

1 發(fā)病情況

2009年11月初,在冀西北地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖小區(qū)發(fā)生泌乳期和懷孕母牛出現(xiàn)體溫升高、大量流淚、多量粘液膿性鼻漏、鼻粘膜高度充血,常伴有結(jié)膜炎;有時(shí)也可見(jiàn)到帶血腹瀉、流產(chǎn),有的表現(xiàn)有結(jié)膜炎.至11月底共有約37頭懷孕及泌乳牛發(fā)病,至12月初除了一些懷孕泌乳牛相繼發(fā)病外,一些犢牛也出現(xiàn)了以呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)損傷為主的感染,表現(xiàn)為大量流淚,有多量粘液膿性鼻漏,鼻粘膜高度充血,出現(xiàn)潰瘍,鼻竇及鼻鏡組織高度紅腫,因炎性滲出物阻塞而發(fā)生呼吸困難及張口呼吸,常伴發(fā)深部支氣管性咳嗽;共濟(jì)失調(diào),陣發(fā)性痙攣,最終倒地,角弓反張,磨牙,口吐白沫,四肢劃動(dòng)而死亡,病程約為4～5 d.2009年1月初來(lái)河北北方學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院就診,共發(fā)病86頭,其中有23頭牛死亡.

2 臨床癥狀

早期病牛體溫達(dá)39.5～42℃,氣喘、腹式呼吸.精神逐漸萎靡,鼻鏡、鼻腔粘膜發(fā)炎,呈火紅色,鼻腔內(nèi)有大量黏液,在安靜的犢牛舍里,可聽(tīng)“呼、呼”的鼻音,瀕死犢牛的鼻鏡上出現(xiàn)壞死斑.病后第2天患牛拉稀,呈黃色,嚴(yán)重脫水,眼窩深陷,食欲下降;部分懷孕母畜現(xiàn)外陰部發(fā)生輕度腫脹,少量粘稠分泌物附著在外陰部,陰道粘膜充血,陰道壁上附著淡黃色滲出物,流產(chǎn),產(chǎn)出死亡胎兒.感染牛有的出現(xiàn)大量的流淚,眼結(jié)膜發(fā)紅,呈現(xiàn)明顯的結(jié)膜炎.

3 剖檢變化

打開(kāi)鼻腔,黏膜象紅布一樣,鼻甲骨上有壞死灶;口腔黏膜潮紅.切開(kāi)氣管可見(jiàn)大量的出血點(diǎn),氣管內(nèi)有大量的黏液,黏液中有少量血絲.在鼻腔和氣管中均有大量的纖維性蛋白物滲出;肺臟氣腫、出血,切面有大量氣泡冒出,還有化膿性肺炎,小葉壞死;肝臟腫脹,有粟粒大、灰白色至灰黃色壞死灶散在的壞死灶;腎乳頭出血、也有類似的肝臟壞死灶壞死;十二指腸、空腸、回腸廣泛性出血.流產(chǎn)胎兒有壞死性肝炎和脾局部壞死.

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 涂片、染色鏡檢

無(wú)菌取心、肝、肺、脾、淋巴結(jié)做觸片,經(jīng)革蘭氏染色,顯微鏡下觀察,上述組織內(nèi)未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌存在.

4.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無(wú)菌取心、肝、肺、脾、腸內(nèi)容物接種于鮮血瓊脂、麥康凱和營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,于37℃進(jìn)行培養(yǎng),24 h觀察,各種培養(yǎng)也未見(jiàn)菌落生長(zhǎng).

4.3 病毒分離

無(wú)菌取患牛鼻腔分泌物加入滅菌生理鹽水,每毫升加入青霉素和鏈霉素各2 000單位,于4℃冰箱過(guò)夜,然后將樣品充分振蕩后10 000 r/min離心10 min,取上清液按100μL/孔接種已經(jīng)長(zhǎng)成單層的MDBK細(xì)胞,置37℃含5%CO2培養(yǎng)箱吸附2 h,然后棄掉孔中液體,加入含2%新生牛血清的MEM維持液200 μL/孔,繼續(xù)培養(yǎng)3～7 d.逐日觀察細(xì)胞CPE變化,在培養(yǎng)后的第三天,細(xì)胞出現(xiàn)70%～80%的CPE時(shí)收毒.將分離株用經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)IBR血清做中和實(shí)驗(yàn),結(jié)果加入標(biāo)準(zhǔn)血清的培養(yǎng)孔內(nèi)未出現(xiàn)CPE,而對(duì)照培養(yǎng)細(xì)胞出現(xiàn)明顯的CPE,表明該分離毒株為牛傳染性鼻氣管炎病毒.

4.4 抗體檢測(cè)

采集發(fā)病初期20只和康復(fù)牛16只的血清,應(yīng)用西班牙海博萊牛傳染性鼻氣管炎EL ISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行傳染性鼻氣管炎抗體檢測(cè),結(jié)果顯示康復(fù)牛傳染性鼻氣管炎抗體均為陽(yáng)性,其水平顯著高于發(fā)病牛 (至少4倍以上).

5 討 論

通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、尸體剖檢、細(xì)菌培養(yǎng)、病毒分離及康復(fù)犢牛及其母牛IBR抗體檢測(cè),最后確診為傳染性鼻氣管炎病毒感染,本文首次證實(shí)牛傳染性鼻氣管炎在冀西北地區(qū)的存在.奶牛飼養(yǎng)業(yè)作為張家口市的特色產(chǎn)業(yè),在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位.2008年張家口市飼養(yǎng)奶牛達(dá)到40萬(wàn)頭,而且每年仍以15%的速度增長(zhǎng),其飼養(yǎng)規(guī)?；?、集約化程度也越來(lái)越高,鑒于牛傳染性鼻氣管炎對(duì)奶牛引起較為嚴(yán)重的感染和造成重大的經(jīng)濟(jì)損失,因此今后應(yīng)對(duì)此病引起重視,加強(qiáng)對(duì)該病的防制.

對(duì)發(fā)病死亡牛的尸體必須進(jìn)行深埋等無(wú)害化處理,對(duì)污染場(chǎng)地進(jìn)行全面消毒.對(duì)有臨床癥狀的病牛采取對(duì)癥治療,可注射退熱藥和抗生素來(lái)預(yù)防其它并發(fā)癥或者采用中藥制劑進(jìn)行配合治療.對(duì)病情嚴(yán)重的牛加強(qiáng)護(hù)理,必要時(shí)進(jìn)行補(bǔ)液以防止衰竭死亡.有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)最好采用病死牛內(nèi)臟組織制備自家滅活疫苗進(jìn)行免疫接種并與藥物治療相配合,可取的更好的效果.

由于奶牛飼養(yǎng)量的快速增長(zhǎng),其種牛的引進(jìn)也十分頻繁,而且該病目前尚無(wú)有效的治療藥物,因此,在引進(jìn)種?；蛸?gòu)進(jìn)新牛的過(guò)程中必須按照規(guī)定進(jìn)行隔離觀察和血清學(xué)試驗(yàn),證明未被感染才可進(jìn)行進(jìn)場(chǎng)飼養(yǎng).進(jìn)場(chǎng)后最好進(jìn)行弱毒疫苗或滅活疫苗接種,以減少該病發(fā)生的可能.

[1] 陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué) [M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2001：473-741

[2] 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué) (第四版)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2001：243-245

[3] 周泰沖,葉章名,黎少權(quán),等.從新西蘭進(jìn)口奶牛中分離牛傳染性鼻氣管炎病毒 [J].獸醫(yī)科技雜志,1981,(01)：6-9

[4] 牛德料,孟日增,石建平.牛傳染性鼻氣管炎的防治 [J].疾病防治,2008,28(03)：51-53

[5] 張俊育,王秀建,王宏,等.某農(nóng)場(chǎng)受體牛血清中牛傳染性鼻氣管炎抗體檢測(cè) [J].黑龍江畜牧獸醫(yī),1995,(11)：28-29