馬 輝，范 青

(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第二醫(yī)院 藥劑科，遼寧 大連 116027)

丹參酮ⅡA是丹參酮脂溶性成分的代表，藥理作用極其廣泛，包括抗氧化、抗炎、心肌保護、抗腫瘤作用等[1-3]。近年來國內(nèi)外學(xué)者對其抗腫瘤作用較為關(guān)注，發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA對多種腫瘤細胞具有細胞毒作用，能抑制腫瘤細胞增殖，可誘導(dǎo)腫瘤細胞分化和凋亡，其作用機制可能與調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因、改變腫瘤細胞表面抗原表達等有關(guān)。本文就丹參酮ⅡA體內(nèi)外抗腫瘤的研究進展進行綜述。

1 丹參酮ⅡA抗腫瘤的體外實驗研究

1.1 在消化系統(tǒng)腫瘤中的研究

1.1.1 對肝癌細胞的作用：根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論，瘀血在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，而丹參是常用的活血化瘀中藥之一。不僅如此，近期的研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA作為丹參的有效提取物，能夠顯著抑制肝癌細胞生長，促進肝癌細胞凋亡，其作用機制可能與下調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、表皮生長因子(EGF)及其受體EGFR相關(guān)。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴新生血管的形成,并受VEGF等諸多細胞因子調(diào)節(jié)。符寒等[4]應(yīng)用免疫細胞化學(xué)染色及ELISA法檢測，發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA作用組肝癌細胞VEGF表達和培養(yǎng)液中VEGF分泌量明顯少于對照組。這提示丹參酮IIA可能通過下調(diào)肝癌細胞VEGF的表達及分泌，從而達到抑制腫瘤細胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用。EGF及EGFR在肝癌中存在過表達，與肝癌的形成、發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。翟學(xué)敏等[5]發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA在抑制人肝癌SMMC-7721細胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的同時，能明顯下調(diào)EGF及其受體EGFR的表達，并呈現(xiàn)一定的濃度依賴性，提示丹參酮ⅡA也可能通過抑制EGF和EGFR的表達而發(fā)揮抗腫瘤作用。

1.1.2 對胃癌細胞的作用：胃癌是較為常見的惡性腫瘤，它的特點是高發(fā)病率，侵潤，轉(zhuǎn)移，預(yù)后差等。在丹參酮ⅡA抗胃癌細胞研究中，學(xué)者較為關(guān)注凋亡相關(guān)基因以及與實體瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)，認為機制可能與降低基質(zhì)金屬蛋白酶有關(guān)。Dong X等[6]發(fā)現(xiàn)0.25～2.0 μg/ mL的TanⅡA均可明顯抑制人胃癌MKN-45細胞的增殖，并且使MKN-45細胞周期進程停滯于G2/M期，隨之對應(yīng)的是G0/G1期細胞相應(yīng)性減少。凋亡可能是通過分子水平下調(diào)Bcl-2與上調(diào)P53表達。然而正常情況下，P53蛋白以潛在形式存在并維持低水平，Bcl-2則是一種線粒體蛋白，延長細胞生存和防止細胞凋亡。此外，楊瓊等[7]研究的也是人胃癌MKN-45細胞，他們發(fā)現(xiàn)TanⅡA可降低MKN-45細胞MMP-2表達。MMP-2是一種依賴鋅離子的蛋白水解酶，其高表達同多種實體瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)，尤其在胃癌組織中表達較高。

1.1.3 對結(jié)腸癌細胞的作用：近年來，對于丹參酮ⅡA作用于結(jié)腸癌細胞的報道較少，僅有少數(shù)學(xué)者對凋亡相關(guān)基因做了較深入的研究。Su CC等[8]采用Western Blot方法檢測不同濃度丹參酮ⅡA對結(jié)腸癌colo205細胞中TNF-α、 ErbB-2及Caspase-3的表達影響。提示丹參酮ⅡA抑制colo205細胞的分子機制可能是上調(diào)TNF-α、Caspase-3的蛋白表達，下調(diào)ErbB-2的蛋白表達。后續(xù)研究顯示，丹參酮ⅡA抑制細胞生長呈劑量依賴關(guān)系，P53，P21的表達增加、線粒體細胞色素釋放增加，F(xiàn)as蛋白水平上調(diào)，這表明丹參酮ⅡA引起凋亡既通過線粒體介導(dǎo)的內(nèi)部途徑也通過Fas介導(dǎo)的外部細胞凋亡途徑[9]。

1.1.4 對膽管癌細胞的作用：膽管癌是肝膽道系統(tǒng)的第二大惡性腫瘤，預(yù)后較差，國內(nèi)外對于丹參酮ⅡA抗膽管癌報道卻很少。齊偉等[10]研究凋亡相關(guān)基因Survivin，Survivin是較強大的凋亡抑制因子，在多種腫瘤細胞中表達上調(diào)。研究對象是肝內(nèi)膽管癌HCCC-9810細胞，經(jīng)不同濃度丹參酮ⅡA作用72 h后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)5 μg/mL丹參酮ⅡA抑制細胞生長，與對照組比較差異有顯著性意義，P<0.05，并檢測到丹參酮ⅡA誘導(dǎo)凋亡與Survivin下調(diào)有關(guān)。認為，丹參酮ⅡA誘導(dǎo)膽管癌細胞凋亡的作用部分是通過Survivin通路導(dǎo)致的。

1.2 在生殖系統(tǒng)腫瘤中的研究

1.2.1 對宮頸癌細胞的作用：宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中居首位。丹參酮ⅡA抗宮頸癌的研究較多，但只是研究丹參酮ⅡA抗宮頸癌細胞的凋亡作用，其作用機制有待于進一步研究。Zhou L等[11]深入研究丹參酮ⅡA促HeLa細胞凋亡途徑。應(yīng)用亞細胞結(jié)構(gòu)分析、Western Blot、免疫熒光染色等方法研究丹參酮ⅡA對HeLa細胞的作用，與紫杉醇與長春新堿相比，發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA破壞有絲分裂紡錘體并啟動線粒體依賴的凋亡途徑，從而選擇性殺傷有絲分裂期細胞，而不損傷分裂間期細胞，且作用速度較快。丹參酮ⅡA作用宮頸癌細胞后，有絲分裂4～6 h后，細胞即出現(xiàn)凋亡，紫杉醇與長春新堿作用12 h后才有少量細胞凋亡。此發(fā)現(xiàn)為丹參酮ⅡA成為新型抗腫瘤藥物奠定基礎(chǔ)。

1.2.2 對卵巢癌細胞的作用：卵巢癌也是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤，其死亡率居婦科腫瘤首位，然而目前丹參酮ⅡA應(yīng)用于卵巢癌的研究較少。祝敏等[12]采用MTT法檢測丹參酮ⅡA對人卵巢癌A2780細胞的增殖抑制作用，流式細胞儀觀察細胞周期及凋亡。結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA對A2780細胞有明顯的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用，且其作用呈時間-劑量依賴性，細胞被阻止于G0/G1期，而S期的細胞數(shù)明顯減少，凋亡細胞明顯增加。劉偉等[13]選取凋亡中兩個重要的具有相互協(xié)調(diào)作用的基因bcl-2及bax為進一步研究對象。Bcl-2高表達可抑制凋亡而不影響細胞有絲分裂。Bax是重要的異二聚體伴分子，促進細胞凋亡。當(dāng)Bcl-2過度表達與Bax形成異二聚體時，凋亡被阻抑。Bax/Bcl-2比值則可間接代表凋亡程度。研究中顯示，與對照組相比，TanⅡA顯著抑制Bcl-2表達，同時上調(diào)Bax表達，Bax/Bcl-2比值升高。該結(jié)果為丹參酮ⅡA抗卵巢癌研究奠定基礎(chǔ)，同時亦需要進行體內(nèi)實驗研究給予進一步證實。

1.2.3 對乳腺癌細胞的作用：國內(nèi)外應(yīng)用丹參酮ⅡA對乳腺癌的研究較多，深入研究對象為凋亡相關(guān)基因p53、bax和bcl-2。Su CC等[14]發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA對人乳腺癌MDA-MB-231細胞生長和增殖的抑制具明顯的劑量-時間依賴關(guān)系；在亞G1期以劑量依賴與百分比誘導(dǎo)細胞凋亡；Bax蛋白表達上調(diào)，Bcl-2蛋白表達下調(diào)。提示丹參酮ⅡA可明顯抑制MDA-MB-231細胞，機制可能是通過上調(diào)Bax蛋白表達，下調(diào)Bcl-2蛋白表達。張蒲容等[15]也是研究丹參酮ⅡA對MDA-MB-231細胞的作用，丹參酮ⅡA處理細胞后Brdu標(biāo)記細胞明顯低于未處理組，Brdu摻入與細胞DNA合成及增殖呈正相關(guān)，表明丹參酮ⅡA可通過抑制DNA合成而抑制細胞增殖，但是與P53、CerBb-2和Bcl-2的表達水平無關(guān)，這是否提示丹參酮ⅡA可能改變?nèi)橄侔┘毎麑?nèi)分泌治療的反應(yīng)性尚需繼續(xù)深入研究。

1.3 在呼吸系統(tǒng)腫瘤中的研究

1.3.1 對肺癌細胞的作用：肺癌是當(dāng)前發(fā)病率和死亡率增長最快的惡性腫瘤，化療是治療肺癌的重要手段之一。姬郁林等[16]以多種化療藥物為陽性對照，研究丹參酮IIA體外對肺癌SPC-A-1細胞株的抑制作用及可能分子機理。發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA抑制SPC-A-1細胞的分子途徑可能是通過上調(diào)P53、P21和下調(diào)CDKN2，從而抑制其增殖DNA合成。同時，通過改變凋亡相關(guān)基因的表達而誘導(dǎo)細胞凋亡。胡海燕等[17]則檢測了bcl-2和c-myc基因的mRNA表達水平，認為分子機制是轉(zhuǎn)錄過程被抑制,使腫瘤細胞惡性增殖受抑。

1.4 在血液系統(tǒng)腫瘤中的研究

1.4.1 對白血病細胞的作用：自上個世紀(jì)80年代以來，中國學(xué)者先后發(fā)現(xiàn)全反式維甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As203)能誘導(dǎo)急性早幼粒細胞白血病(APL)細胞分化和凋亡，極大地提高了APL的完全緩解(CR)率。但是取得CR后，單用ATRA維持治療，大部分患者會出現(xiàn)復(fù)發(fā)和復(fù)發(fā)后耐藥現(xiàn)象。因此，對耐藥機制及逆轉(zhuǎn)耐藥的研究成為又一重要課題。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對于丹參酮ⅡA誘導(dǎo)APL細胞分化和凋亡較為關(guān)注，尤其是初步探討對細胞的增殖抑制作用[18]。其作用機制可能與調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因caspase-3、bcl-2、p53、c-myc及干預(yù)端粒酶活性有關(guān)[19]。相對于其他腫瘤細胞，丹參酮ⅡA對APL作用研究已取得了可喜的進展，但其臨床應(yīng)用研究尚未見報道，有待進一步探索。

2 丹參酮ⅡA抗腫瘤的體內(nèi)實驗研究

相對于丹參酮ⅡA抗腫瘤的體外實驗研究，國內(nèi)外體內(nèi)實驗研究報道較少。Su CC等[8]用結(jié)腸癌細胞colo 205接種于SCID 小鼠10 d后，每天給予丹參酮ⅡA (20 mg/kg)，連續(xù)30 d，Western Blot方法觀察TNF-α、 ErbB-2及Caspase-3的表達情況。認為丹參酮ⅡA抑制colo 205細胞的分子機制是通過上調(diào)TNF-α、Caspase-3蛋白表達，下調(diào)ErbB-2的蛋白表達。Li Q等[20]經(jīng)小鼠尾靜脈注射丹參酮ⅡA聚乳酸粒米粒治療肝癌，給藥后2 h測定其在肝組織中濃度較高，而在血液、心、腎、脾肺等臟器內(nèi)濃度較低，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其抗腫瘤效應(yīng)呈劑量-時間依賴性。同期研究提示丹參酮ⅡA治療肝癌的機制可能與抑制CyclinE表達有關(guān)，從而抑制腫瘤細胞增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡[21]。祝絢等[22]用EAC腹水癌小鼠腹水接種小鼠第2天，灌胃丹參酮ⅡA混懸液[50 mg/(kg·d),0.2 mL]，免疫組化法檢測腫瘤組織中周期蛋白CDK4及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表達，與生理鹽水對照組及阿霉素治療組比較。認為丹參酮ⅡA通過降低CDK4表達，阻止了EAC腫瘤細胞周期于G1期，使得EAC腫瘤細胞分裂增殖減少，通過增加Bcl-2/Bax比值誘導(dǎo)腫瘤細胞發(fā)生凋亡。

3 問題與展望

體內(nèi)外研究實驗表明，丹參酮ⅡA的抗腫瘤作用主要在于促進分化，抑制細胞增殖以及促進凋亡等，其作用機制可能主要是調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因caspase-3、p53、bcl-2、bax、c-myc等。丹參酮ⅡA抗各種腫瘤細胞研究已取得了可喜的進展，同時亦需要進行更多的體內(nèi)實驗研究給予進一步證實，其臨床應(yīng)用研究尚未見報道，有待進一步探索。中藥以天然自然、毒副作用小的優(yōu)勢為抗腫瘤研究提供了新的思路及方法。丹參酮ⅡA在臨床非腫瘤領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。隨著細胞生物學(xué)及分子生物學(xué)的研究進展，新的腫瘤治療途徑靶點不斷被發(fā)現(xiàn)，新的治療藥物陸續(xù)被開發(fā)出來。范青等[23]已將丹參酮制備成水包油型微乳，克服了丹參酮水溶性差，臨床應(yīng)用價值不高的問題。相信隨著對丹參酮ⅡA抗腫瘤作用的基礎(chǔ)與臨床研究的不斷深入，其有望成為一種新的抗腫瘤輔助用藥。

[1] Xu W,Yang J,Wu LM.Cardioprotective effects of tanshinone IIA on myocardial ischemia injury in rats[J].Pharmazie，2009 ,64(5):332-336.

[2] Fan GW,Gao XM,Wang H,et al.The anti-inflammatory activities of Tanshinone IIA,an active component of TCM,are mediated by estrogen receptor activation and inhibition of iNOS[J].J Steroid Biochem Mol Biol,2009,113(3-5):275-280.

[3] Kapoor S.Tanshinone IIA:a potent,natural anti-carcinogenic agent for the management of systemic malignancies [J].Chin J Integr Med,2009,15(2):153.

[4] 符寒，和水祥，徐俊麗，等.丹參酮ⅡA對肝癌細胞血管內(nèi)皮生長因子表達的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2009,30:115-118.

[5] 翟學(xué)敏，和水祥，任牡丹，等.丹參酮ⅡA對人肝癌SMMC-7721細胞EGF及其受體表達的影響[J].浙江大學(xué)學(xué)報醫(yī)學(xué)版，2009,2:163-169.

[6] Dong X,Dong J,Peng G.Growth-inhibiting and Apoptosis-inducing Effects of TanshinoneⅡA on Human Gastric Carcinoma Cells[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2007,27 (6):706-709.

[7] 楊瓊，葉再元，葉平.丹參酮ⅡA對人胃癌MKN-45細胞增殖及基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達的影響[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009,3:311-315.

[8] Su CC,Lin YH.Tanshinone IIA down-regulates the protein expression of ErbB-2 and up-regulates TNF-alpha in colon cancer cells in vitro and in vivo[J].Int J Mol Med,2008,22(6):847-851.

[9] Su CC,Chen GW,Kang JC,et al.Growth inhibition and apoptosis induction by tanshinone IIA in human colon adenocarcinoma cells[J].Planta Med,2008,74(11):1357-1362.

[10] 齊偉，黃強，王成，等.丹參酮ⅡA抑制人膽管癌細胞的生長及誘導(dǎo)其凋亡的實驗研究[J].肝膽外科雜志，2008,16(5):380-382.

[11] Zhou L,Chan WK,Xu N,et al.Tanshinone IIA,anisolated compound from Salvia miltiorrhiza Bunge,induces apoptosis in HeLa cells through mitotic arrest[J].Life Sci,2008,83 (11-12):394-403.

[12] 祝敏，陳萍，陳丹，等.丹參酮ⅡA對人卵巢癌A2780細胞增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用[J].中國中醫(yī)急癥，2007,18(4):596-597.

[13] 劉偉，陳昊.丹參酮ⅡA對人卵巢癌細胞株CAOV3增殖與凋亡的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2007,26 (12):1398-1400.

[14] Su CC,Lin YH.Tanshinone IIA inhibits human breast cancer cells through increased Bax to Bcl-xL ratios[J].Int J Mol Med,2008,22(3):357-361.

[15] 張蒲容，呂青.丹參酮ⅡA抗乳腺癌作用機制的實驗研究[J].四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2009,40(2):245-249.

[16] 姬郁林，何金濤，周清華，等.丹參酮對人肺癌細胞株的抑制作用及其分子機理[J].中國肺癌雜志，2008,11(2):202-205.

[17] 胡海燕，張洹，黃峰，等.丹參酮ⅡA對NCI-H460肺癌細胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用[J].中藥材，2005,28(4):301-304.

[18] 杜睿，鄭鴻，王艷萍，等.丹參酮ⅡA誘導(dǎo)白血病NB4細胞分化分子機制研究[J].中國中藥雜志，2008,33(24):2954-2958.

[19] 景莉，王秦，李曉明.丹參酮ⅡA對急性早幼粒細胞白血病作用的研究進展[J].中國藥房，2006,17(12):942-943.

[20] Li Q,Wang Y,Feng N,et al.Novel polymeric nanoparticles containing tanshinone IIA for the treatment of hepatoma[J].J Drug Target,2008,16(10):725-732.

[21] 王炎，李琦，馮年平，等.丹參酮ⅡA納米粒治療小鼠肝癌及其對Cyclin E表達的影響[J].上海中醫(yī)藥雜志，2007,41(9):74-77.

[22] 祝絢，鮑依稀，李進，等.云芝糖肽、丹參酮ⅡA對荷瘤小鼠的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用[J].中醫(yī)中藥與免疫，2008,24:526-529.

[23] 范青，范廣俊，楊佩滿，等.丹參酮微乳逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞多藥耐藥的研究[J].中國中藥雜志， 2004，29(11):1079-1081.