萬(wàn)鼎銘，索金艷，孫 慧，孫 玲，謝新生，王桂菊，姜中興，袁小庚，成 琳

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科鄭州450052

△男，1963年5月生，博士，主任醫(yī)師，教授，研究方向:造血干細(xì)胞移植及血液病的基礎(chǔ)與臨床，E-mail:wwddmm@vip.sina.com

近年來(lái)外周血造血干細(xì)胞移植(peripheral blood stem cell transplantation，PBSCT)已在臨床上廣泛應(yīng)用，有取代骨髓移植的趨勢(shì)。移植后造血重建主要取決于輸入造血干細(xì)胞的數(shù)量與質(zhì)量，但迄今為止尚未發(fā)現(xiàn)造血干細(xì)胞的特異性標(biāo)志，不能直接對(duì)造血干細(xì)胞定量，只能用相關(guān)間接指標(biāo)預(yù)測(cè)造血重建。預(yù)示造血重建的主要指標(biāo)有移植物中單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cells，MNC)計(jì)數(shù)、CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)和集落形成單位(colony forming unit，CFU)測(cè)定［1-2］。CFU測(cè)定耗時(shí)較長(zhǎng)，且重復(fù)性差，因此臨床上多采用輸入MNC和CD34+細(xì)胞數(shù)量來(lái)預(yù)測(cè)移植后造血重建?，F(xiàn)就鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院的同胞相合異基因PBSCT 35例的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，探討輸入MNC和CD34+細(xì)胞數(shù)量與造血重建的相關(guān)性。

1 臨床資料

1.1 一般資料 35例均為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2003年3月至2009年7月住院PBSCT患者，男19例，女16例，年齡6～49歲，中位年齡32歲，其中慢性粒細(xì)胞白血病(慢性期)10例，慢性粒細(xì)胞白血病急淋變1例，急性淋巴細(xì)胞白血病7例(CR1)，急性髄系白血病14例(M12例，M28例，M42例，M52例，均為第1次完全緩解)，高危骨髓增生異常綜合征3例。診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)文獻(xiàn)［3］。

1.2 觀察方法 35例患者行同胞相合異基因PBSCT，均應(yīng)用改良BU/CY預(yù)處理方案［4］。移植前5 d供者開(kāi)始皮下注射粒細(xì)胞集落刺激因子(rhGCSF)5μg·kg－1·d－1，于移植當(dāng)天使用 COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)無(wú)菌采集、分離外周血造血干細(xì)胞后直接回輸。應(yīng)用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。同時(shí)涂片2張進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。MNC數(shù)量=WBC×MNC%×移植物容積，其中MNC%取2次均值。流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34+細(xì)胞數(shù)量。每個(gè)受者輸入移植物中MNC數(shù)量≥2.0×108kg－1，并根據(jù)相應(yīng)CD34+細(xì)胞數(shù)量分為A和B組，A組CD34+細(xì)胞數(shù)量≥2×106kg－1，B組＜2×106kg－1，但＞1×106kg－1。移植后每日查血常規(guī)，觀察中性粒細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)情況，連續(xù)3 d中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)≥0.5×109L－1及連續(xù)7 d不輸血小板的情況下血小板計(jì)數(shù)≥20×109L－1為造血重建標(biāo)準(zhǔn)。移植后第60天及第100天分別經(jīng)DNA指紋、ABO血型及性別染色體等證實(shí)造血重建成功與否。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)2組造血重建時(shí)間進(jìn)行方差齊性及t檢驗(yàn)，對(duì)2組造血重建成功率行χ2檢驗(yàn)及確切概率法;MNC和 CD34+細(xì)胞數(shù)量分布不符合正態(tài)分布，2者間相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析;檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

1.4 結(jié)果 輸入移植物中MNC數(shù)量(2.37～13.40)×108kg－1，每例均超過(guò)移植閾值2×108kg－1，相應(yīng)CD34+細(xì)胞數(shù)量(1.01～15.60)×106kg－1。A組24例，CD34+細(xì)胞數(shù)量(3.86～15.60)×106kg－1; B組11例，CD34+細(xì)胞數(shù)量(1.01～1.98)×106kg－1。2組造血重建時(shí)間及成功率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。35例輸入MNC數(shù)量和CD34+細(xì)胞數(shù)量間呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.650，P＜0.001)。

表1 2組造血重建情況的比較

2 討論

PBSCT造血重建成功的關(guān)鍵在于輸入的造血干細(xì)胞的質(zhì)量和數(shù)量。因此尋求能快速準(zhǔn)確判斷移植物中造血干細(xì)胞含量的方法有重要臨床意義。目前臨床上廣泛利用輸入移植物中MNC數(shù)量和CD34+細(xì)胞數(shù)量預(yù)測(cè)外周血移植物中造血干細(xì)胞數(shù)量及移植后造血重建，在同胞相合PBSCT中以輸入移植物中MNC數(shù)量≥(2.0～4.0)×108kg－1、CD34+細(xì)胞數(shù)量≥(2.0～4.0)×106kg－1作為保證植入成功的閾值。作者的研究結(jié)果顯示:在輸入移植物中MNC數(shù)量≥2×108kg－1時(shí)，CD34+細(xì)胞數(shù)量≥2×106kg－1組和1×106kg－1≤CD34+細(xì)胞數(shù)量＜2×106kg－1組均能獲得穩(wěn)定的造血重建，2組中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及血小板計(jì)數(shù)恢復(fù)時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明在MNC計(jì)數(shù)達(dá)到2×108kg－1以上的情況下，只要輸入CD34+細(xì)胞數(shù)量達(dá)到1×106kg－1以上，就能預(yù)測(cè)移植后穩(wěn)定造血重建。提示在同胞相合PBSCT中，移植物MNC數(shù)量≥2×108kg－1同時(shí)CD34+細(xì)胞數(shù)量≥1×106kg－1與造血重建有良好的相關(guān)性，可以作為預(yù)測(cè)造血重建的有效指標(biāo)。作者還發(fā)現(xiàn)，輸入MNC和CD34+細(xì)胞數(shù)量之間呈正相關(guān)關(guān)系，與劉旭輝等［5］的研究結(jié)果一致。MNC計(jì)數(shù)比需要流式細(xì)胞儀檢測(cè)的CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)穩(wěn)定性更好，簡(jiǎn)便易行，速度快，因此在不能檢測(cè)CD34+細(xì)胞的醫(yī)院，輸入MNC數(shù)量可用作移植后造血重建的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

以往認(rèn)為CD34是造血干細(xì)胞的標(biāo)志，但目前證實(shí)CD34－的造血干細(xì)胞才具有完整的造血重建能力，而 CD34－造血干細(xì)胞能轉(zhuǎn)化成 CD34+細(xì)胞［6］。MNC成分復(fù)雜，其中大部分是CD34－細(xì)胞，只包含了少量的CD34+細(xì)胞，小鼠MNC起始培養(yǎng)和CD34+細(xì)胞起始培養(yǎng)的研究顯示均有體內(nèi)造血重建能力，且差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用處于DNA合成期的MNC計(jì)數(shù)作為采集物中造血干細(xì)胞的質(zhì)量指標(biāo)比CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)更快捷，結(jié)果更穩(wěn)定［7］。因此更為準(zhǔn)確的造血干細(xì)胞標(biāo)志及預(yù)測(cè)移植后造血重建的指標(biāo)仍需進(jìn)一步探索。

［1］To LB，Haylock DN，Simmons PJ，et al.The biology and clinical uses of blood stem cells［J］.Blood，1997，89(7):2 233

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［3］張之南.血液病診斷與療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.3版.北京:科學(xué)出版社，2007.

［4］萬(wàn)鼎銘，康軼青，孫慧，等.改良Bu/CY預(yù)處理方案行異基因造血干細(xì)胞移植治療惡性血液病的臨床研究［J］.中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志，2009，29(7):648

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［6］翟瓊莉，劉燕.造血干細(xì)胞的兩種形式:CD34+和CD34－［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué):免疫學(xué)分冊(cè)，2002，25(5):253

［7］王亞平.造血干細(xì)胞生物學(xué)及其研究方法［M］.北京:科學(xué)出版社，2006:97